細胞融合和單克隆抗體的制備

細胞融合和單克隆抗體的制備2010-3-261第一頁，共二十四頁，編輯于2023年，星期三2.2.2

動物細胞融合與單克隆抗體上杭二中謝金金上杭縣高中生物校際教研活動公開課2010-3-262第二頁，共二十四頁，編輯于2023年，星期三植物體細胞雜交植物細胞A植物細胞B原生質體A原生質體B原生質體融合雜種細胞組織培養(yǎng)雜種植株去細胞壁纖維素酶、果膠酶化學法物理法2010-3-263第三頁，共二十四頁，編輯于2023年，星期三一、動物細胞融合1、概念：指兩個或多個動物細胞結合形成一個細胞的過程。2、結果：形成單核的雜交細胞3、原理：細胞膜的流動性4、過程：5、意義：突破了有性雜交方法的局限，使遠緣雜交（種間、屬間、科間、動植物之間）成為可能。6、應用：成為研究細胞遺傳、細胞免疫、腫瘤和生物新品種培育等的重要手段。特別是利用雜交瘤技術制造單克隆抗體2010-3-264第四頁，共二十四頁，編輯于2023年，星期三4、過程：動物細胞A動物細胞B誘導，融合2個完整的雜交細胞AB有絲分裂（膜融合、誘導方法質融合、核融合）單核細胞2010-3-265第五頁，共二十四頁，編輯于2023年，星期三2、什么是抗體？二、單克隆抗體回顧3、抗體的分布？抗體是機體受抗原刺激后產生的、并能與該抗原發(fā)生特異性結合的具有免疫功能的球蛋白。主要分布在血清中。1、什么是克?。俊翱寺　睆挠⑽摹癱lone”音譯而來，是指從一個共同祖先，通過無性繁殖的方法產生出來的一群遺傳特性相同的DNA分子，細胞或個體。在細胞水平指動物細胞培養(yǎng).2010-3-266第六頁，共二十四頁，編輯于2023年，星期三該法制備抗體的特點：

產量低、純度低，且抗體的特異性差、靈敏度低。自主閱讀P52：抗體的傳統(tǒng)生產方法及缺陷是什么？思考：如何獲取某種特定抗體？2010-3-267第七頁，共二十四頁，編輯于2023年，星期三B淋巴細胞特點３．每一個B淋巴細胞只能產生一種抗體。１．B淋巴細胞受抗原刺激后，可以產生抗體。２．動物體內的B淋巴細胞可以產生百萬種以上的抗體，每種抗體對特定的抗原具有特異性免疫作用。2010-3-268第八頁，共二十四頁，編輯于2023年，星期三二、單克隆抗體

由單個B淋巴細胞經過無性繁殖（克?。?，形成基因型相同的細胞群，這一細胞群所產生的化學性質單一、特異性強的抗體

稱為單克隆抗體。1、概念:2010-3-269第九頁，共二十四頁，編輯于2023年，星期三怎樣才能大量生產單克隆抗體？提示1：僅用細胞培養(yǎng)技術可行嗎？提示2：我們所學的哪種細胞是可以無限增殖的？提示3：有什么方法能使B細胞產生抗體的能力和腫瘤細胞無限增殖能力同時具備呢？2010-3-2610第十頁，共二十四頁，編輯于2023年，星期三大量生產單克隆抗體思路B淋巴細胞具產生抗體的功能骨髓瘤細胞具無限增殖的特性利用細胞融合的技術將兩種細胞融合獲得具有淋巴細胞和骨髓瘤細胞特性的雜交瘤細胞利用動物細胞培養(yǎng)技術大量培養(yǎng)雜交瘤細胞2010-3-2611第十一頁，共二十四頁，編輯于2023年，星期三B淋巴細胞注射特定抗原蛋白骨髓瘤細胞培養(yǎng)骨髓瘤細胞融合（只考慮兩兩融合）培養(yǎng)液中細胞有幾種類型？融合細胞幾種類型？骨髓瘤細胞---骨髓瘤細胞B淋巴細胞---B淋巴細胞B淋巴細胞---骨髓瘤細胞多種雜交細胞在具有篩選作用的培養(yǎng)基上培養(yǎng)專一抗體檢驗陽性克隆上述雜交細胞分開不同雜交細胞，克隆專一抗體，檢驗陽性細胞單克隆抗體注射到小鼠體內體外培養(yǎng)2、單克隆抗體的制備過程第1次篩選目的：得到雜交瘤細胞（多種）。第2次篩選目的：在雜交瘤細胞中篩選出能產生所需抗體的雜交瘤細胞。該細胞繼承雙親細胞的遺傳特性，既能產生專一抗體又能無限增殖。雜交瘤細胞有何特點？特異性強，靈敏度高2010-3-2612第十二頁，共二十四頁，編輯于2023年，星期三免疫小鼠培養(yǎng)骨髓瘤細胞融合骨髓瘤細胞B淋巴細胞注射特定抗原蛋白選擇培養(yǎng)基上培養(yǎng)專一抗體檢驗陽性專一抗體檢驗陽性注射到小鼠體內體外培養(yǎng)單克隆抗體克隆雜交細胞分開不同雜交細胞，克隆專一抗體，檢驗陽性細胞多種雜交細胞雜交瘤細胞有何特點？本過程利用的那些技術？動物細胞融合技術動物細胞培養(yǎng)技術是否注射抗原（只考慮兩兩融合）培養(yǎng)液中細胞有幾種類型？幾種融合細胞？兩次篩選的目的分別是什么？2、單克隆抗體制備過程與傳統(tǒng)制備的抗體相比具有什么特點？2010-3-2613第十三頁，共二十四頁，編輯于2023年，星期三3.單克隆抗體的應用：

①作為診斷試劑：準確識別各種抗原物質，并與特異性結合優(yōu)點：準確、高效、簡易、快速②用于運載藥物：制成“生物導彈”治療疾病：主要用于癌癥治療資料：目前世界各國已經研制出數(shù)以百計的單克隆抗體。許多缺乏良好診斷手段的傳染病、免疫性疾病、血液病、內分泌疾病和遺傳病，用單克隆抗體作為診斷手段，是一個必然趨勢。另外，用單克隆抗體做體內診斷，借以鑒別和定位體內“病灶”也引起人們的注意，目前，主要用于腫瘤追蹤及心肌梗塞的診斷。2010-3-2614第十四頁，共二十四頁，編輯于2023年，星期三兩個過程動物細胞融合過程單克隆抗體制備過程三個“一”一個誘導細胞融合的新方法一個新細胞一個優(yōu)勢課堂小結你記住了嗎？－－滅活的病毒－－雜交瘤細胞－－單克隆抗體特異性強、靈敏度高的優(yōu)勢2010-3-2615第十五頁，共二十四頁，編輯于2023年，星期三形成雜種細胞獲得雜種植株結果物理、化學方法（同左）滅活的病毒物理（離心、振蕩、電刺激）化學（聚乙二醇）誘導方法細胞膜的流動性細胞膜的流動性、植物細胞全能性原理動物細胞融合植物體細胞雜交比較項目1、植物、動物細胞融合的比較課堂小結融合前處理用纖維素酶、果膠酶去壁用胰蛋白酶使細胞分散2010-3-2616第十六頁，共二十四頁，編輯于2023年，星期三2、單克隆抗體制備過程B淋巴細胞骨髓瘤細胞誘導融合B-B細胞B-瘤細胞瘤-瘤細胞選擇培養(yǎng)雜交瘤細胞（B-瘤細胞）克隆化培養(yǎng)抗體檢測產生所需抗體的雜交瘤細胞體外培養(yǎng)小鼠腹腔內增殖單克隆抗體課堂小結2010-3-2617第十七頁，共二十四頁，編輯于2023年，星期三B體外培養(yǎng)骨髓瘤細胞雜交瘤細胞足夠數(shù)量的細胞群注射到小鼠腹腔AC

1.右圖為某同學根據(jù)雜交瘤技術的方法，設計的生產破傷風桿菌抗體的實驗方案制備單克隆抗體不能，沒有將抗原注入小鼠體內，無法獲得產生單一抗體的B淋巴細胞。(1).該實驗方案的目的是：________________(2).該方案能達到預期效果嗎？為什么？課堂練習2010-3-2618第十八頁，共二十四頁，編輯于2023年，星期三B體外培養(yǎng)骨髓瘤細胞雜交瘤細胞足夠數(shù)量的細胞群注射到小鼠腹腔AC

(3).A是從小鼠的脾臟中取得__________該細胞能夠產生______。(4).圖中B為________________過程，常用_________________作為誘導劑，該細胞繼承___________的遺傳特性，既能__________,又能___________。B淋巴細胞抗體細胞融合滅活的病毒雙親細胞產生專一抗體無限增殖課堂練習2010-3-2619第十九頁，共二十四頁，編輯于2023年，星期三B體外培養(yǎng)骨髓瘤細胞雜交瘤細胞足夠數(shù)量的細胞群注射到小鼠腹腔AC

(5).__________技術是單克隆抗體的技術支持。動物細胞培養(yǎng)（6）單克隆抗體的特點________________，并可大量制備。特異性強，靈敏度高課堂練習2010-3-2620第二十頁，共二十四頁，編輯于2023年，星期三2、動物細胞融合和植物細胞雜交的比較中，正確的是（）A.誘導融合的方法完全相同B.所用的技術手段完全相同C.所采用的原理完全相同D.都能形成雜種細胞課堂練習D2010-3-2621第二十一頁，共二十四頁，編輯于2023年，星期三3、用a表示骨髓瘤細胞，用b表示B淋巴細胞，則細胞融合過程中兩次篩選的目的分別是（）A.a、aa、ab、bb、ba、aa、ababB.a、aa、ab、bb、bab、bb、babC.a、aa、ab、bb、bab產生特定抗體的abD.a、aa、ab、bb、baa能無限增殖的aaC課堂練習課后練習：練習冊P312.2.2動物細胞融合與單克隆抗體2010-3-2622第二十二頁，共二十四頁，編輯于2023年，星期三已成功的動物細胞融合實例還有哪些？生物種類成功年代酵母菌—雞1975年人—胡