分子生物學(xué)實(shí)驗(yàn)室的常規(guī)儀器設(shè)備及有關(guān)操作

分子生物學(xué)實(shí)驗(yàn)室的常規(guī)儀器設(shè)備及有關(guān)操作一、驗(yàn)室的常規(guī)儀器、設(shè)備(一)溫度控制系統(tǒng)：1.冰箱:根據(jù)藥品、試劑及多種生物制劑保存的需要，必須具備不同控溫級(jí)別的冰箱，最常使用的有：4℃、-20℃、-80℃冰箱。4℃適合儲(chǔ)存某些溶液、試劑、藥品等。-20℃適用于某些試劑、藥品、酶、血清、配好的抗生素和DNA、蛋白質(zhì)樣品等。-80℃適合某些長期低溫保存的樣品、純化的樣品、特殊的低溫處理消化液等的保存。0-10℃的冷柜適合低溫條件下的電泳、層析、透析等實(shí)驗(yàn)。2．液氮罐：有些實(shí)驗(yàn)材料、某些器官組織、細(xì)胞株、菌株及純化的樣品等，要求速凍和長期保存在超低溫環(huán)境下，就需要一個(gè)液氮罐（-196℃）具有經(jīng)濟(jì)、省力和較好地保持細(xì)胞生物學(xué)特性的優(yōu)點(diǎn)。3．培養(yǎng)箱：37℃恒溫箱用于細(xì)菌的固體培養(yǎng)和細(xì)胞培養(yǎng)。CO2培養(yǎng)箱適用于培養(yǎng)各種細(xì)胞，可恒定地提供一定量的CO2（通常5%），用來維持培養(yǎng)液的酸度（pH值）。37℃恒溫空氣搖床可進(jìn)行液體細(xì)菌的培養(yǎng)。4.水浴鍋：用于保溫。25-100℃水浴搖床可用于分子雜交試驗(yàn)，各種生物化學(xué)酶反應(yīng)等試驗(yàn)的保溫。25-100℃水浴箱用于常規(guī)試驗(yàn)。5.烘箱：主用于烘干實(shí)驗(yàn)器皿，有些需要溫度高些，有些需要溫度低些。用于RNA方面的實(shí)驗(yàn)用具，需要在250℃烤箱中烘干，有些塑料用具只能在42-45℃的烤箱中進(jìn)行烘干。（二）水的凈化裝置：隨著分子生物學(xué)的飛速發(fā)展，許多實(shí)驗(yàn)對(duì)水純度的要求越來越高。1.蒸餾水皿：單蒸水常難以滿足實(shí)驗(yàn)要求。雙蒸水、三蒸水配液，許多實(shí)驗(yàn)要去離子水。多次蒸餾水可除去水中揮發(fā)性雜質(zhì)，不能完全除去水中溶解的氣體雜質(zhì)（Mn2+、Cu2+、Zn2+、Fe3+、Mo(Ⅵ)）。2.離子交換器：去離子水—用離子交換法制取的水，稱去離子水。去離子效果好，但不能除去水中的非離子型雜質(zhì)，其中常含有微量的有機(jī)物（樹脂等）。3．超純水：用蒸餾水、離子交換水、反滲透純水做為供水，磁鐵耦合齒輪泵作用使水循環(huán)。用于PCR、PCR氨基酸分析、DNA測(cè)序、酶反應(yīng)、組織和細(xì)胞培養(yǎng)等。（三）菌消毒設(shè)備：分子生物學(xué)所用大部分試劑，而且實(shí)驗(yàn)用具都應(yīng)嚴(yán)格消毒滅菌。。1．蒸汽消毒鍋：用于小批量物品的隨時(shí)消毒。大批實(shí)驗(yàn)物品、試劑、培養(yǎng)基可使用大型消毒且定時(shí)進(jìn)行消毒2.紫外線：75%乙醇、0.1%SDS（消毒劑）一些耐高壓、高溫消毒且可用紫外線照射或乙醇和SDS浸泡。紫外線照射使用方便，且很方便，但滅菌效果與距離有關(guān)，且產(chǎn)生臭氧污染安全，用于無菌室，超凈臺(tái)和塑料用具的消毒。3.濾器濾膜：不耐高溫、高壓的試劑用其處菌。4.煮沸消毒：主用于金屬器械和針急需時(shí)采用。（四）計(jì)量系統(tǒng)：1.稱量系統(tǒng)：（各種天平）臺(tái)秤、托盤天平、鈕力擺動(dòng)天平、光電分子天平、精密電子分析天平2.液體體積的度量：精：量筒、移液管、微量取液器，粗：刻度試管、燒杯、錐形瓶3.pH值測(cè)量：pH計(jì)：測(cè)定溶液中H+的直接電位的儀器，主要通過一對(duì)電極，在不同的pH溶液中產(chǎn)生不同的電動(dòng)勢(shì)用pH值表示出來。（十）干燥設(shè)備：1.真空加熱干燥箱：核酸在硝酸纖維素膜和尼龍膜上固定，用于雜交實(shí)驗(yàn)。2.電泳凝膠干燥箱：電泳后的凝膠進(jìn)行脫水干燥的儀器，一般可將凝膠干燥到一些玻璃紙上，干燥后的凝膠易于保存。3.液氮冷凍干燥：適用于活性蛋白質(zhì)樣品的干燥與結(jié)晶。4.真空泵：許多實(shí)驗(yàn)都需要抽真空。如：乙醇沉淀后核酸樣品的干燥，電泳凝膠的干燥等。（十一）其他1.微波爐：便于一些溶液的快速加熱和定溫加熱，電泳瓊脂糖凝膠配制、溶化等。2.制冰機(jī)：用于制造大多數(shù)核酸、蛋白質(zhì)的實(shí)驗(yàn)操作所需的低溫環(huán)境，以減少核酸酶或蛋白質(zhì)酶的水解。3.層析裝置：（色譜分離）是一種分離多組分混合物的有效物理方法。真空印記系統(tǒng)，DNA合成/測(cè)序儀：這些都是對(duì)核酸進(jìn)行深入研究的必備儀器。4.磁力攪拌器：多角度旋轉(zhuǎn)混勻器、快速振蕩混合器：用于混合儀器。5.組織勻漿器：超聲組織及細(xì)胞破碎器，用其進(jìn)行樣品的分離提純實(shí)驗(yàn)。6.通風(fēng)櫥：很多溶劑能逸出毒氣，必備柜，放射性試驗(yàn)還要有有機(jī)玻璃屏蔽。7.玻璃蒸餾器、電熱加帽、變壓器：用于酚等有機(jī)溶劑的蒸餾。8.Tip頭、Eppendorf管：微管移液器tip頭（吸液尖）、Eppendorf管（微量離心管）可洗滌，硅化消毒后反復(fù)使用。對(duì)一些要求嚴(yán)格的實(shí)驗(yàn)，如RNA的提取、保存等操作，應(yīng)使用新的消毒tip頭與Eppendorf管。另外還應(yīng)備有常用規(guī)格的離心管（1000ml、500ml、250ml、50ml、7ml等）及96孔、24孔、12孔、6孔的細(xì)胞培養(yǎng)塑料平板等。9.小型設(shè)備、用具：定時(shí)器、濾膜、保鮮膜、防護(hù)眼鏡鴨嘴鑷、常規(guī)的玻璃或塑料器皿（包括平皿、試管、燒杯、量瓶、試劑分液漏斗、避光保存的試劑應(yīng)使用棕色試劑瓶，如飽和酚、巰基乙醇等）、記號(hào)筆、各種手套PE、乳膠、家用、防酸的等）二、本期實(shí)驗(yàn)所用主要儀器、設(shè)備的功能及操作1.酚的重蒸餾裝置：空氣冷凝式玻璃蒸餾器。一般酚是無色透明的結(jié)晶，如呈粉色或黃色，表明其中含有酚的氧化產(chǎn)物，如醌、二酸等，變色的酚不能用于實(shí)驗(yàn)，因其中的酚氧化物可破壞核酸的磷酸二酯鍵，并引起DNA鏈的交聯(lián)。使用前必須在160℃-180℃重蒸餾以去除能引起RNA和DNA斷裂和交聯(lián)的污染雜質(zhì)，從而得到純凈的酚。2.磁力攪拌器：81-2型恒溫磁力攪拌器將導(dǎo)電溫度表用導(dǎo)線與二芯插頭連接，插入后面的溫度表孔內(nèi)，當(dāng)溫度上升到預(yù)先調(diào)整好的度數(shù)時(shí)即自動(dòng)停止加熱（控溫?cái)嚢瑁?。主要用于物質(zhì)的快速攪拌、溶解和混勻。如配制試劑，制備酚的水飽和液等。43.蒸餾水器：1810B自動(dòng)雙重純水蒸餾器，石英管加熱式，本器的一次及二次蒸餾均有保護(hù)裝置，使用安全可靠，熱繼電器當(dāng)冷卻水突然中斷或缺水的情況下，即自動(dòng)切斷電源。干簧繼電器控制二次蒸餾瓶內(nèi)的水位，其高度應(yīng)以在水位降低時(shí)能自動(dòng)切斷電源為準(zhǔn)，從而達(dá)到自動(dòng)控制水位的目的。該儀器主要用于制備雙蒸水和三蒸水。4.離心機(jī)：TGL-16G臺(tái)式高速離心機(jī)，最大轉(zhuǎn)速20000rpm，主要用于核酸提取時(shí)蛋白質(zhì)的沉淀和有機(jī)相與水相的分層，PCR檢測(cè)的瞬時(shí)離心。5.微量取液器：主要用于精確量取微量液體體積和核酸水相的轉(zhuǎn)移。6.勻漿器：5ml、10ml玻璃勻漿器。主用于組織細(xì)胞的破碎。7.凝膠成像分析系統(tǒng)主用于核酸樣品瓊脂糖凝膠和PCR電泳結(jié)果的紫外觀察和照像。8.PCR儀：PTC-200基因擴(kuò)增儀體外擴(kuò)增核酸的儀器9.蒸汽消毒鍋：用于實(shí)驗(yàn)用試劑、器皿、用具等的滅菌清毒有電加熱式、電爐加熱式兩種。10.超凈臺(tái)：JJT-1300型潔凈工作臺(tái)，側(cè)流式。原理：吸進(jìn)氣經(jīng)過初、中級(jí)過濾皿（無紡布濾過）后，再通過風(fēng)機(jī)經(jīng)高級(jí)過濾器（超細(xì)玻璃纖維濾紙制成）而形成潔凈空氣。主要是在局部空氣造成潔凈空氣環(huán)境，以使工作區(qū)域中的懸浮粒子及微生物控制在最低限度內(nèi)。本臺(tái)操作壓為垂直層流壓，因此出風(fēng)面與操作位置不應(yīng)放置多余的物品，以免妨礙氣流的正常流動(dòng)，影響潔凈度，臺(tái)面板上的孔作為通風(fēng)孔，使用時(shí)避免有液體或其他物品漏入空中，以免影響內(nèi)部構(gòu)件。風(fēng)速可調(diào)。使用：75%乙醇消毒2-3次，擺放好實(shí)驗(yàn)用品。插上電源，紫外消毒30分鐘，啟動(dòng)風(fēng)機(jī)5m后關(guān)燈，關(guān)燈后10分鐘打開照明燈，即可使用。11.電泳系統(tǒng)：①\