腸桿菌科細菌鑒定

腸桿菌科細菌鑒定第一頁，共17頁。腸桿菌科細菌一般性鑒定程序未知腸桿菌分離培養(yǎng)挑取可疑菌落純培養(yǎng)革蘭染色鏡檢生化實驗鑒定藥敏試驗血清學試驗第二頁，共17頁。無菌操作用接種環(huán)提取可疑腸道桿菌，在EMB上分區(qū)劃線接種。送37℃培養(yǎng)24小時。第三頁，共17頁。（一）確定可疑菌落。1.觀察EMB表面的菌落特征：（1）.凡紫黑色的單個菌落可初步定為可疑大腸桿菌菌落，標號為。（2）.凡光滑無色透明的單個小菌落可初步定為痢疾桿菌屬菌落或傷寒桿菌屬菌落，標號為。第四頁，共17頁。（二）.可疑菌落純化培養(yǎng)

無菌操作用接種針挑取已編號可疑菌落，分別接種在雙糖鐵高層瓊脂斜面和半固體培養(yǎng)基上，送37℃溫箱培養(yǎng)24~48小時。（三）.雙糖鐵瓊脂斜面培養(yǎng)特征觀察與動力觀察初步確定為傷寒桿菌初步確定為大腸桿菌第五頁，共17頁。革蘭染色鏡檢挑取純培養(yǎng)后的可疑菌落進行革蘭染色，確定為革蘭陰性菌后進行細菌的生化培養(yǎng)基接種。革蘭陰性菌短桿狀，分散排列第六頁，共17頁。生化試驗鑒定將需全面鑒定的可疑細菌從雙糖鐵瓊脂斜面挑菌分別接種于各種生化反應培養(yǎng)基。每株可疑菌需接種的培養(yǎng)基計有糖發(fā)酵管（）各1支，蛋白胨水1支（I），葡萄糖蛋白胨水2支（M.Vp），枸櫞酸鹽瓊脂斜面1支（C）。接種完畢后，試管置于試管架上，送37℃溫箱培養(yǎng)24~48小時后觀察記錄結果。第七頁，共17頁。1.不變黃，小管無氣泡：糖發(fā)酵為陰性（—）。2.黃色，小管有氣泡（產(chǎn)酸，產(chǎn)氣）：糖發(fā)酵為陽性（+）。黃色，小管無氣泡（產(chǎn)酸，不產(chǎn)氣）：糖發(fā)酵為陽性（+）。糖發(fā)酵試驗第八頁，共17頁。結果：紅色為吲哚試驗陽性（+），無變化為陰性（-）紅色為甲基紅試驗陽性（+），桔黃色為陰性（-）吲哚試驗(I)甲基紅試驗(MR)試驗第九頁，共17頁。VP試驗枸櫞酸鹽利用試驗(C)斜面上有菌苔，且變成深藍色，為陽性；斜面上無菌苔，仍是綠色為陰性。紅色為VP陽性。第十頁，共17頁。表1腸桿菌科細菌生化反應鑒定結果記錄表細菌編號葡萄糖乳糖麥芽糖甘露醇蔗糖吲哚甲基紅VP枸櫞酸鹽H2S動力大腸桿菌⊕⊕⊕⊕+++---+傷寒桿菌⊕-⊕⊕--+-+++細菌編號葡萄糖乳糖麥芽糖甘露醇蔗糖吲哚甲基紅VP枸櫞酸鹽H2S動力大腸桿菌⊕⊕⊕⊕-/+++---+傷寒桿菌+-++--+---/++表2腸桿菌科細菌生化反應鑒定數(shù)據(jù)參考表第十一頁，共17頁。

實驗原理：含有定量抗菌藥物的紙片貼在己接種測試菌的瓊脂平板上，紙片中所含的藥物吸取瓊脂中的水分溶解后便不斷地向紙片周圍區(qū)域擴散，形成遞減的梯度濃度。在紙片周圍抑菌濃度范圍內的細菌的生長被抑制，形成透明的抑菌圈。抑菌圈的大小反映測試菌對測定藥物的敏感程度，并與該藥對測試菌的最低抑菌濃度（MIC）呈負相關，即抑菌圈愈大，MIC愈小。

藥物敏感試驗第十二頁，共17頁。實驗方法（一）接種肉湯培養(yǎng)基（二）菌液均勻涂抹平板培養(yǎng)基（三）分別夾取青霉素、鏈霉素、慶大霉素和頭孢拉定四種抗生素紙片貼在平板上進行培養(yǎng)第十三頁，共17頁。實驗結果第十四頁，共17頁。青霉素(mm）鏈霉素（mm）頭孢拉定（mm）慶大霉素（mm）大腸桿菌-18>15(敏感）-24>15(敏感）沙門菌-16>15(敏感）-19>15(敏感）志賀菌-22>15(敏感）-25>15(敏感）●實驗結果