判斷推理修改濕地植物提取物對致病性細菌的抑制作用

M.S.MasterInhibitoryEffectsofWetland ntExtractonPathogenicBacteriaCandidate:JiaqiGeSupervisor:Prof.WanhongWeiMajor:：導師：教、作用，因此本研究選用濕地植物蘆葦（Phragmitesaustralias）、空心蓮子草（Alternantheranuciferabispinosa苦草（Vallisnerianatans）、芡實（Euryaleferox）、辣蓼（Polygonumhydropiper）、酸模dubia）、水芹（Oenanthejavanica）、芙蓉蓮（Pisitiastratiotes）、蒲公英（Taraxacummongolicum）、鴨跖草（Commelinacommunis） pescapraesieboldii共36種植物，采用水提取、乙醇提取法提取有效成分，確定它們對金黃色葡萄球菌、（Staphylococcusaureus）、大腸桿菌（Escherichiacoli）、銅綠假單胞菌aeruginosa）、鼠傷寒沙門氏菌（Salmonellatyphimurium）、嗜水氣單胞菌（Aeromonas7種細菌的抑菌活性，并從中篩選具有較強抑菌作用的植物提取物，進一步采用不同的溶劑萃取分離，選出抑菌能力最強的萃取物，將其添加至克氏原螯蝦（Procambarusclarkii）菱、芡實、辣蓼、、茜草、綬草、毛茛7種植物的乙醇提取物對大腸桿菌有一定的抑制作用；菱、芡實、辣蓼、水芙蓉、、茜草、綬草、毛茛8種植物的乙醇提取物對金黃色葡萄球菌有一定的抑制作用；菱、芡實、、茜草4種植物的乙醇提取物對沙門氏菌有一定的抑制作用；菱、芡實、辣蓼、、茜草、毛茛6種植物的乙醇提取物對銅綠假單胞菌有一定的抑制作用；空心蓮子草、菱、鴨舌草、、茜草、馬齒莧、綬草、毛茛、活血丹、藻、芙蓉蓮11種植物的乙醇提取物對嗜水氣單胞菌有抑制作用；空心蓮子草、菱、、茜草、綬草、金錢草、活血丹、馬齒莧、菱、茜、芡、4對7細菌有較的菌性，將其醇提物采用不同溶劑進行萃取，發(fā)現(xiàn)菱乙醇提取物的乙酸乙酯萃取物的抑菌效果明200m/mL26.38mm27mm1.00%25.73mm，對副溶血2.25mm0%氯霉素的抑菌效果。15天后，菱乙醇提取物的乙酸乙酯萃取物組動物的總蛋白的含量、堿性磷酸酶和酸性磷酸酶的活性顯著高于對照組動物和毛茛、空心蓮子草、鴨舌草、馬齒莧、活血丹、藻、蒲公英、繁縷、金錢草菌都有顯著的抑菌活性，它可提高動物中總蛋白的含量、堿性磷酸酶和酸性磷酸InhibitoryEffectsofWetland ntExtractonPathogenicBacterM.S.Candidate:JiaqiGeThediscoveryofantibioticsisoneofthegreatachievementsinthefieldofmedicine.Antibioticshasyedanimportantroleintheimprovementofhumanhealthandtheguaranteeoflifesafety,andyedapositiveroleinpromotingthedevelopmentofaquaculture.However,inrecentyears,therearelotsofproblemsinaquaculture,suchastheresiduesofantibioticsinanimalsinducedbytheneglectofthedosage,themedicationtimesandthewithdrawalperiodofantibioticswhenitwasusedMe,theexcessiveintakeofantibioticsorresidueofantibioticsinfoodmadeitconcentrateinhumanbodyandattenuateditseffectonpathogenicbacteria.So,itisurgenttofindothernaturaldisinfectanttoreceantibiotics.Wetlandntsmayhaveauniqueroleinresistingpathogenicmicroorganismsduetotheparticularityoftheirlivingenvironment.Therefore,thisresearchselected36speciesofwetlandntsassubject,theywerePhragmitesaustralis,Alternantheraphiloxeroides,Eichhorniacrassipes,Nelumbonucifera,Trapabispinosa,Vallisnerianatans,Euryaleferox,Polygonumhydropiper,P.lapathifolium,P.Jucundum,Acoruscalamus,Potamogetoncrispus,P.malaianus,Salvinianatans,Ceratophyllumdemersum,Monochoriavaginalis,Hydrillaverticillata,Hydrocharisdubia,Oenanthejavanica,Pisitiastratiotes,HerbaTaraxaci,Commelinacommunis,Solanumnigrum,Lysimachiachristinae,RubiacordifoliaLinn.,Slariamedia,Oxalispescaprae,Zizanialatifolia,Portulacaoleracea,Ranunculussieboldii,Kyllingabrevifolia,Eleusineindica,Glechomalongituba,Equisetumramosissimum,Spiranthessinensis,Alopecurusaequalis.Theiractiveingredientswereextractedbywaterandethanol.Andtheantimicrobialactivityofextrctsagainstsevenkindsofbacteria,suchasStaphylococcusaureus,Escherichiacoli,Pseudomonasaeruginosa,Salmonellatyphimurium,Aeromonashydrophila,AeromonasaeruginosaandVibrioparahaemolyticus,wasdetemined.Then,thentextractswithstrongantibacterialactivitywerescreenedandpurifiedbydifferentsolventextraction.Finally,thentextractswiththestrongestbacteriostaticabilitywereaddedtothefoodofProcambarusclarkiitoobsevertheeffectoftheseextractsaonthesurvivalrateandnon-specificimmunityofProcambarusclarkii,So,theresultsofthisresearchwouldbehelpfultofindnewwaytocontrolbacterialdiseasesandbebenefittoapplysafeadditivesinanimalfood.Theresultswereasfollows.Theethanolextractsof36ntsinhibiteddifferentbacteria.TheextaractsofTrapabispinosa,Euryaleferox,Polygonumhydropiper,Solanumnigrum,Rubiacordifolia,RanunculussieboldiiandSpiranthessinensishadacertaininhibitoryeffectonEscherichiacoli.AndtheextractsofTrapabispinosa,Euryaleferox,Polygonumhydropiper,Solanumnigrum,Rubiacordifolia,Ranunculussieboldii,SpiranthessinensisandPisitiastratiotescouldinhibitStaphylococcusaureus.ThentswhichcouldinhibitthegrowthofSalmonellatyphimuriumareTrapabispinosa,Euryaleferox,SolanumnigrumandRubiacordifolia.AndtheextractsofTrapabispinosa,Euryaleferox,Polygonumhydropiper,Solanumnigrum,RubiacordifoliaandSpiranthessinensiscouldinhibitPseudomonasaeruginosa.AeromonashydrophilawasinhibitedbytheextractsofAlternantheraphiloxeroides,Trapabispinosa,Monochoriavaginalis,Rubiacordifolia,Portulacaoleracea,Spiranthessinensis,Ranunculussieboldii,Glechomalongituba,CeratophyllumdemersumandPisitiastratiotes.AeromonassobriawasinhibitedbytheextractsofAlternantheraphiloxeroides,Trapabispinosa,Polygonumhydropiper,Solanumnigrum,Rubiacordifolia,Spiranthessinensis,Portulacaoleracea,RanunculussieboldiiandGlechomalongituba.TheextractsofAlternantheraphiloxeroides,Trapabispinosa,Solanumnigrum,Lysimachiachristinae,Rubiacordifolia,Portulacaoleracea,RanunculussieboldiiandGlechomalongitubainhibitedthegrowthofVibrioparahemolyticus.Theantibacterialeffectofwaterextractionislessthanthatofethanolextract.TheminimalinhibitoryconcentrationofSpiranthessinensiswaterextractionagainsttoEscherichiacoliwas200mg?mL-1,anditsinhibitionzonediameterwas12.38mm.ThewaterextractsofAlternantheraphiloxeroides,Euryaleferox,HerbaTaraxaci,Solanumnigrum,Slariamedia,andSpiranthessinensishadacertaininhibitoryeffectonAeromonashydrophila.AndthewaterextractsofAlternantheraphiloxeroides,Monochoriavaginalis,HerbaTaraxaci,Slariamedia,Glechomalongituba,SpiranthessinensisinhibitedAeromonassobria.VibrioparahemolyticuswasinhibitedbywaterextractsofAlternantheraphiloxeroides,Monochoriavaginalis,Spiranthessinensis,Slariamedia,GlechomalongitubaandSolanumnigrum.TheethanolextractsofTrapabispinosa,Euryaleferox,Solanumnigrum,Rubiacordifoliawereextractedwithothersolventbecauseoftheirhigherantibacterialactivity.AndwefoundthattheethylacetateextractofTrapabispinosahadobviousantibacteriaeffect.Whenitsconcentrationis200mg?ml-1,itsantibacteriadiameterwas26.38mmtoStaphylococcusaureusand27mmtoVibrioparahaemolyticus,respectively.Theinhibitionzonediameterof1.00%chloramphenicolwas25.73mmtoStaphylococcusaureusand25.25mmtoVibrioparahaemolyticus,respectively.SoitindicatedthattheantibacterialeffectofTrapabispinosaethylacetateextractwassignificantlyhigherthanthatof1.00%chloramphenicol.Thecontentoftotalprotein,activitiesofalkalinephosphataseandacidphosphataseintheethanolextractgroupwassignificantlyhigherthanthoseofthecontrolgroupand1.00%chloramphenicolgroupwhenaddedtheethylacetateextractofTrapabispinosatothefoodofProcambarusclarkiifor15dayslate,anditcouldimprovethesurvivalrateofProcambarusTheresultsshowedthattheantibacterialactivityoftheactiveingredientswasdifferentaccordingtothemethodstheywereextractedandtheantibacterialactivityofthealcoholextractwashigherthanthatofthewaterextract.TheethanolextractofTrapabispinosa,Euryaleferox,Polygonumhydropiper,Pisitiastratiotes,Solanumnigrum,Rubiacordifolia,Spiranthessinensis,Alternantheraphiloxeroides,Monochoriavaginalis,Portulacaoleracea,Glechomalongituba,Ceratophyllumdemersum,HerbaTaraxaci,Slariamedia,Lysimachiachristinaehadacertainantibacterialeffect.TheethylacetateextractofTrapabispinosahadthebestantibacterialactivityandcouldenhancetheimmunityandsurvivalrateofProcambarusclarkii.：Procambarusclarkii;ntextracts;Antibacterialactivity;中 細菌性疾病的危 植物提取物應用于疾病的防治及對水生動物的免疫機 植物提取物對疾病的防 植物提取物對水生動物的免疫機 實驗材 供試植 供試菌 實驗動 實驗儀 實驗試劑及其配 實驗方 植物提取物及萃取物的植物提取物抑菌活性的測 萃取物對克氏原螯蝦非特異免疫能力影響的測 萃取物對克氏原螯蝦率影響的測 數(shù)據(jù)統(tǒng)計與分 植物提取物對動物致病菌的抑菌活 植物提取物對金黃色葡萄球菌的抑菌活 植物提取物對大腸桿菌的抑菌活 植物提取物對沙門氏菌的抑菌活 植物提取物對銅綠假單胞菌的抑菌活 植物提取物對嗜水氣單胞菌的抑菌活 植物提取物對溫和氣單胞菌的抑菌活 植物提取物對副溶血弧菌的抑菌活 植物萃取物對動物致病菌的抑菌活 植物萃取物對金黃色葡萄球菌的抑菌活 植物萃取物對大腸桿菌的抑菌活 植物萃取物對銅綠假單胞菌的抑菌活 植物萃取物對副溶血弧菌的抑菌活 植物萃取物對溫和氣單胞菌的抑菌活 植物萃取物對嗜水氣單胞菌的抑菌活 菱乙醇提取物、乙酸乙酯萃取物對克氏原螯蝦非特異性免疫的影 植物萃取物對克氏原螯蝦存活率的影 植物提取物對動物致病菌的抑菌作 菱乙醇提取物的乙酸乙酯萃取物對克氏原螯蝦免疫力的影 揚州大學性 使用 類之間廣泛（韓果方和,2003），造成的危害日益加劇。龍等（2010）對恒河猴（Macacamulatta）進行細菌染，觀察臟器的病理學變化，發(fā)現(xiàn)沙門氏菌（Salmonella）可使臟器出現(xiàn)傷寒肉芽腫，結(jié)核桿菌（Mycobacteriumtuberculosis）可使臟器出現(xiàn)結(jié)核肉芽腫，志賀菌（Shigella）和空腸彎曲菌（Campylobacterjejuni）可使動物表現(xiàn)出急性炎和淺表性潰瘍等癥狀。在肉鴨養(yǎng)殖過程中，大腸桿菌（Escherichiacoli）病、巴娟等,2015）。雞大腸桿菌是一種條件原微生物，機體抵抗力下降時細菌的致病性使的雞發(fā)病，并引起某些傳染病的并發(fā)病或繼發(fā)?。ǘ庞缿c等2015）。水產(chǎn)養(yǎng)殖中，水產(chǎn)動物易細菌性疾病、性疾病、營養(yǎng)性疾病等諸多病原菌，而細菌性疾病是其中最重要的類群，所造成的經(jīng)濟損失約占全部疾病所造成的經(jīng)濟損失的一半以上（等,2013）。世界第一水產(chǎn)養(yǎng)殖國家，每年的養(yǎng)殖產(chǎn)量為世界養(yǎng)殖總產(chǎn)量的70%左右,細菌性疾病在密集型的養(yǎng)殖體系中的極高，已經(jīng)嚴重影響我國水產(chǎn)養(yǎng)殖業(yè)的可持續(xù)發(fā)展（月等,2015）。細菌性疾病具有病原種類多、暴發(fā)頻率高、病原菌耐藥性強和防（Aromons葡萄球菌（Staphylococcusaureus）和大腸桿菌等共患的細菌及其的危害進行綜述的海水和海洋動物體內(nèi)，是一種導致多種淡水蝦及魚類的致病菌?；【鷮Φ椢r的是全身性的，尤以肝胰腺最為嚴重（EavesandKetterer,1994）。對（Litopenaeusvannamei）是我國養(yǎng)殖面積最大、產(chǎn)量最高的蝦種，但因其餌料、殘骸和排泄物的積累，使育苗水質(zhì)，導致細菌大量滋生，極易誘導弧菌病害暴發(fā)，造成幼體大的損失（Fanetal.,2006）；2007年地區(qū)南美白對蝦（Penaeusvanname)紅體病發(fā)病率達到95%，率達100%，造成巨大經(jīng)濟損失（,2009）。Himmel等（2010）的研究，擬態(tài)弧菌(Vibriomimicus)可引起淡水龍蝦的直接大面積。等japonicus）爛鰓、爛尾病的病原菌為鰻弧菌（V.Anguillarum）。副溶血弧菌(V.parahaemolyticus)主要存在水中,附著于海洋生物的體表生長繁殖；進食未煮透的了副溶血弧菌的食物后,可引起胃腸黏膜的急性炎癥反應（等,2008），表現(xiàn)出腹絞痛、腹瀉、、發(fā)燒、寒顫、等臨床癥狀（HondaandIida,1993）。溶藻弧菌（V.alginolyticus）是牙鲆（Paralichthysolivaceus）和鰻鱺（Anguillajaponica）等許多名貴魚類發(fā)生細菌性疾病的主要病菌（Chenetal.,2006），它也是引起人腸道炎、傷口感1983；Labreucheetal.,2006）。氣單胞菌（Aeromonas）屬革蘭氏菌（JandaandAbbott,2010），廣泛分布于水體立或者混合多種水產(chǎn)動物，且危害程度高于其它細菌性疾病，已經(jīng)成為我國淡水水產(chǎn)養(yǎng)殖業(yè)發(fā)展的主要因素（,2007）。維氏氣單胞菌（Aeromonasveronii）存在于水體和淤泥等環(huán)境中，它可斑點叉尾鮰（Ictaluruspunctatus）（Huangetal.,2010），（Li,2002）。吳雅麗等（2013）認為，中華鱉（Trionyxsinensis）（Ctenopharyngodonidellus）的細菌性腸炎均與氣單胞菌的密不可分。嗜水氣單胞（A.hydrophila）、豚鼠氣單胞菌（A.caviae）及溫和氣單胞菌（A.sobria）等是多種水產(chǎn)動物的病原菌。嗜水氣單胞菌與魚類和甲殼類的疾病有關，同時可引起人類的疾病發(fā)生（Tulsidasetal.,2008）；嗜水氣單胞菌可引起蝦的敗血癥、魚類的細菌溶血性腹水研究表明，嗜水氣單胞菌可通過飲水、皮膚等多種途徑機體，對機體的不同造成損傷；Ouagilo等（2006）認為，淡水龍蝦出現(xiàn)體色變暗、腮腺變黃、肝胰腺萎縮等腐皮病、溶血性腹水病等均由溫和氣單胞菌（祥和,2002），其和孫（2002）的研究表明，溫和氣單胞菌能夠引起羅非魚(Oreochromisniloticus)性敗血癥；等（2009）認為，溫和氣單胞菌引起異育銀鯽（CarassiusauratusGibelio.）患病，表現(xiàn)為皮膚潰爛、鰭條及鰓蓋等身體表面，并使其大量；該菌亦可以使人患病，引起食物和胃腸，出現(xiàn)腹瀉、、中耳炎、、膽管炎、腦膜炎等病癥，造成血管內(nèi)因產(chǎn)生大量氣體而使動物（Yukioetal.,2003）。豚鼠氣單胞菌會引起白鰱（Hypophthalmichthysmolitrix）的腐皮病、鯉魚（Cyprinuscarpio）的豎鱗?。ò驳?1998）、鯽魚（Carassiusauratus）的性敗血癥等（等,2003）；克氏原螯蝦豚鼠氣單胞菌后，出現(xiàn)暴發(fā)性，蝦體全身發(fā)紅，頭胸部形成積液，肝胰腺發(fā)生腐爛（等,2014）。和（2014）從體表鱗片少量脫落、胸腹鰭尾部輕血、腹腔內(nèi)有淡黃色積液、肝臟嚴重充血的發(fā)病鱸魚（Lateolabraxjaponicus）中分離到豚鼠氣單胞菌；毓等（2012）對南方鲇（Silurusmeridionalis）致病性和病理損傷的研究表明，豚鼠氣單胞菌對南方鲇的半致死劑量（LD50）0.29mg，溶血素具有較強的毒金黃色葡萄球菌（Staphylococcusaureus）是自然界常見的致病菌，常引起人和動物皮膚軟組織、敗血癥、膿毒血癥、心內(nèi)膜炎、腦膜炎及導管相關染等多種疾?。ɡ铥惷竦?2014；等,2015）。金黃色葡萄球菌是一種需氧或兼性厭氧革蘭氏陽性球型萄球菌引起的食物屢見不鮮，2000年由金黃色葡萄球菌腸毒素引起的事件致使14000多人（,2004)，河北的為21.2%（108/510）(Suoetal.,2008)，的為21.2%（44/204）；金黃色葡萄球菌在生奶、生肉與水產(chǎn)品2004）。和（2007）將分離的葡萄球菌注射到健康雞的肌肉中，20小時后注病原的主要細菌，它致病力強，速度快，常出現(xiàn)多重耐藥性和交叉，治療大腸桿菌（Ehihiaoli）及等病大菌特力編應毒白。年，由性大腸桿菌引起的毒黃瓜”席卷整個歐洲，造成12個國家近290030,201203）采用瓊脂稀釋法測定了不同動物來源的大腸桿菌對157%%的率達到72%，對養(yǎng)禽業(yè)造成重大經(jīng)濟損失（學,2007）。等（2009）研究表明，動源大腸桿菌的耐藥性更為廣泛，其耐藥強度耐性，人禽腸的可相禽家的可過肉其品到。菌環(huán)星藥超%，對左（Phillipsetal.,2004）世紀初人類發(fā)明青霉素以來，許多性疾病得到了有效的控制，青霉素對人類健康水平的提高和生命安全的保障起到了極其重要的作用（和,2010）。但是，在抗用逐漸增加，對公眾的健康造成了潛在危害（等,2004）具有豐富的植物資源，應用植物藥來防治疾病有著悠久的歷史(宋理,2005)。植物藥抗應激能力（和馬小能,2005），因此植物藥的開發(fā)和利用受到國內(nèi)外學者的廣泛細菌性和真菌性疾病是日常生活中最常見的疾病，共患病的病原體主要包括細菌、、、真菌、立克次體和衣原體，其中以細菌和誘發(fā)病源的的比例最高（林立峰等,2007）。在水產(chǎn)行業(yè)中，真菌疾病有水霉病、鰓霉病、鏈壺菌等，細菌性一年蓬（Erigeronannuus）為菊科（Asceae）二年生草本植物，分布范圍廣（等,抵抗多種氣體及煙塵，葉可入藥，用于主治高血壓（等,2001）；一年蓬和廣玉蘭的提取物對棉花枯萎病菌具有較強的抑菌作用，而且對孢子萌發(fā)的抑制作用可達用蕨類多有清熱解毒、舒筋活絡、抗菌消炎、消腫散淤等功效（丁恒山等,1982），許柑葉等（2005）的研究發(fā)現(xiàn)，蕨類水提物對啤酒酵母菌有明顯的抑菌作用；傘形科麥紋枯病菌菌絲的生長（胡林峰等,2012）；紫蘇（Perillafrutescens）為傳統(tǒng)常用中藥，是唇形科紫蘇屬一年生草本植物（等,2005），紫蘇葉具有解表散寒，行氣和養(yǎng)胃功效，紫蘇梗具有理氣、止痛作用（鄭萬均等,1983），紫蘇子具有降氣消、平喘、潤腸效；紫蘇、鴨跖草石油醚和乙酸乙酯葉提取物對志賀氏菌（ShigellaCaslani）、枯草桿菌（Bacillussubtilis）有較強的抑菌作用；陸風（2009）紫茉莉（Mirabilisjalapa）根的功效，葉有利尿作用，有溶血和凝血成分（,1982）；等（2011）利用索氏抽提乙醇回流法獲得澤漆（Euphorbiahelioscopia）提取物，它對大腸桿菌的抑制作用最強，野老鸛草（Geraniumcarolinianum）提取物對枯草芽孢桿菌的抑制作用最強；（Lonicerajaponica）中的綠原酸對食品致病菌具有一定的抑菌活性，對不同菌種抑菌活性不同，對大腸桿菌的抑菌最強，其次為黑曲霉（Aspergillusniger）。有關水生致?。?001）究（Liquidambarformosana）葉進行水煎煮投灑或混合餌料飼喂魚類，赤霉菌的明顯（2008bialniointali大黃（Rheumpalmatum）可以防治蝦、蟹、鱉等水產(chǎn)動物的爛鰓病、爛尾病、腐皮等細菌性疾病；龍須菜（Gracilarialemaneiformis）乙酸提取物可以降低鏈球菌，提高羅非魚的存活率(Abutbuletal.2005)；馬齒莧對鱔魚（Monopterusalbus）水霉病有預防和治療作用（，2008）；唇形科的植物用于控制魚類的疾病效果明顯（Bulfonetal.,2014）。蒽醌類、生物堿、揮發(fā)油等（和涂瑤生,2009），它們可以提高動物的體液免疫的體水平，增強巨噬細胞的吞噬功能，激活T、B淋巴細胞，誘導產(chǎn)生多種細胞因子等途徑來提高機體的免疫力，增強動物的抗病能力（Tanetal.,2015）。究水生動物的免疫系統(tǒng)主要由細胞免疫和體液免疫組成。（2010）研究表明，甲液免疫包含抗蛋白酶、凝集素、溶菌酶、轉(zhuǎn)移因子以及補體等（Ellis,1999;,2012）。是細胞免疫重要組成部分（Johanssonetal.,2000）。魚類的細胞免疫涉及非特異免疫，它包含吞噬細胞的呼吸暴發(fā)、吞噬和殺菌等（孫德文等,2002）。于愛清（2014）研究表明，病原菌蝦類等甲殼動物的巴后，它們會通過細胞免疫作用被清除，等黃酮類化合物（flavonoidscompounds）是植物中最廣泛分布的一類多酚化合物，是重要的植物次生代謝物（Morimotoetal.,2003）。延璽等（2008）研究表明，黃酮類種類繁多，有抗氧化、抗菌、抗、抗炎、抗過敏等功能，對增強動物的免疫力有重要的作效；在飼料中添加黃芩苷有利于提高羅非魚總抗氧化能力、堿性磷酸酶及溶菌酶的活物對金黃色葡萄球菌等革蘭氏陽性菌具有較強的抑菌效果（和,2008）。作為自由基的抗氧化劑之一，黃酮類化合物可以有效細胞的損傷，通過抗氧化和抗自由基、抑制癌細胞生長因子、抗因子、抑制血管生成等發(fā)生作用，從而達到防癌、抗癌的功效（等,2003）?？?、百合科等植物中（盼等,2016）。蒽醌類化合物抑菌的機制是依賴抑制菌體糖和（和,2012）。Asma等（2010）研究表明，從蘆薈（Aloevera）中提取的蒽醌類化合物對由細菌引起的皮膚具有明顯的抑制作用，其抑菌效果比抗生素更為顯著?？滴乃嚨龋?009）首次利用DPPH法從茜草中分離得到蒽醌及其苷類化合物化，抗氧化化等作用。從大黃中提取的蒽醌類化合物能提高沼蝦的總抗氧化活性、堿性磷酸酶、溶菌霉活性，對其免疫能力有顯著的提高（Linetal.,2010）。（等,2009）。和（2006）發(fā)現(xiàn)，丁香（Syringaoblat）揮發(fā)油對腸炎沙門菌、大腸桿菌、金黃色葡萄球菌有抑制作用，也具有抗、清除氧自由基的功能毒具有明顯的抑制作用，濃度在31.25mg/mL時即能達到抑制的增殖，濃度在250mg/mL時對雞胚內(nèi)流感有4倍的抑制作用。等（2009）利用水蒸氣蒸餾法色譜法對其成分進行分析，郁金揮發(fā)油對金黃色葡萄球菌、球菌（Micrococcustetragenus）、大腸、枯草桿菌（Bacillussubtilis）均有明顯抑制作用。和遙（2007）發(fā)現(xiàn)陳皮（Citrusreticulata）andHastings,1998;Cabello,2006）。但抗生素的使用導致許多細菌產(chǎn)生抗藥性，抗生素對紅霉素和鏈霉素產(chǎn)生了多重耐藥性，導致斑節(jié)對蝦因哈氏弧菌的引起大量的（Karunasagaretal.,1994）；水產(chǎn)養(yǎng)殖中殘留的抗生素可以改變內(nèi)正常的腸道菌群，從而對產(chǎn)生過敏及毒理學效應（Cabello,2006）。隨著現(xiàn)代醫(yī)學的快速發(fā)展，醫(yī)療模式已由單純的疾病治療轉(zhuǎn)變?yōu)轭A防、、治療、康復相結(jié)合的模式（,2001）。在水產(chǎn)飼料中添加植物性的添加劑可以有效防治細菌性疾病（等,2000）。植物藥具副作用小、殘留物少、對環(huán)境污染程度優(yōu)點，所以從植物中提取和篩選具有明36種揚州市區(qū)典型的濕地植物，利用天然植物提取技術，篩選對嗜水氣單胞菌、溫和氣單胞菌、副溶血弧菌、金黃色葡萄球菌7種細菌揚州市公道鎮(zhèn)；眼子菜、黑藻、水芙蓉購于宿遷室內(nèi)水生植物栽培館。將選用的植物136Table136ntsspeciesuedintheSolanum4.Nelumbo5.TrapaRubiaSEuryalePolygonumZizaniaP.AlopecurusP.jucundumSpiranthesAcorusPortulacaSalvinia藻MonochoriaEleusineHydrillaGlechomaHydrocharisOenantheHerba本實驗供試菌株包括嗜水氣單胞菌（A.hydrophila）、溫和氣單胞菌（A.sobria）、.（Escherichiacoli）、銅綠假單胞菌（Pseudomonasaeruginosa）、鼠傷寒沙門氏菌其它菌株均由揚州大學江蘇省人畜共患病提供?？耸显r購于揚州市楊壽鎮(zhèn)。選擇健康、規(guī)格重量基本一致（15~20g）的動物22植物機 泰斯特儀器R系列旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)器 上海申生科技有限公司EYELA-CCA-111冷凝機愛朗儀器EYELA-OSB-2100水浴鍋愛朗儀器EYELA-N-1100旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀愛朗儀器SHB-3循環(huán)水真空泵 申生科技SHELLAB水浴 SW-CJ-2HD超凈工作 QYC2102恒溫搖 ThermoScientific公司 5417R型高速冷凍離心機 Eppendoff公司752N紫外可見分光光度計 Epoch酶標儀 Biotek公司GHX9160B-1培養(yǎng) pH7.4，超純水定容到100mL。瓊脂10g，pH7.4，超純水定容到500mL。純水定容到100mL。pH7.2，超純水定容到500mL?？捡R斯亮藍G-250、4.7%（w/v）乙醇、8.5%（w/v）磷酸。M的鹽酸:16.7mL1000mL加1g疊氮化鈉防腐，保存于冰箱。并加蒸餾水至1L，置棕色瓶中保存。3-4次，合并濾液；利用旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀減壓濃縮至粘稠狀，即萃取物的：分別取上述每種溶劑提取的提取物30g，各按1:10的比例用蒸餾水溶每種溶劑萃取3-4次后合并同種萃取液，用旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀減壓濃縮至粘稠狀，即得各種萃取上，28℃、150rpm18-22h，再用麥氏比濁法測出液體培養(yǎng)基的濃度，將濃度稀釋至106cfu/mL。200mg/mL、100mg/mL、50mg/mL、25mg/mL12.5mg/mL的藥液。同采用濾紙片法測定不同提取物的不同濃度對7種菌的抑菌圈直徑。選用定性濾紙，用6mm的圓形紙片，12120min，60℃烘干，用無菌鑷子分別夾取到不同提取物、不同濃度的藥液中浸泡24h；用移液槍吸取15μL菌懸液涂布含藥瓊脂的：將每種植物的各類提取物用二甲基亞砜配制成1g/mL的母液，然后用二甲基亞砜將其稀釋為200mg/mL、100mg/mL、50mg/mL、25mg/mL、12.5mg/mL5個濃度梯度;1mL90mm的培養(yǎng)皿內(nèi)做好種菌懸液15μL（含菌量約106cfu/mL）。2936h，觀察并記錄實驗結(jié)果。若無菌群力影響。將提取物和萃取物分別按基礎飼料質(zhì)量的1.00%添加至預先的上述配合飼料素氯霉素按基礎飼料的1.00%添加至預先的上述配合飼料中，然后重新制成含有氯霉礎飼料空白對照組，每組35只克氏原螯蝦，不同的組飼喂不同添加物的飼料。實驗箱底餌料略有剩余為準，每天換水并吸污以保證水質(zhì)，飼喂實驗持續(xù)15d。標準曲線繪制10ml5mL的考馬斯亮藍染液，然后在各管1.0、0.9、0.8、0.7、0.6、0.5mLpH6.40.1M的磷酸鉀鹽緩沖液，然后各管再測定595nm處的吸光值，即得吸光值，并制作蛋白含量的標準曲線。2min595nm處吸光值，根據(jù)標準采用磷酸苯二鈉法測定磷酸酶活性（2）。以磷酸苯二鈉為底物，由堿性磷酸酶催5 鐵化鉀溶液(Potassiumferricyanide,5 以檸檬酸緩沖液替代碳酸鹽緩沖液，3760min，酸性磷酸酶的活性單位定或每克樣液蛋白所含酚的mg數(shù)來表示。將上述實驗的，在飼喂不同組飼料15d后，對每個從第2-3腹節(jié)間肌肉注射和48小時統(tǒng)計動物的率。SPSS16.036種醇提物中，只有菱、芡實、辣蓼、水芙蓉、、茜草、綬草和毛茛8種植物的乙醇提取物對金黃色葡萄球菌有抑制作用（3）；200mg/mL時，菱、、茜草、毛茛的抑菌活性較強，其抑菌圈直徑均顯著大于其它植物提取物的抑菌圈直徑（P<0.05）（1）；辣蓼和芙蓉蓮醇提物的抑菌活性相對較弱，當它們的濃nt nt TrapabispinosaEuryaleferoxPisitiastratiotesSolanumnigrumRubiacordifoliaSpiranthes注:6mm的瓊脂孔;標有相同字母的數(shù)據(jù)表示沒有顯著差異，標有不同字母的差Note:Inhibitionzonediametercovers6mmofagarhole.Thesamesuperscriptlettermarkedinthetablemeansnosignificantdifferenceamongthemandthedifferentsuperscriptlettermarkedinthetablemeanssignificantdifferenceat0.05. Pistia菱

RubiaFig.1InhibitionzoneofethanolextractsfromTrapabispinosaPisitiastratiotes,Rubiacordifolia,RanunculussieboldiiagainstStaphylococcusaureus Polygonum Pisitia圖2辣蓼、芙蓉蓮乙醇提取物對金黃色葡萄球菌的抑菌圈直徑Fig.2InhibitionzoneofethanolextractsfromPolygonumhydropiper,PisitiastratiotesagainstStaphylococcusaureus芡實、辣蓼、、茜草、綬草、毛茛7種植物的乙醇提取物對大腸桿菌有抑制作用種植物的水提物在濃度為200mg/mL時對大腸桿菌具有抑制作用，其抑菌圈直徑為nt nt 濃度TrapabispinosaEuryaleferoxSolanumnigrumRubiacordifoliaSpiranthessinensisRanunculus注:6mm的瓊脂孔;標有相同字母的數(shù)據(jù)表示沒有顯著差異，標有不同字母的差Note:TInhibitionzonediametercovers6mmofagarhole.Thesamesuperscriptlettermarkedinthetablemeansnosignificantdifferenceamongthemandthedifferentsuperscriptlettermarkedinthetablemeanssignificantdifferenceat0.05.

SpiranthesFig.3InhibitionzoneofextractsfromRanunculussieboldii,Trapabispinosaethanolextract,SpiranthessinensiswaterextractagainstEscherichiacoli4種植物的乙醇提取物對沙門氏菌有抑制作用（表5），菱、芡實、、茜草抑菌活性11.50mm35種植物的水提取物在濃度為200mg/mL時也均未表現(xiàn)出對沙門氏菌的抑菌作用。nt nt Solanum TrapabispinosaEuryaleferoxRubia注:6mm的瓊脂孔;標有相同字母的數(shù)據(jù)表示沒有顯著差異，標有不同字母的差Note:Inhibitionzonediametercovers6mmofagarhole.Thesamesuperscriptlettermarkedinthetablemeansnosignificantdifferenceamongthemandthedifferentsuperscriptlettermarkedinthetablemeanssignificantdifferenceat0.05.

Rubia

Spiranthes

Fig.4InhibitionzoneofextractsfromTrapabispinosa,Pisitiastratiotes,Rubiacordifolia,Euryaleferoxethanolextract,SpiranthessinensisWaterextractagainstSalmonellatyphimurium種植物的水提物中，在濃度為200mg/mL時也均未表現(xiàn)出對銅綠假單胞菌的抑菌作用。心蓮子草、菱、鴨舌草、、茜草、綬草、馬齒莧、金錢草、毛茛、活血丹、的水提物中，空心蓮子草、茜草、、綬草、繁縷、蒲公英6種植物的水提物對嗜水氣單胞菌有抑菌作用（8）。芡實和綬草的抑菌活性最強；繁縷和蒲公英的抑菌活性最弱nt nt TrapabispinosaEuryaleferoxSolanumnigrumRubiacordifoliaRanunculus注:6mm的瓊脂孔;標有相同字母的數(shù)據(jù)表示沒有顯著差異，標有不同字母的差Note:Inhibitionzonediametercovers6mmofagarhole.Thesamesuperscriptlettermarkedinthetablemeansnosignificantdifferenceamongthemandthedifferentsuperscriptlettermarkedinthetablemeanssignificantdifferenceat0.05.菱

Solanum

PolygonumFig.5InhibitionzoneofextractsfromTrapabispinosa,Pisitiastratiotes,Ranunculussieboldii,PolygonumhydropiperethanolextractagainstPseudomonasaeruginosant nt AlternantheraphiloxeroidesTrapabispinosaMonochoriavaginalisSolanumnigrumRubiacordifoliaPortulacaoleraceaSpiranthessinensisLysimachiachristinaeRanunculussieboldiiGlechomalongituba注:6mm的瓊脂孔;標有相同字母的數(shù)據(jù)表示沒有顯著差異，標有不同字母的差Note:Inhibitionzonediametercovers6mmofagarhole.Thesamesuperscriptlettermarkedinthetablemeansnosignificantdifferenceamongthemandthedifferentsuperscriptlettermarkedinthetablemeanssignificantdifferenceat0.05.3636種醇提物中，空心蓮子草、菱、、茜草、綬草、金錢草、活血丹、馬齒莧、毛茛、辣蓼10種植物的乙醇提取物對溫和氣單胞菌有抑制作用（表9）。、茜草、綬草、活血丹、36種植物的水提物中，空心蓮子草、鴨舌草、子草水提物的抑菌活性最強芡實和綬草的抑菌活性最強（9）29種植物的水提取在濃度為200mg/mL時仍無法檢測出對嗜水氣單胞菌的抑菌活性。 SpiranthesRubia

菱

GlechomaFig6InhibitionzoneofethanolextractsfromTrapabispinosa,Pisitiastratiotes,Ranunculussieboldii,Portulacaoleracea,Rubiacordifolia,GlechomalongitubaethanolextractagainstAeromonashydrophilant nt EuryaleferoxSolanumnigrum laria Herba 注:6mm的瓊脂孔;標有相同字母的數(shù)據(jù)表示沒有顯著差異，標有不同字母的差Note:Inhibitionzonediametercovers6mmofagarhole.Thesamesuperscriptlettermarkedinthetablemeansnosignificantdifferenceamongthemandthedifferentsuperscriptlettermarkedinthetablemeanssignificantdifferenceat0.05. laria

Spiranthes

Euryale

HerbaFig.7InhibitionzoneofwaterextractsfromSpiranthessinensis,Euryaleferox,S media,HerbaTaraxacigainstAeromonashydrophilant nt AlternantheraphiloxeroidesTrapabispinosaSolanumnigrumRubiacordifoliaSpiranthessinensisLysimachiachristinaeSpiranthessinensisPortulacaoleraceaRanunculussieboldiiPolygonum注:6mm的瓊脂孔;標有相同字母的數(shù)據(jù)表示沒有顯著差異，標有不同字母的差Note:Inhibitionzonediametercovers6mmofagarhole.Thesamesuperscriptlettermarkedinthetablemeansnosignificantdifferenceamongthemandthedifferentsuperscriptlettermarkedinthetablemeanssignificantdifferenceat0.05.Solanum

Rubia Glechoma

Fig.8InhibitionzoneofethanolextractsfromSolanumnigrum,Ranunculussieboldii,Pisitiastratiotes,Rubiacordifolia,GlechomalongitubaagainstAeromonassobriant nt SpiranthessinensisSolanumnigrumHerbaTaraxaciSlariamedia注:6mm的瓊脂孔;標有相同字母的數(shù)據(jù)表示沒有顯著差異，標有不同字母的差異Note:Inhibitionzonediametercovers6mmofagarhole.Thesamesuperscriptlettermarkedinthetablemeansnosignificantdifferenceamongthemandthedifferentsuperscriptlettermarkedinthetablemeanssignificantdifferenceat0.05. Herba Solanum

Glechoma Spiranthes

Fig.9InhibitionzoneofwaterextractsfromSpiranthessinensis,Alternantheraphiloxeroides,HerbaTaraxaci,Glechomalongituba,SolanumnigrumagainstAeromonassobria36種植物的水提物和醇提物對副溶血弧菌的抑菌實驗表明，在36種醇提物中，空心蓮子草、菱、、茜草、綬草、金錢草、活血丹、馬齒莧8種植物的乙醇提取物對副溶血弧菌有抑制作用（表11）。、毛茛、空心蓮子草、菱、茜草、活血丹的抑菌活性較強（10）；28200mg/mL時仍無法檢測出對副溶血弧菌的抑菌活性。在36種植物的水提物中，空心蓮子草、菱、綬草、繁縷、、200mg/mL19.00mm200mg/mL

nt nt 菱 RubiaPortulacaoleraceaGlechomalongituba注:6mm的瓊脂孔;標有相同字母的數(shù)據(jù)表示沒有顯著差異，標有不同字母的差Note:Inhibitionzonediametercovers6mmofagarhole.Thesamesuperscriptlettermarkedinthetablemeansnosignificantdifferenceamongthemandthedifferentsuperscriptlettermarkedinthetablemeanssignificantdifferenceat0.05. Glechoma Solanum

Rubia

菱

Fig.10InhibitionzoneofethanolextractsfromRanunculussieboldii,Alternantheraphiloxeroides,Rubiacordifolia,Glechomalongituba,Solanumnigrum,Trapabispinosaethanolextractagainstnt nt TrapabispinosaSpiranthessinensisSolanumnigrum lariaGlechoma注:6mm的瓊脂孔;標有相同字母的數(shù)據(jù)表示沒有顯著差異，標有不同字母的差Note:Inhibitionzonediametercovers6mmofagarhole.Thesamesuperscriptlettermarkedinthetablemeansnosignificantdifferenceamongthemandthedifferentsuperscriptlettermarkedinthetablemeanssignificantdifferenceat0.05.菱

Fig.11InhibitionzoneofwaterextractsfromSpiranthessinensis,S lariamedia,Glechomalongituba,TrapabispinosaagainstVibrioParahemolyticus.植物提取物對動物致病菌的抑菌活性實驗表明，芡實、菱、茜草和的乙醇提取物312種萃取物和抗200mg/mL時對金黃色葡萄球菌的抑菌活性顯著霉素最低抑菌濃度和最小殺菌濃度為2.5mg/mL。 ExtractantandPetroleumetherextractantofethanolextractfromEuryaleferoxextractfromEuryaleN-butanolextractantofethanolextractfromEuryaleferoxextractfromTrapaextractfromTrapaextractfromTrapaextractfromRubiaEthylAcetateextractantofehanolextractfromRubiacordifoliaextractfromRubiaextractfromSolanumextractfromSolanumextractfromSolanum1.00%注:6mm的瓊脂孔;標有相同字母的數(shù)據(jù)表示沒有顯著差異，標有不同字母的差Note:Inhibitionzonediametercovers6mmofagarhole.Thesamesuperscriptlettermarkedinthetablemeansnosignificantdifferenceamongthemandthedifferentsuperscriptlettermarkedinthetablemeanssignificantdifferenceat0.05.表14植物乙醇提取物的萃取物對金黃色葡萄球菌最小抑菌濃度（MIC)Table14MinimuminhibitoryconcentrationoftheextractantsfromethanolextractagainstExtractantandExtractantand 5Petroleumetherextractantofethanol -﹢﹢﹢fromEuryaleEthylAcetateextractantofehanolextract ﹢﹢﹢﹢EuryaleN-butanolextractantofethanolextract ﹢﹢﹢﹢EuryalePetroleumetherextractantofethanol ﹢﹢﹢﹢fromTrapaEthylAcetateextractantofehanolextract -﹢﹢﹢TrapaN-butanolextractantofethanolextract ﹢﹢﹢﹢TrapaPetroleumetherextractantofethanol ﹢﹢﹢﹢fromRubiaEthylAcetateextractantofehanolextract ﹢﹢﹢﹢RubiaN-butanolextractantofethanolextract ﹢﹢﹢﹢RubiaPetroleumetherextractantofethanol ﹢﹢﹢﹢fromSolanumEthylAcetateextractantofehanolextract ﹢﹢﹢﹢SolanumN-butanolextractantofethanolextract ﹢﹢﹢﹢Solanum1.00%氯霉 --﹢﹢ 1.00%注：“-”“+”表示平板上有細菌生長。Note：meansnoantibacterialactivity;meansgrowthofbacteria.ExtractantandExtractantand 5Petroleumetherextractantofethanol -﹢﹢﹢fromEuryale.EthylAcetateextractantofehanol ﹢﹢﹢﹢fromEuryaleN-butanolextractantofethanolextract ﹢﹢﹢﹢EuryalePetroleumetherextractantofethanol ﹢﹢﹢﹢fromTrapaEthylAcetateextractantofehanol -﹢﹢﹢fromTrapaN-butanolextractantofethanolextract ﹢﹢﹢﹢TrapaPetroleumetherextractantofethanol ﹢﹢﹢﹢fromRubiaEthylAcetateextractantofehanol ﹢﹢﹢﹢fromRubiaN-butanolextractantofethanolextract ﹢﹢﹢﹢RubiaPetroleumetherextractantofethanol ﹢﹢﹢﹢fromSolanumEthylAcetateextractantofehanol ﹢﹢﹢﹢fromSolanumN-butanolextractantofethanolextract ﹢﹢﹢﹢Solanum1.00%氯霉 --﹢﹢ 1.00%注：“-”“+”表示平板上有細菌生長.Note：meansnoantibacterialactivity;meansgrowthofbacteria200mg/mL1.00%氯霉素為5mg/mL，茜草乙醇提取物乙酸乙酯萃取物最低抑菌濃度和最小殺菌濃為10mg/mL，1.00%氯霉素最低抑菌濃度和最小殺菌濃度為5mg/mL。Extractantand Petroleumetherextractantof extractExtractantand Petroleumetherextractantof extractfromEuryaleEthylAcetateextractantof extractfromEuryaleN-butanolextractantof extractfromEuryalePetroleumetherextractantof extractfromTrapaEthylAcetateextractantof extractfromTrapaN-butanolextractantof extractfromTrapaPetroleumetherextractantof EthylAcetateextractantof extractfromRubiaN-butanolextractantof extractfromRubiaPetroleumetherextractantof extractfromSolanumEthylAcetateextractantof extractfromSolanumN-butanolextractantof extractfromSolanum 1.00% 注:6mm的瓊脂孔;標有相同字母的數(shù)據(jù)表示沒有顯著差異，標有不同字母的差Note:Inhibitionzonediametercovers6mmofagarhole.Thesamesuperscriptlettermarkedinthetablemeansnosignificantdifferenceamongthemandthedifferentsuperscriptlettermarkedinthetablemeanssignificantdifferenceat0.05.Extractantand ﹢ ﹢extractfromEuryaleEthylAcetateextractantofehanol fromEuryale﹢﹢﹢﹢N-butanolextractantofethanol ﹢﹢﹢﹢fromEuryalePetroleumetherextractantof ﹢﹢﹢﹢extractfromTrapaEthylAcetateextractantofehanol ﹢﹢﹢﹢fromTrapaN-butanolext