實時熒光定量PCR具體實驗步驟_第1頁
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文檔簡介

以下實驗步驟僅供參考：1品①置分②每的TRIZOL試劑裂解體15到30育到下。全部TRIZOL的60%。無RNA的RNA后15到30℃育分于心的RNA沉每少（75%乙醇用2O洗RNA，4下心使RNA燥⑥解解RNA時，先加無酶水40μl用的RNA溶液保存于8021）/9

的TE量RNA用TE1:100）計和定RNA溶①下讀值為1表示40μg品濃度μg/ml)計算公式為：A260×稀×μg/ml。具溶40μl取5ul1:100至495μl的TE濃度==或μg/μl取品為μl，剩余總量為：35μl×μg/μl=μg②溶液的A260/A280的為2）①/9

1g于水中，冷至ml的電18ml的液電泳緩沖入25的電泳②備取加于10μg/ml。加熱70℃育分③泳5min，。下2h，少2–3cm。④28S和核的帶提RNA的的2的RNA和5S體）18S和的由mRNA型組成。RNA現(xiàn)DNA污28S/9

帶的上面，3品①1錄μl2μl3μl4μl5酶μl6水5μl7版2μl8積10μl，6000rpm②酶先70干3分μl37水浴60/9

③即干3為cDNA4β-actin）量PCRβ-1011，反應(yīng)前取3μl按27μl并充分混為10至109②1染料μl2物Fμl3物Rμl4μl/9

5Taq酶1μl6板μl72Oμl8積50μl，6000rpm1110μl2物Fμl3物μl4μl5Taq酶1μl6品μl72Oμl/9

8積50μl，6000rpm③：93℃931552共40個循5的DNA①的1ul22ul3物Ful4物Rul5液ul6Taq聚合酶1ul71ul8為/9

，6000rpm35個循94；1；℃分；72oC伸②PCR與在2％③將產(chǎn)物進行10倍釋將行釋定為至1096量①有量11ul2物/9

3物45Taq聚合酶6品5ul78積ul，6000rpm②的反應(yīng)于RealtimePCR儀行擴：2按931，℃11做個循環(huán)后727

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