血小板的檢測原理及誤差分析課件

血小板的檢測原理及誤差分析學術(shù)應用部張文忠1血小板基礎(chǔ)什么是血小板？血小板（platelet,PLT）是由骨髓造血組織中的巨核細胞產(chǎn)生，具有維持血管內(nèi)皮完整性以及黏附、聚集、釋放、促凝和血塊收縮等功能。正常血小板形態(tài)呈兩面微凸的圓盤狀，直徑約1.5-3um，新生血小板體積大，成熟血小板體積小。正常血小板2大血小板血小板聚集異常形態(tài)血小板血小板衛(wèi)星現(xiàn)象3血小板檢測方法及原理1、流式細胞儀法：用免疫法熒光素標記特異的血小板單克隆抗體，常用CD41或CD61，用流式細胞儀計數(shù)血小板。目前為ICSH推薦的參考方法2、血液分析儀法：主要檢測原理包括點阻抗法和（或）光（或熒光）散射法，為常用方法3、相差顯微鏡直接計數(shù)法：相差顯微鏡下，血小板立體感增強，有助于識別血小板4、普通顯微鏡直接計數(shù)法：按不同的稀釋液，可分為破壞和不破壞紅細胞的PLT計數(shù)，稀釋液可用草酸銨、復方尿素、高鐵氰化鉀。4Sysmex-XN系列PLT檢測方法1、電阻抗法（PLT-I）2、光學法（PLT-O）3、熒光法（PLT-F）5電阻抗法（PLT-I）電阻抗法（PLT-I）：懸浮在電解質(zhì)溶液中的血細胞相對于電解質(zhì)溶液為非導電顆粒，其電阻比電解質(zhì)溶液大，利用兩者導電性的差異，當體積大小不同的血細胞（或類似顆粒）通過計數(shù)小孔時，可引起小孔內(nèi)、外電流或電壓的變化，形成與血細胞數(shù)量相當、體積大小相當?shù)拿}沖電壓，從而間接區(qū)分細胞，電流或電壓變化的頻次即為細胞（或顆粒）的數(shù)量，故此法可受小紅細胞、紅細胞碎片、小微粒、大血小板、血小板聚集等的影響6PLT-I浮動界標*鞘流阻抗法浮動界標7血小板直方圖分布范圍：LD(2～6)Fl;UD(12-30）fl之間反映參數(shù)：PLT、MPV、PDW高位干擾：小RBC、大血小板，血小板聚集低位干擾：電流、塵埃等PLPU100%20%10fl20fl30fl40fl12fl8PDW/P-LCRPDW

假設(shè)峰值高度為100%，在20%頻率水平上的分布寬度即為PDW。單位用fL表示，其中1fL=10-15L。P-LCRP-LCR為由12fL界標或更大界標得到的巨型血小板的比值。計算時，將固定界標與高界標之間的粒子數(shù)，同低界標與高界標之間的粒子數(shù)相比而得到一個比值。9PLT-I方法學優(yōu)缺點優(yōu)點：目前常規(guī)篩檢PLT的主要方法1.檢測速度快2.重復性好3.準確性高4.同時提供多項指標缺點：容易受干擾因素影響，導致結(jié)果出現(xiàn)偏差1.假性增高：小紅細胞、紅細胞碎片、微小細胞碎片2.假性減低：微小血小板、大血小板、血小板聚集10光學法（PLT-O）光學法（PLT-O）：在RET通道中，熒光染液（主要成分為聚次甲基、噁嗪）能夠?qū)毎麅?nèi)的RNA和部分DNA染色，通過光信號的強弱區(qū)分細胞（RET通道特異性針對紅細胞膜表面的RNA）。側(cè)向熒光（SFL）前向散射光（FSC）白細胞強強網(wǎng)織紅細胞中強紅細胞弱強血小板弱弱11PLT-O優(yōu)缺點優(yōu)點：避免小紅細胞、紅細胞碎片、小微粒引起的PLT假性增高避免大血小板引起的PLT假性減低缺點：假性減低：微小血小板、血小板聚集12熒光法（PLT-F）PLT-F：使用專用通道，染色液FluorocellPLT主要對含核酸豐富的細胞內(nèi)構(gòu)造進行染色主要是小胞體（核糖體RNA）和線粒體（MtDNA），PLT-F檢測顆粒數(shù)是PLT-O或PLT-I的5倍，能夠同時報告IPF（網(wǎng)織血小板或未成熟血小板），PLT-F通道對血小板聚集更加敏感。13SFLSFLFSCPLT-O(XE)PLT-F(XN)FSCPLT-FPLT-OIPFIPFLowersizePLTLowersizePLTPLT-F與PLT-O的差異PLT-F通道的染液對PLT的染色效果更敏感，微小血小板能夠檢出檢測顆粒數(shù)是PLT-O或PLT-I的5倍14各PLT測定模式的重復性比較低值范圍的血小板樣本中，PLT-F測定的精度最高無PLT體積分布異常報警信息有PLT體積分布異常報警信息單位15在沒有干擾的情況下Correlationwithimmnologicalmethod(anti-CD-61

Ab;Abbott).Subjects:SampleswithPLT-Imeasurementabnormality(n=120),fragments,g-PLTandsoon.X-axis:anti-CD61method,Y-axis:PLT-I,-Oor-F16IPF（RP）的臨床意義血小板減少癥的病因?qū)W診斷生成減少：再障、白血病及腫瘤，由于骨髓受抑制，血小板總數(shù)減少，RP比例大致正常，而RP絕對值明顯低于正常破壞增加：ITP，骨髓生成血小板加快，外周血中新生血小板增多，使RP比例升高。但由于血小板壽命縮短，使RP絕對值減少。脾亢雖有血小板減少，但RP比例接近正常，RP絕對值亦低于正常水平消耗增加：TTP，DIC，雖有血小板減少，但RP比例接近正常，RP絕對值亦低于正常水平

分布異常：脾大、血液被稀釋等先天性：新生兒血小板減少癥、巨大血小板綜合征等

17血小板聚集血小板聚集散點圖血小板未聚集散點圖18FSCW(FSC-Width)FSCFSCLaserFSCDirectionofSheathFlowNormalPlateletsFSC_WFSC_WPLTClumpsLaserFSC19PLT-F優(yōu)點優(yōu)點：高特異性，與CD41/CD61流式細胞儀檢測相當排除網(wǎng)織紅細胞影響，排除紅細胞碎片及小紅細胞影響排除微小血小板假性減少5倍顆粒檢測，即使低值血小板依然有較高的精度PLT-F可檢測IPF，為診斷PLT減少的原因提供分析數(shù)據(jù)敏感監(jiān)測血小板聚集20誤差分析血小板聚集小紅細胞/紅細胞碎片巨大血小板211、血小板聚集引起的血小板減少癥22鏡檢23EDTA和肝素抗凝不良是引起假性血小板減少癥最常見的原因。IgG自身抗體是EDTA-抗凝不良的主要原因，導致血小板聚集，血小板計數(shù)假性降低。常見病例：免疫疾?。鹤陨砻庖咝约膊。馨驮錾约膊』颊咻^多感染癥：敗血病，病毒感染等一過性假性血小板減少藥物：有報告說部分抗生素引起的病例，但致病機理不明自身抗體：有報告說健康人有發(fā)生解決方案：枸櫞酸鈉，肝素，無抗凝，vortex攪拌儀器攪拌，氟化鈉+EDTA的血糖采血管；自身抗體引起的聚集也可采取血漿置換的方法242、小紅細胞+紅細胞碎片252627分析思路：PLT直方圖出現(xiàn)大幅度抬高，MCV值為53.2，并報警有紅細胞碎片，從PLT直方圖目測其高值鑒別線在25-30fl之間，懷疑是高值鑒別線較高原因把部分小紅細胞和紅細胞碎片計入了血小板里，出現(xiàn)PLT-I假性增高。而在PLT-F通道可以排除小紅細胞和紅細胞碎片的干擾，并對血小板值進行修正。28鏡檢解決方案：顯微鏡鏡檢發(fā)現(xiàn)有紅細胞大小不均，有大量紅細胞碎片存在。血小板散在分布，數(shù)量正常。此種情況下，PLT-I必然假性增高，使用PLT-F可以完全排除干擾293、巨大血小板劉某，女70歲，因身體不適，在縣城二級醫(yī)院就診，血常規(guī)檢查，WBC:6.1*10E9/L，RBC:5.4*10E12/L，HGB:132g/L,PLT:10*10E9/L，轉(zhuǎn)診至某三甲醫(yī)院血液科就診，PLT-I：8*10E9/L，使用PLT-F通道后，PLT-F：24*10E9/L,IPF:75.8%，推片鏡檢，可見血小板明顯減少，血小板體積明顯增大。303132分析思路：在RBC/PLT通道中，只是通過體積鑒別，無法將巨大血小板和紅細胞分開。在PLT-F通道中，采用特殊的染料使血小板進行染色計數(shù)。鏡檢：鏡下發(fā)現(xiàn)巨大血小板，與