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怎樣寫讀書報(bào)告文志斌博士,教授中南大學(xué)湘雅醫(yī)學(xué)院生理學(xué)系現(xiàn)在是1頁\一共有43頁\編輯于星期六一、如何制作PPT才美觀口訣:三七二十四現(xiàn)在是2頁\一共有43頁\編輯于星期六3,是指一張片中不要超過三種顏色強(qiáng)心苷的作用機(jī)制NKANCEAP2K+3Na+[K+]i[Na+]i[Ca2+]i[Na+]i[Ca2+]iNAK=Na+-K+-ATP酶AP=動(dòng)作電位NCE=鈉鈣雙向交換現(xiàn)在是3頁\一共有43頁\編輯于星期六3,是指一張片中不要超過三種顏色強(qiáng)心苷的作用機(jī)制NKANCEAP2K+3Na+[K+]i[Na+]i[Ca2+]i[Na+]i[Ca2+]iNAK=Na+-K+-ATP酶AP=動(dòng)作電位NCE=鈉鈣雙向交換現(xiàn)在是4頁\一共有43頁\編輯于星期六7,是指一張片中不要超過七行字
CO中毒時(shí),CO血紅蛋白、肌紅蛋白及細(xì)胞色素a1,a3、結(jié)合造成機(jī)體廣泛缺氧和能量缺乏,使細(xì)胞膜的通透性增強(qiáng)或細(xì)胞破損,造成細(xì)胞外水腫。由于大腦對氧的需求量大,氧儲備極少,所以大腦對CO中毒影響最為敏感,對缺氧的耐受性差,并首先受累。缺氧引起顱內(nèi)壓增高,同時(shí),缺氧和腦水腫,造成腦血液循環(huán)障礙,引起昏迷;而血管吻合支較少和血管水腫、結(jié)構(gòu)不健全的蒼白球可出現(xiàn)軟化、壞死、或白質(zhì)廣泛性脫髓鞘病變,產(chǎn)生帕金森氏綜合征和一系列精神癥狀。由于腦白質(zhì)與皮質(zhì)的血供之比為1:4,因而缺氧對白質(zhì)的損害相對重些。部分重癥CO中毒患者,在意識障礙恢復(fù)后,經(jīng)過約2~60天的假愈期后又出現(xiàn)精神意識障礙、錐體外系神經(jīng)障礙、錐體系神經(jīng)損害、大腦皮質(zhì)局灶性功能障、周圍神經(jīng)炎等,即產(chǎn)生了遲發(fā)性腦病的癥狀。分析原因很多專家考慮髓鞘脫失,經(jīng)過2~60天的發(fā)展,由量變到質(zhì)變以至發(fā)展到白質(zhì)中的上下傳導(dǎo)束嚴(yán)重?fù)p害,不能維持正常的運(yùn)動(dòng)感覺機(jī)能和網(wǎng)狀上行激活系統(tǒng)的功能。高壓氧能達(dá)到常壓下不能達(dá)到的氧分壓,使氧的儲藏量、氧的穿透力和物理溶解氧的量發(fā)生顯著增加,從而對許多疾病的治療效果起到一個(gè)質(zhì)的飛躍。根據(jù)亨利(Henry)定律:在某一溫度下,氣體在液體中的溶解量與該氣體分壓成正比。即某氣體分壓越高,則溶解于血漿和組織液中的氣體越多。現(xiàn)在是5頁\一共有43頁\編輯于星期六7,是指一張片中不要超過七行字
CO中毒時(shí),CO血紅蛋白、肌紅蛋白及細(xì)胞色素a1,a3、結(jié)合造成機(jī)體廣泛缺氧和能量缺乏,使細(xì)胞膜的通透性增強(qiáng)或細(xì)胞破損,造成細(xì)胞外水腫。由于大腦對氧的需求量大,氧儲備極少,所以大腦對CO中毒影響最為敏感,對缺氧的耐受性差,并首先受累。缺氧引起顱內(nèi)壓增高,同時(shí),缺氧和腦水腫,造成腦血液循環(huán)障礙,引起昏迷?,F(xiàn)在是6頁\一共有43頁\編輯于星期六24,是指字體要超過24號
CO中毒時(shí),CO血紅蛋白、肌紅蛋白及細(xì)胞色素a1,a3、結(jié)合造成機(jī)體廣泛缺氧和能量缺乏,使細(xì)胞膜的通透性增強(qiáng)或細(xì)胞破損,造成細(xì)胞外水腫。由于大腦對氧的需求量大,氧儲備極少,所以大腦對CO中毒影響最為敏感,對缺氧的耐受性差,并首先受累。缺氧引起顱內(nèi)壓增高,同時(shí),缺氧和腦水腫,造成腦血液循環(huán)障礙,引起昏迷;而血管吻合支較少和血管水腫、結(jié)構(gòu)不健全的蒼白球可出現(xiàn)軟化、壞死、或白質(zhì)廣泛性脫髓鞘病變,產(chǎn)生帕金森氏綜合征和一系列精神癥狀。由于腦白質(zhì)與皮質(zhì)的血供之比為1:4,因而缺氧對白質(zhì)的損害相對重些。部分重癥CO中毒患者,在意識障礙恢復(fù)后,經(jīng)過約2~60天的假愈期后又出現(xiàn)精神意識障礙、錐體外系神經(jīng)障礙、錐體系神經(jīng)損害、大腦皮質(zhì)局灶性功能障、周圍神經(jīng)炎等,即產(chǎn)生了遲發(fā)性腦病的癥狀。分析原因很多專家考慮髓鞘脫失,經(jīng)過2~60天的發(fā)展,由量變到質(zhì)變以至發(fā)展到白質(zhì)中的上下傳導(dǎo)束嚴(yán)重?fù)p害,不能維持正常的運(yùn)動(dòng)感覺機(jī)能和網(wǎng)狀上行激活系統(tǒng)的功能。高壓氧能達(dá)到常壓下不能達(dá)到的氧分壓,使氧的儲藏量、氧的穿透力和物理溶解氧的量發(fā)生顯著增加,從而對許多疾病的治療效果起到一個(gè)質(zhì)的飛躍。根據(jù)亨利(Henry)定律:在某一溫度下,氣體在液體中的溶解量與該氣體分壓成正比。即某氣體分壓越高,則溶解于血漿和組織液中的氣體越多?,F(xiàn)在是7頁\一共有43頁\編輯于星期六
CO中毒時(shí),CO血紅蛋白、肌紅蛋白及細(xì)胞色素a1,a3、結(jié)合造成機(jī)體廣泛缺氧和能量缺乏,使細(xì)胞膜的通透性增強(qiáng)或細(xì)胞破損,造成細(xì)胞外水腫。由于大腦對氧的需求量大,氧儲備極少,所以大腦對CO中毒影響最為敏感,對缺氧的耐受性差,并首先受累。缺氧引起顱內(nèi)壓增高,同時(shí),缺氧和腦水腫,造成腦血液循環(huán)障礙,引起昏迷;而血管吻合支較少和血管水腫、結(jié)構(gòu)不健全的蒼白球可出現(xiàn)軟化、壞死、或白質(zhì)廣泛性脫髓鞘病變,產(chǎn)生帕金森氏綜合征和一系列精神癥狀。由于腦白質(zhì)與皮質(zhì)的血供之比為1:4,因而缺氧對白質(zhì)的損害相對重些。部分重癥CO中毒患者,在意識障礙恢復(fù)后,經(jīng)過約2~60天的假愈期后又出現(xiàn)精神意識障礙、錐體外系和錐體系神經(jīng)損害等,即產(chǎn)生了遲發(fā)性腦病的癥狀。現(xiàn)在是8頁\一共有43頁\編輯于星期六最后,將字體加粗
盡量多用黑體字最后,將字體加粗
盡量多用黑體字現(xiàn)在是9頁\一共有43頁\編輯于星期六母板和字體的選擇白底、黑字藍(lán)底、白字現(xiàn)在是10頁\一共有43頁\編輯于星期六不要整版整版的展現(xiàn)內(nèi)容現(xiàn)在是11頁\一共有43頁\編輯于星期六不要整版整版的展現(xiàn)內(nèi)容標(biāo)題和分標(biāo)題要斷好行高壓氧治療一氧化碳中
毒的機(jī)理淺析高壓氧治療一氧化碳中毒的
機(jī)理淺析現(xiàn)在是12頁\一共有43頁\編輯于星期六反應(yīng)條件為:94℃變性5min,再以94℃變性50s,55℃退火50s,72℃延伸1min,30個(gè)循環(huán),最后再72℃延伸5min。內(nèi)容的展現(xiàn),不要用“飛入”形式1材料與方法1.1人新鮮臍帶由湖南省婦幼保健院提供。1.2藥物與試劑略。1.3人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞的培養(yǎng)用1640培養(yǎng)基常規(guī)培養(yǎng)。以Ⅷ因子相關(guān)抗原免疫組化染色陽性,證實(shí)為內(nèi)皮細(xì)胞。1.4細(xì)胞凍融液促凝活性(PCA)的檢測采用一期凝固法。1.5
TF抗原測定采用雙夾心ELISA法,具體過程依為ADI試劑盒說明進(jìn)行。1.6
TFmRNA檢測用PCR法檢測?,F(xiàn)在是13頁\一共有43頁\編輯于星期六反應(yīng)條件為:94℃變性5min,再以94℃變性50s,55℃退火50s,72℃延伸1min,30個(gè)循環(huán),最后再72℃延伸5min。內(nèi)容的展現(xiàn),不要用“飛入”形式1材料與方法1.1人新鮮臍帶由湖南省婦幼保健院提供。1.2藥物與試劑略。1.3人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞的培養(yǎng)用1640培養(yǎng)基常規(guī)培養(yǎng)。以Ⅷ因子相關(guān)抗原免疫組化染色陽性,證實(shí)為內(nèi)皮細(xì)胞。1.4細(xì)胞凍融液促凝活性(PCA)的檢測采用一期凝固法。1.5
TF抗原測定采用雙夾心ELISA法,具體過程依為ADI試劑盒說明進(jìn)行。1.6
TFmRNA檢測用PCR法檢測?,F(xiàn)在是14頁\一共有43頁\編輯于星期六二、怎么查文獻(xiàn)不要用百度要從專業(yè)網(wǎng)站上查現(xiàn)在是15頁\一共有43頁\編輯于星期六現(xiàn)在是16頁\一共有43頁\編輯于星期六現(xiàn)在是17頁\一共有43頁\編輯于星期六現(xiàn)在是18頁\一共有43頁\編輯于星期六現(xiàn)在是19頁\一共有43頁\編輯于星期六現(xiàn)在是20頁\一共有43頁\編輯于星期六現(xiàn)在是21頁\一共有43頁\編輯于星期六現(xiàn)在是22頁\一共有43頁\編輯于星期六三、讀書報(bào)告的基本格式現(xiàn)在是23頁\一共有43頁\編輯于星期六(一)首張1.論文標(biāo)題2.報(bào)告者姓名3.報(bào)告者單位現(xiàn)在是24頁\一共有43頁\編輯于星期六川芎嗪抑制腫瘤壞死因子α誘導(dǎo)人臍靜脈血管內(nèi)皮細(xì)胞組織因子
表達(dá)的機(jī)制研究20XX級專升本X班吳衛(wèi)國現(xiàn)在是25頁\一共有43頁\編輯于星期六(二)前言簡要介紹相關(guān)背景
研究目的現(xiàn)在是26頁\一共有43頁\編輯于星期六川芎嗪(tetramethylpyrazine,TMP)是從中藥川芎中分離提純出來的一種生物堿單體,其化學(xué)結(jié)構(gòu)為四甲基吡嗪。近年來,對川芎嗪藥理學(xué)研究主要集中于抗氧自由基損傷、抗脂質(zhì)過氧化、鈣通道阻滯、改善微循環(huán)等[1]。本室前期工作表明川芎嗪可顯著阻斷TNFα所誘導(dǎo)的內(nèi)皮細(xì)胞組織因子(tissuefactor,TF)表達(dá)。但是,川芎嗪阻斷TNFα所致內(nèi)皮細(xì)胞TF表達(dá)的機(jī)制如何罕見報(bào)道。本研究通過體外培養(yǎng)人臍靜脈血管內(nèi)皮細(xì)胞(humanumbilicalveinendothelialcells,HUVEC),觀察川芎嗪抑制TNFα致TF表達(dá)的細(xì)胞信號轉(zhuǎn)導(dǎo)機(jī)制,為臨床防治心腦血管血栓性疾病提供理論及實(shí)驗(yàn)基礎(chǔ)?,F(xiàn)在是27頁\一共有43頁\編輯于星期六川芎嗪(TMP)是從中藥川芎中分離提純出來的一種生物堿單體,其化學(xué)結(jié)構(gòu)為四甲基吡嗪。近年來,對川芎嗪藥理學(xué)作用進(jìn)行了大量的研究。本室前期工作表明川芎嗪可顯著阻斷TNFα所誘導(dǎo)的內(nèi)皮細(xì)胞組織因子(TF)表達(dá)。但是,川芎嗪阻斷TNFα所致內(nèi)皮細(xì)胞TF表達(dá)的機(jī)制如何罕見報(bào)道。本研究通過體外培養(yǎng)人臍靜脈血管內(nèi)皮細(xì)胞(HUVEC),觀察川芎嗪抑制TNFα致TF表達(dá)的細(xì)胞信號轉(zhuǎn)導(dǎo)機(jī)制,為臨床防治心腦血管血栓性疾病提供理論及實(shí)驗(yàn)基礎(chǔ)。現(xiàn)在是28頁\一共有43頁\編輯于星期六(三)材料與方法1材料與方法1.1人新鮮臍帶由湖南省婦幼保健院提供。1.2藥物與試劑川芎嗪購自北京第四制藥廠,批號:961048,規(guī)格2ml:40mg。TNFα為北京邦定公司產(chǎn)品;乏FⅦ血漿和TF抗原測定試劑盒購自美國ADI公司;TF單抗(T59-SB7)由美國MorrisseyJH惠贈;Staurosporine和PMA為Sigma公司產(chǎn)品;NF-κB多抗及SABC免疫組化試劑盒購自武漢博士德生物工程公司;III-S型組蛋白、32P-ATP購自北京亞輝生物醫(yī)學(xué)工程公司。1.3人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞的培養(yǎng)用0125%的胰蛋白酶灌注消化臍靜脈后,離心收集內(nèi)皮細(xì)胞,調(diào)整細(xì)胞濃度在3×108個(gè)/L,接種于012%明膠包被的75cm2培養(yǎng)瓶,置于37℃,5%CO2飽和濕度的孵箱中培養(yǎng),每2天換液1次,培養(yǎng)液為含20%新生牛血清的RPMI-1640。待細(xì)胞長滿2/3瓶底后進(jìn)行傳代。倒置相差顯微鏡觀察HUVECs為呈鋪路石狀的單層多角型細(xì)胞,Ⅷ因子相關(guān)抗原免疫組化染色陽性,證實(shí)為內(nèi)皮細(xì)胞。1.4細(xì)胞凍融液促凝活性(PCA)的檢測采用一期凝固法。細(xì)胞培養(yǎng)后,于37℃/-80℃反復(fù)凍融3次,以獲取細(xì)胞凍融液。取凍融液100μl,加入正常人混合血漿100μl,37℃溫育3min,然后加入01025mol/LCaCl2100μl,計(jì)錄凝固時(shí)間(PT)。以56℃處理過的兔腦凝血活酶(富含TF與磷脂),用生理鹽水作不同濃度稀釋后,測定PT,以凝固時(shí)間為36s定義為1000mU,以PT為橫軸,兔腦凝血活酶的活性為縱軸建立標(biāo)準(zhǔn)曲線,待測細(xì)胞凍融液PCA即可從標(biāo)準(zhǔn)曲線中求得。1.5
TF抗原測定采用雙夾心ELISA法,其原理是吸附在固體測定板上的多克隆抗體與被測抗原結(jié)合,加入酶連接的單克隆抗體與已被多克隆抗體結(jié)合的抗原結(jié)合,最后加入生色底物,在酶標(biāo)儀上測定含量。具體過程依為AmericanDiagnosticInc試劑盒說明進(jìn)行。1.6
TFmRNA檢測用Trizol試劑一步法提總RNA,紫外分光光度計(jì)檢測濃度和純度,合成cDNA,進(jìn)行PCR反應(yīng)。TF正義鏈為5′-CTACTGTTTCAGTGT2TCAAGCAGTGA-3;反義鏈為5′-CAGTGCAATATAG2CATTTGCAGTAGC-3,擴(kuò)增產(chǎn)物為182bp片斷,以GAPDH作為內(nèi)參照,正義鏈為5′-GTCAGTGGTGGACCTGACCT-3;反義鏈為5′-TGAGGAGGGGAGATTCAGTG-3,擴(kuò)增產(chǎn)物為400bp。反應(yīng)條件為:94℃變性5min,再以94℃變性50s,55℃退火50s,72℃延伸1min,30個(gè)循環(huán),最后再72℃延伸5min。
現(xiàn)在是29頁\一共有43頁\編輯于星期六1.7
PKC活性測定bufferA組成Tris-HCl20nmol/L(pH715),210mmol/LEDTA,015mmol/L乙二醇雙(2-氨基乙醚)四乙酸,2mmol/L苯甲硫酰氟化物,25μg/ml亮抑蛋白酶肽,0133mol/L蔗糖。用磷酸緩沖液(PBS)和bufferA各洗滌細(xì)胞兩次,洗滌后的細(xì)胞加入5mlbufferA并從培養(yǎng)瓶上刮下細(xì)胞。用玻璃勻漿器于冰浴中制勻漿,離心30min(100000r/min),上清液作為PKC檢測的細(xì)胞漿部分。沉淀部分用bufferA再懸浮和洗滌,離心60min(100000r/min),棄上清,沉淀部分加入5ml含012%TritonX-100的bufferA進(jìn)行懸浮,于0℃搖動(dòng)孵育1h,再離心60min(100000r/min),上清液作為PKC檢測的細(xì)胞膜部分。以Bradford法測定各部分蛋白質(zhì)含量。以Ⅲ-S型組蛋白為底物,在反應(yīng)體系中加入γ32P-ATP,通過測定底物的磷酸化分別測定胞漿及胞膜PKC活性高低。1.8
NF-κB的免疫組織化學(xué)染色培養(yǎng)的細(xì)胞以PBS洗2次后,浸入95%乙醇中固定15min,PBS漂洗2min×3次,新配的3%過氧化氫滅活內(nèi)源性過氧化酶,洗片后,10%山羊血清37℃封閉20min,傾去血清,滴加兔抗人NF-κB多抗,以常規(guī)ABC方法進(jìn)行免疫組織化學(xué)染色:滴加生物素化的羊抗兔IgG及生物素辣根過氧化物酶復(fù)合物(ABC),DAB呈色,封片后,鏡檢。1.9統(tǒng)計(jì)學(xué)方法采用Instat儲存和分析數(shù)據(jù)。組間均數(shù)比較用t檢驗(yàn),多組間比較用方差分析,行q檢驗(yàn)??茨銜灢粫灒‖F(xiàn)在是30頁\一共有43頁\編輯于星期六1材料與方法1.1人新鮮臍帶由湖南省婦幼保健院提供。1.2藥物與試劑略。1.3人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞的培養(yǎng)用1640培養(yǎng)基常規(guī)培養(yǎng)。以Ⅷ因子相關(guān)抗原免疫
組化染色陽性,證實(shí)為內(nèi)皮細(xì)胞。1.4細(xì)胞凍融液促凝活性(PCA)的檢測采用一期凝固法。1.5
TF抗原測定采用雙夾心ELISA法,具體過程依為ADI試劑盒說明進(jìn)行。1.6
TFmRNA檢測用PCR法檢測。反應(yīng)條件為:94℃變性5min,再以94℃變性50s,55℃退火50s,72℃延伸1min,30個(gè)循環(huán),最后再72℃延伸5min。材料與方法現(xiàn)在是31頁\一共有43頁\編輯于星期六1.7
PKC活性測定以Bradford法測定各部分蛋白質(zhì)含量(通過測定底物的磷酸化分別測定胞漿及胞膜PKC活性高低)。1.8
NF-κB的檢測用免疫組織化學(xué)染色(培養(yǎng)的細(xì)胞用乙醇中固定和洗片后,10%山羊血清37℃封閉,滴加兔抗人NF-κB多抗,以常規(guī)ABC方法進(jìn)行免疫組織化學(xué)染色:滴加生物素化的羊抗兔IgG及生物素辣根過氧化物酶復(fù)合物(ABC),DAB呈色,封片后,鏡檢)。1.9統(tǒng)計(jì)學(xué)方法組間均數(shù)比較用t檢驗(yàn),多組間比較用方差分析,行q檢驗(yàn)?,F(xiàn)在是32頁\一共有43頁\編輯于星期六(四)實(shí)驗(yàn)結(jié)果現(xiàn)在是33頁\一共有43頁\編輯于星期六實(shí)驗(yàn)結(jié)果現(xiàn)在是34頁\一共有43頁\編輯于星期六實(shí)驗(yàn)結(jié)果2.1內(nèi)皮細(xì)胞的鑒定(原代培養(yǎng)的人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞呈單層生長,互不重疊,細(xì)胞呈多角形或短梭形,鋪路石狀鑲嵌排列,邊界清楚)。(臺盼藍(lán)染色顯示98%以上實(shí)驗(yàn)用細(xì)胞為活細(xì)胞)。
FⅧ間接免疫熒光鑒定,陽性率98%以上的細(xì)胞呈陽性染色,證實(shí)其為內(nèi)皮細(xì)胞。現(xiàn)在是35頁\一共有43頁\編輯于星期六
2.2TMP對TNF誘導(dǎo)內(nèi)皮細(xì)胞TF表達(dá)與PKC途徑的關(guān)系
PKC阻斷劑Staurosporine單獨(dú)對內(nèi)皮細(xì)胞TFmRNA、活性及抗原無影響(P>0105);PKC激動(dòng)劑佛波酯可明顯提高TFmRNA、活性及抗原的表達(dá)(P<0101);TMP預(yù)處理后再加入TNFα作用2h及6h,與Staurosporine預(yù)處理相似:
TMP可明顯抑制TNFα誘導(dǎo)的內(nèi)皮細(xì)胞mRNA、活性及抗原的增加(P<0101)現(xiàn)在是36頁\一共有43頁\編輯于星期六(五)討論和(或)結(jié)論現(xiàn)在是37頁\一共有43頁\編輯于星期六現(xiàn)在是38頁\一共有43頁\編輯于星期六現(xiàn)在是39頁\一共有43頁\編輯于星期六1.
TNFα能誘導(dǎo)HUVECTF的表達(dá);結(jié)論2.PKC及NF-κB的活化在TNFα誘導(dǎo)HUVECTF的表達(dá)中發(fā)揮著重要的作用;3.TMP通過影響PKC途徑及NF-κB的活化來抑制TNFα誘導(dǎo)TF的表達(dá)?,F(xiàn)在是40頁\一共有43頁\編輯于星期六(六)參考文獻(xiàn)[1]萬敬員,葉篤筠,吳萍,等.川芎嗪對脂多糖誘導(dǎo)巨噬細(xì)胞環(huán)氧化酶2表達(dá)和心肌細(xì)胞凋亡的影響[J].中國中西醫(yī)結(jié)合雜志,20
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