水稻品種DNA指紋檢測及其應(yīng)用2012-1課件

水稻品種SSR指紋圖譜及其應(yīng)用實驗?zāi)康膶W(xué)習(xí)SSR指紋圖譜的構(gòu)建原理與方法應(yīng)用SSR指紋圖譜進行水稻品種的鑒別實驗原理1、生物具有豐富的遺傳多樣性，并在個體形態(tài)上表現(xiàn)出千姿百態(tài)。2、DNA分子標記技術(shù)的發(fā)展，使得在DNA分子水平揭示生物的遺傳多樣性成為可能。（穩(wěn)定性好、不受環(huán)境和發(fā)育時期限制等多方面優(yōu)越性）3、DNA指紋圖譜（條碼技術(shù)）能有效鑒別不同生物物種或同一物種的不同基因型。4、常用的幾種DNA分子標記：1）RFLP2）AFLP3）RAPD4）SSR5）SCAR：sequencecharacterizedamplifiedregion6）CAPS：cleavedamplifiedpolymorphicsequence7）InDelSSR的PCR擴增及電泳檢測

一般為共顯性，在F2群體中，理論上[A]：[AB]：[B]=1：2：1

ABABBABA…………

標記等位基因的識別與標識RM267多態(tài)性RM522單態(tài)性標記RM552多態(tài)性ABCABDC表1不同基因型SSR指紋圖譜示例標記基因型M1M2M3M4M5M6M7M8M9…P1ABBABCABFP2CBAADDBACP3BBADCFEBAP4EBADCBBAB影響指紋圖譜特異性的主要因素：1、生物內(nèi)在的遺傳多樣性2、標記的多態(tài)性3、標記的數(shù)目實驗材料1、2個雜交稻品種及其4個親本品種1）紅蓮優(yōu)6號（粵泰A/揚稻6號）2）兩優(yōu)培九（培矮64S/93-11）3）P14）P25）P36）P42、6個SSR標記（見右表）3、分組：1）4人一組，用2個標記分別對6個水稻品種進行PCR擴增2）每3個小組的實驗結(jié)果整合到一起，用于實驗報告的撰寫Chr.標記標記編號Chr.1RM212標記1Chr.2RM263標記2Chr.7RM505標記3Chr.2RM525標記4Chr.7RM234標記5Chr.2RM202標記6實驗方法

反應(yīng)因子單個反應(yīng)體積（μl）9個反應(yīng)用量（μl）1、ddH2O10.090.02、10×buff2.018.03、25mMMgCl21.816.24、10mMdNTPs1.09.05、5uMprimer2.018.06、5U/ulTaq酶0.21.8(分裝前先離心)7、DNA模板3.0

1、PCR反應(yīng)體系配制：在0.5ml離心管中配制反應(yīng)混合液1)先按9個反應(yīng)所需量配制因子1-6的混合液，瞬時離心混勻2)將混合液分裝到6個反應(yīng)管中，每管17μl3)向每管分別添加6個水稻品種的DNA模板，4)再向每管各加1小滴礦物油，瞬時離心5)按標記（每標記1列）將反應(yīng)管安放到PCR儀上每個標記分別在1個0.5ml離心管中配制反應(yīng)混合液1）制膠：用1×TAE液配制4%瓊脂糖凝膠70ml+10ulGoldViewer2）點樣：每管加入2ul溴酚蘭加樣緩沖液，瞬時離心。取10ul擴增產(chǎn)物點樣

(請注意點樣順序)3）電泳：穩(wěn)壓（100V），電泳1.5h4）觀察：紫外燈下觀察電泳結(jié)果3、瓊脂糖凝膠電泳多態(tài)性標記的篩選4、實驗結(jié)果分析特別提示

實驗報告務(wù)必有圖片

PCR試劑準備1、每3個小組（12人）共用1套試劑（實際反應(yīng)數(shù)36個）（PCR試劑各提供72個反應(yīng)需用量，6對引物各提供12個反應(yīng)需用量）2、4個班合計173人，共提供16套PCR試劑3、每套PCR試劑提供量（見下表）PCR試劑72個反應(yīng)需用量每套試劑實際提供量1、ddH2O10*72=720ul1500ul2、10×buffer2.0*72=144ul180ul3、25mMMgCl21.8*72=130ul150ul4、10mMdNTP