血小板血型系統(tǒng)和檢測(cè)技術(shù)專家講座

五、交叉配血

(MatchcrossBlood)血小板血型系統(tǒng)和檢測(cè)技術(shù)第1頁交叉配血(MatchcrossBlood)一、交叉配血概念交叉配血試驗(yàn)也稱配合性試驗(yàn)，實(shí)際上是檢驗(yàn)不配合性。檢驗(yàn)患者和獻(xiàn)血員之間是否有對(duì)應(yīng)抗原、抗體存在。1.主側(cè)交叉配血供血者紅細(xì)胞與受血者血清反應(yīng)2.次側(cè)交叉配血受血者紅細(xì)胞與供血者血清反應(yīng)3.本身對(duì)照受血者紅細(xì)胞與本身血清反應(yīng)，排除本身抗體，DAT+，假凝集等干擾血小板血型系統(tǒng)和檢測(cè)技術(shù)第2頁血小板血型系統(tǒng)和檢測(cè)技術(shù)第3頁交叉配血(MatchcrossBlood)二，交叉配血方法

1.只能檢出不配合完全抗體鹽水介質(zhì)法2.可檢出不配合不完全抗體抗人球蛋白法蛋白酶法低離子介質(zhì)法等3.改良交叉配血方法血小板血型系統(tǒng)和檢測(cè)技術(shù)第4頁交叉配血(MatchcrossBlood)聚凝胺（Polybrene)配血法利用高價(jià)陽離子多聚季氨鹽溶解后產(chǎn)生大量正電荷可中和紅細(xì)胞表面負(fù)電荷縮小其之間距離微柱凝膠配血法（卡式配血法）

血小板血型系統(tǒng)和檢測(cè)技術(shù)第5頁幾個(gè)交叉配血試驗(yàn)方法學(xué)評(píng)價(jià)配血方法

缺點(diǎn)

優(yōu)點(diǎn)

鹽水配血試驗(yàn)簡單、快速檢不出IgG酶介質(zhì)試驗(yàn)

簡便、經(jīng)濟(jì)準(zhǔn)確性、穩(wěn)定性差抗球蛋白試驗(yàn)準(zhǔn)確、可靠復(fù)雜、費(fèi)時(shí)、貴凝聚胺試驗(yàn)快速、準(zhǔn)確需特殊試劑微柱凝膠試驗(yàn)靈敏成本高血小板血型系統(tǒng)和檢測(cè)技術(shù)第6頁交叉配血(MatchcrossBlood)三，交叉配血不合原因（一）主側(cè)不合：Rs+Dc1.不規(guī)則抗體有同種抗體或本身抗體2.冷凝集3.假凝集4.A2抗A1(1%-8%A2,22%A2B個(gè)體有抗-A1)5.DcDAT+血小板血型系統(tǒng)和檢測(cè)技術(shù)第7頁交叉配血(MatchcrossBlood)（二）次側(cè)不合：Pc+Ds1.Pc做DAT：陽性見于本身抗體，輸血反應(yīng)2.Ds中有不規(guī)則抗體3.忽略ABO亞型誤定血型4.冷凝集素吸附于Pc5.異型輸血血小板血型系統(tǒng)和檢測(cè)技術(shù)第8頁四，交叉配血注意事項(xiàng)1.離心時(shí)間與速度2.水溫箱溫度37℃3.水質(zhì)，離子影響4.用新鮮標(biāo)本5.做抗人球試驗(yàn)時(shí)最好用血清6.注意輸血史，妊娠史7.注意溶血結(jié)果，被檢血清中含有溶血性抗體，紅細(xì)胞抗原+血小板血型系統(tǒng)和檢測(cè)技術(shù)第9頁SoundOfColors我們何其幸運(yùn)無法確知自己生活在什么樣世界we’reextremelyfortunatenottoknowpreciselythekindofworldwelivein.—辛波絲卡《we’reextremelyfortunate我們何其幸運(yùn)》血小板血型系統(tǒng)和檢測(cè)技術(shù)第10頁血小板血型系統(tǒng)及檢測(cè)技術(shù)血小板血型系統(tǒng)和檢測(cè)技術(shù)第11頁一、血小板血型抗原定義:

指用同種免疫抗體檢測(cè)出血小板表面抗原分類：血小板相關(guān)抗原血小板特異性抗原血小板血型系統(tǒng)和檢測(cè)技術(shù)第12頁（一）血小板相關(guān)抗原

（platelet-associatedantigen）血小板表面存在與其它細(xì)胞或組織共有抗原包含：紅細(xì)胞血型系統(tǒng)（ABO等）人類白細(xì)胞抗原（HLA）血小板血型系統(tǒng)和檢測(cè)技術(shù)第13頁血小板HLA系統(tǒng)血型抗原Chromosome6DPDQDRBCAClassIIClassI存在HLA-A和B位點(diǎn)抗原HLA-C位點(diǎn)抗原未發(fā)覺HLA-DP、DQ和DR等位點(diǎn)抗原P67血小板血型系統(tǒng)和檢測(cè)技術(shù)第14頁（二）血小板特異性抗原人類血小板抗原（humanplateletantigen，HPA）血小板特有,其它組織細(xì)胞沒有表現(xiàn)血小板獨(dú)特遺傳多態(tài)性均存在于血小板膜糖蛋白（GP）上被國際輸血協(xié)會(huì)組織確認(rèn)血小板特異性抗原已經(jīng)有6個(gè)系統(tǒng)，12個(gè)抗原，正式命名為HPA-1~HPA-5和HPA-15。血小板血型系統(tǒng)和檢測(cè)技術(shù)第15頁命名要求以下：在系統(tǒng)前冠以HPA，即人類血小板抗原（humanplateletantigen）英文縮寫按發(fā)覺次序用數(shù)字編號(hào)只有在共顯性雙等位基因全被檢測(cè)出來后，才能被稱為系統(tǒng)，對(duì)偶抗原按其在人群中頻率由高到低，用字母命名，高為a，低為b還未發(fā)覺對(duì)偶抗原，給予暫時(shí)命名，在等位基因數(shù)字后加后綴w表示P98血小板血型系統(tǒng)和檢測(cè)技術(shù)第16頁血型系以往命名糖蛋白(GP)定位抗原以往抗原命名表現(xiàn)型頻率白人日本人中國人HPA-1ZwPLAGPIIIaHPA-1aZwaPLA189>99>99.99HPA-1bZwbPLA2113.7n.t.HPA-2KoSibGPIbHPA-2aKob99.3n.t.n.t.HPA-2bKoaSiba14.625.49.1HPA-3BakLekGPIibHPA-3aBakaLeka87.778.979.1HPA-3bBakb64.1n.t.70.5HPA-4PenYukGPIIIaHPA-4aPenaYukb>99.999.999.9HPA-4bPenbYuka<0.21.71.8HPA-5BrHcZavGPIaHPA-5aBrbZavb99.2n.t.n.t.HPA-5bBraZavaHca20.6n.tn.tDUZOPLFNek血小板血型系統(tǒng)和檢測(cè)技術(shù)第17頁二、血小板抗體產(chǎn)生機(jī)理：機(jī)體對(duì)血小板表面或相關(guān)抗原免疫臨床分類：血循環(huán)中游離抗體結(jié)合于血小板上抗體(PAIgG)血型學(xué)分類：血小板同種抗體：抗體不是針對(duì)本身抗原，而是與同種異基因紅細(xì)胞發(fā)生反應(yīng)

本身抗體：受血者體內(nèi)產(chǎn)生抗體，針對(duì)自己本身紅細(xì)胞抗原。見于：血小板輸注治療無效；同種免疫血小板降低癥；本身免疫血小板降低癥；藥品、病毒、細(xì)菌引發(fā)血小板降低癥血小板血型系統(tǒng)和檢測(cè)技術(shù)第18頁血小板表面存在眾多復(fù)雜抗原，所以重復(fù)大量輸注血小板患者約50%以上產(chǎn)生血小板同種抗體據(jù)報(bào)道HLA抗體占多數(shù)，約80%左右HPA抗體單獨(dú)存在頻率較低（2%-3%）HPA抗體與HLA抗體共存（18%左右）必須首先識(shí)別并去除血清中存在HLA抗體，才能分析血小板抗體特異性血小板血型系統(tǒng)和檢測(cè)技術(shù)第19頁判別有沒有HLA抗體存在方法淋巴細(xì)胞毒試驗(yàn):抗原抗體反應(yīng)在補(bǔ)體參加下破壞LC，活OR死細(xì)胞染色判別混合淋巴細(xì)胞培養(yǎng)：兩個(gè)無關(guān)LC體外培養(yǎng)，MHC不一樣，刺激增殖。計(jì)數(shù)轉(zhuǎn)化后母細(xì)胞或者被攝取DNA量判定除去血小板表面HLA抗原方法0℃氯喹或酸溶液處理血小板P79P83血小板血型系統(tǒng)和檢測(cè)技術(shù)第20頁血小板血型臨床意義血小板輸注無效輸血后紫癜新生兒同種免疫性血小板降低性紫癜血小板本身免疫作用P100血小板血型系統(tǒng)和檢測(cè)技術(shù)第21頁

一、血小板輸注無效

（platelettransfusionrefractoriness，PTR）血小板血型系統(tǒng)和檢測(cè)技術(shù)第22頁1、PTR定義指患者在輸注適當(dāng)劑量血小板后沒有產(chǎn)生“適當(dāng)反應(yīng)”，即連續(xù)兩次輸注足量隨機(jī)供者血小板后，沒有到達(dá)適當(dāng)校正血小板計(jì)數(shù)增加值（CCI），臨床出血表現(xiàn)亦未見改進(jìn)血小板血型系統(tǒng)和檢測(cè)技術(shù)第23頁2、PTR原因免疫原因（17.5%）：重復(fù)輸注血小板或有妊娠史婦女，血清中產(chǎn)生血小板同種抗體，再次輸注，發(fā)生免疫反應(yīng)，血小板被巨噬細(xì)胞吞噬HLA抗體、HPA抗體、ABO抗體、本身抗體、藥品抗體、循環(huán)免疫復(fù)合物等非免疫原因（67.5%）：發(fā)燒、敗血癥、脾腫大、骨髓移植、DIC、靜注抗菌素等；血小板質(zhì)量非免疫+免疫原因（15%）血小板血型系統(tǒng)和檢測(cè)技術(shù)第24頁二者區(qū)分

同種異體免疫輸入血小板很快破壞，輸注后1小時(shí)和24小時(shí)均不見計(jì)數(shù)增高非免疫原因

輸注后1小時(shí)血小板計(jì)數(shù)增高，但24小時(shí)計(jì)數(shù)不增高或受影響血小板血型系統(tǒng)和檢測(cè)技術(shù)第25頁3、PTR判定指標(biāo)臨床:出血趨勢(shì)不減輕，或出現(xiàn)輸血性紫癜，出血加重。血小板計(jì)數(shù)較輸注前不但不增高，有時(shí)還會(huì)下降。判定血小板輸注效果可經(jīng)過1.校正血小板計(jì)數(shù)增加值（correctedcountincrement,CCI）:CCI=(輸注后血小板計(jì)數(shù)-輸注前血小板計(jì)數(shù))×體表面積(m2)輸入血小板總數(shù)（×1011）PTR判定標(biāo)準(zhǔn):1小時(shí)CCI﹤7.5×109／L20-24小時(shí)CCI﹤4.5×109／L

2，血小板回收率（percentageplateletrecovery,PPR）:PPR=(輸注后血小板數(shù)－輸注前血小板數(shù))×血容量(L)輸入血小板總數(shù)×2/3PTR判定標(biāo)準(zhǔn)：1hPPR﹤30%20-24hPPR﹤20%血小板血型系統(tǒng)和檢測(cè)技術(shù)第26頁一個(gè)體表面積為1.5患者接收了4×1011血小板后，其24h血小板上升了25×109/L。計(jì)算CCI一個(gè)體重80Kg患者，輸注了4×1011血小板后，其24小時(shí)血小板上升了25×109/L血容量按照75ml/kg計(jì)算。計(jì)算PPR。血小板血型系統(tǒng)和檢測(cè)技術(shù)第27頁5、PTR處理流程首先考慮血小板質(zhì)量問題，可輸注ABO同型非庫存血小板，以排除ABO系統(tǒng)抗體或血小板質(zhì)量方面影響原因若有發(fā)燒、感染、DIC等造成血小板消耗增加原因存在，主動(dòng)治療原發(fā)病，并增加輸注劑量若有同種抗體存在，則挑選HLA、HPA相合供者血小板，或使用激素、免疫抑制劑或靜脈注射免疫球蛋白。若病人連續(xù)輸注血小板效果不佳而又找不到明確原因，則應(yīng)考慮藥品性抗體存在，停用或換用相關(guān)藥品血小板血型系統(tǒng)和檢測(cè)技術(shù)第28頁二、輸血后紫癜

（posttransfusionpurpura,PTP）定義：指輸注全血或血小板后引發(fā)急性、暫時(shí)性同種免疫性血小板降低綜合征.臨床表現(xiàn)：在輸血后1周左右突然發(fā)生瘀點(diǎn)、瘀斑和黏膜出血，嚴(yán)重者有內(nèi)臟和顱內(nèi)出血大多數(shù)患者是女性，有輸血或妊娠史P102血小板血型系統(tǒng)和檢測(cè)技術(shù)第29頁P(yáng)TP預(yù)防和治療辦法血小板抗體篩選血小板交叉配血試驗(yàn)，選擇配合型血小板供體輸注大量靜脈注射免疫球蛋白血小板血型系統(tǒng)和檢測(cè)技術(shù)第30頁新生兒同種免疫血小板降低性紫癜

（neonatalalloimmunethrombocytopenia,NAITP）血小板血型系統(tǒng)和檢測(cè)技術(shù)第31頁病因：胎兒和母親血小板血型不合，使母親產(chǎn)生同種抗體，經(jīng)過胎盤進(jìn)入胎兒體內(nèi)，與胎兒血小板反應(yīng)而造成胎兒和新生兒血小板降低癥狀：內(nèi)臟和中樞神經(jīng)系統(tǒng)出血，腦水腫，嬰兒出生時(shí)(12~24小時(shí))有嚴(yán)重、廣泛瘀點(diǎn)和瘀斑。最嚴(yán)重并發(fā)癥是顱內(nèi)出血?；虺錾鷷r(shí)正常,于二、三天后出現(xiàn)血小板降低癥診療：母體血小板抗體檢測(cè)，抗原檢定 患兒血小板抗體(表面、游離)檢測(cè)預(yù)后：死亡率13%P104血小板血型系統(tǒng)和檢測(cè)技術(shù)第32頁治療辦法給患兒輸入與母體血清中同種抗體無反應(yīng)性血小板對(duì)患兒進(jìn)行換血治療，糾正患兒血小板降低。對(duì)新生兒治療普通選取靜脈內(nèi)注射免疫球蛋白

預(yù)防對(duì)血漿中含有高效價(jià)血小板同種抗體孕婦做血漿置換治療，降低孕婦血漿中同種抗體含量，以降低對(duì)胎兒和新生兒危害。血小板血型系統(tǒng)和檢測(cè)技術(shù)第33頁血小板本身免疫作用

——特發(fā)性血小板降低性紫癜

（idiopathicthrombocytopenicpurpura，ITP）定義：免疫系統(tǒng)失調(diào)，患者體內(nèi)存在抗血小板本身抗體，使血小板大量破壞，是一個(gè)本身免疫疾病臨床表現(xiàn)：