缺血修飾白蛋白測(cè)

缺血修飾(xiūshì)白蛋白測(cè)定試劑的基本知識(shí)第一頁，共四十一頁。整理課件必須(bìxū)理解的基礎(chǔ)知識(shí)缺血修飾(xiūshì)白蛋白測(cè)定試劑盒組成及使用；什么是缺血修飾白蛋白；什么是白蛋白-鈷結(jié)合試驗(yàn)；白蛋白-鈷結(jié)合試驗(yàn)與缺血修飾白蛋白的內(nèi)在聯(lián)系；缺血修飾白蛋白與心肌缺血的內(nèi)在聯(lián)系以及心肌缺血與急性冠狀動(dòng)脈綜合征的相互關(guān)系；第二頁，共四十一頁。整理課件缺血修飾(xiūshì)白蛋白測(cè)定試劑盒缺血修飾白蛋白測(cè)定試劑是用于急性心肌缺血輔助診斷的體外診斷試劑，能夠在各種全自動(dòng)、半自動(dòng)生化分析儀上使用(shǐyòng)，為液體雙試劑，由長沙頤康科技開發(fā)有限公司生產(chǎn)；缺血修飾白蛋白的英文：IschemiaModifierdAlbumin,簡(jiǎn)稱IMA；液體雙試劑的組成：R1：Co2+、緩沖液、穩(wěn)定劑等R2：DTT、緩沖液、穩(wěn)定劑等第三頁，共四十一頁。整理課件缺血修飾(xiūshì)白蛋白（IMA）的概念血清白蛋白（HSA）氨基末端序列為人類所特有,是過渡金屬包括銅、鈷和鎳離子(lízǐ)主要的結(jié)合位點(diǎn),組織缺血時(shí)釋放的產(chǎn)物使循環(huán)血液中的部分HSA氨基末端結(jié)合位點(diǎn)改變,與金屬離子(lízǐ)結(jié)合能力下降,這部分發(fā)生了改變的HSA就稱為IMA。IMA在血液中濃度升高就提示發(fā)生了組織缺血。第四頁，共四十一頁。整理課件缺血修飾(xiūshì)白蛋白（IMA）的形成機(jī)制冠狀動(dòng)脈缺血時(shí)IMA產(chǎn)生的確切機(jī)制尚不清楚,各種觀點(diǎn)尚有矛盾,但已定位在HSA氨基末端N-天門冬氨酸(Asp)-丙氨酸(Ala)-組氨酸(His)-賴氨酸(Lys)序列的變化上。當(dāng)冠脈局部血液和氧供減少,組織細(xì)胞進(jìn)行無氧代謝,代謝產(chǎn)物乳酸堆積,導(dǎo)致酸中毒,局部微環(huán)境pH值下降,致使Cu2+從循環(huán)蛋白的結(jié)合位點(diǎn)釋放(shìfàng),在還原劑作用下轉(zhuǎn)化為Cu1+,Cu1+與氧反應(yīng)生成超氧自由基,后者岐化為過氧化氫(H2O2)和氧。H2O2可通過Fenton反應(yīng)形成羥自由基,羥自由基損害HSA,使N基末段序列的2～4個(gè)氨基酸發(fā)生N乙?；蛉笔?轉(zhuǎn)化為IMA。第五頁，共四十一頁。整理課件IMA的檢測(cè)(jiǎncè)方法IMA測(cè)定方法：比色測(cè)定法IMA檢測(cè)是以心肌缺血可引起HSA的N末端發(fā)生變化及其與Co(LL)結(jié)合迅速減少為前提,采用白蛋白-鈷結(jié)合實(shí)驗(yàn)測(cè)定白蛋白與外源性Co(LL)結(jié)合的能力間接測(cè)定IMA含量，所以叫白蛋白結(jié)合鈷試驗(yàn)（ACB試驗(yàn)），ACB試驗(yàn)已通過了美國國家藥品和食品管理局認(rèn)證，這是FDA自1994年批準(zhǔn)肌鈣蛋白的測(cè)定試驗(yàn)之后，首次批準(zhǔn)的一個(gè)用來評(píng)價(jià)心肌缺血的生化試驗(yàn)項(xiàng)目。試劑盒全世界目前有兩個(gè)生產(chǎn)廠家：美國局部缺血技術(shù)公司（IschemiaTechnoiogies,Denver,Colorado,USA）長沙(chánɡshā)頤康科技有限公司第六頁，共四十一頁。整理課件IMA的檢測(cè)(jiǎncè)原理

正常白蛋白以活性形式存在,加入鈷試劑后,Co2+與白蛋白N-末端結(jié)合,溶液中存在的游離Co2+濃度較低;而心肌缺血患者血清標(biāo)本中含有較多的IMA,加入同等量的鈷試劑后,由于IMA與Co2+的結(jié)合能力降低,溶液中存在較高濃度的游離Co2+,加入二巰基蘇糖醇(DTT)試劑后可與游離Co2+產(chǎn)生絡(luò)合反應(yīng),生成紅褐色產(chǎn)物，在470nm處測(cè)定(cèdìng)吸光度大小,其吸光度與Co2+濃度成正比，吸光度高者表示血清中存在較多的IMA。與標(biāo)準(zhǔn)品進(jìn)行比較，即可計(jì)算出樣本中ACB的值。第七頁，共四十一頁。整理課件IMA檢測(cè)標(biāo)本(biāoběn)采集與處理

受檢者的準(zhǔn)備：病人空腹12h，不飲酒24h后采集血樣;如果病人服用抗凝血藥物，血液在30分鐘內(nèi)不能凝固，結(jié)果解釋應(yīng)慎重。血清應(yīng)通過物理方法盡快與血細(xì)胞分離。推薦時(shí)間最長不要超過2小時(shí);

靜脈采血：除非是臥床的病人，一般在采血時(shí)取坐位。體位影響水分在血管內(nèi)外的分布，會(huì)影響測(cè)試項(xiàng)目的濃度。在采血前至少應(yīng)靜坐5分鐘，一般從肘靜脈取血，使用止血帶的時(shí)間不超過1分鐘，穿刺(chuāncì)成功后立即松開止血帶。

標(biāo)本處理：血樣采集后，應(yīng)在室溫下凝集后離心分離血清，血清樣本應(yīng)不溶血。測(cè)試必須在血液提取后2.5小時(shí)內(nèi)完成；如果測(cè)試不能在2.5小時(shí)內(nèi)完成，必須立即在-20℃或更低溫度下冷凍血清（分離凝塊和紅細(xì)胞），從血液提取到冷凍的時(shí)間應(yīng)在1小時(shí)以內(nèi)；解凍凍結(jié)的樣品需在2～8℃或室溫下進(jìn)行，通過低速渦流混勻器或輕輕顛倒充分混合，測(cè)試必須在樣品解凍后1.5小時(shí)內(nèi)獲得，不得含有EDTA、枸櫞酸鈉等鰲合劑的抗凝劑第八頁，共四十一頁。整理課件試劑(shìjì)與校準(zhǔn)血清的穩(wěn)定性

原包裝(bāozhuāng)試劑儲(chǔ)存在2～8℃至標(biāo)簽所示失效日期。試劑開瓶后，在儀器中至少可保存30天。試劑儲(chǔ)存在18～22℃穩(wěn)定28天，試劑應(yīng)避免污染。試劑顏色為澄清透明液體，當(dāng)試劑出現(xiàn)沉淀或絮狀物時(shí)，按照試劑失效處理。校準(zhǔn)血清在2～8℃儲(chǔ)存至標(biāo)簽所示失效日期，復(fù)溶后-20℃保存，可穩(wěn)定一個(gè)月，只可凍融一次，避免反復(fù)凍融。第九頁，共四十一頁。整理課件IMA的特性(tèxìng)及應(yīng)用心血管疾病是威脅人類健康與生命(shēngmìng)的頭號(hào)殺手，它具有高發(fā)病率、高致殘率、高死亡率及較高的治療費(fèi)用等特點(diǎn)。最近的流行病學(xué)資料顯示，我國現(xiàn)有高血壓患者達(dá)1.6億，高血脂人數(shù)達(dá)1.6億，約有400萬心力衰竭病人，平均每12秒就有一人死于心血管疾病，心血管疾病已逐漸成為我國城鄉(xiāng)居民的第一位死因。第十頁，共四十一頁。整理課件知識(shí)(zhīshi)的邏輯聯(lián)系

心血管疾病是威脅人類健康與生命的頭號(hào)殺手，它具有高發(fā)病率、高致殘率、高死亡率及較高的治療費(fèi)用等特點(diǎn)，心血管疾病已逐漸成為我國城鄉(xiāng)居民的第一位死因；

ACS是包括不穩(wěn)定心絞痛（UA）、非ST段升高的心肌梗死（NSTEMI）和ST段升高的心肌梗死（STEMI）等一組連續(xù)進(jìn)展的病癥(bìngzhèng)，連續(xù)進(jìn)展的特點(diǎn)是從心肌缺血到心肌損傷的發(fā)展，從可逆性改變向非可逆性改變的發(fā)展；

心肌缺血是ACS最常見的發(fā)病原因；

心肌缺血的早期診斷和干預(yù)能夠及時(shí)阻斷ACS的發(fā)展進(jìn)程，對(duì)于降低AMI的發(fā)病率、致殘率、死亡率具有重要的意義；

IMA是心肌缺血的早期標(biāo)志物；

IMA檢測(cè)試劑是檢測(cè)血清IMA含量的檢測(cè)試劑。

第十一頁，共四十一頁。整理課件急性(jíxìng)冠狀動(dòng)肪綜合征（Acutecoronarysyndromes,ACS）ACS是指動(dòng)肪粥樣硬化斑點(diǎn)脫落、血小板聚集、血栓形成，致使冠狀動(dòng)肪狹窄、阻塞，引起心肌缺血和梗死的病理現(xiàn)象。從臨床角度(jiǎodù)來看，它涵蓋了一組連續(xù)進(jìn)展的病癥，包括不穩(wěn)定心絞痛（UA），非ST段升高的心肌梗死（NSTEMI）和ST段升高的心肌梗死（STEMI）。心肌缺血是ACS最常見的發(fā)病原因。第十二頁，共四十一頁。整理課件急性(jíxìng)冠狀動(dòng)脈綜合征(Acutecoronarysyndromes,ACS)

ACS診斷(zhěnduàn)通常是很困難的。在急診有超過50%的以胸痛就診的病人未收治入院是因?yàn)槲茨茉\斷(zhěnduàn)為ACS，致使延誤治療發(fā)展至心肌梗死。確診為ACS的病人經(jīng)早期治療可以阻止心肌損害的進(jìn)程。所以盡早明確診斷(zhěnduàn)和開始治療對(duì)于患有ACS的病人是至關(guān)重要的。第十三頁，共四十一頁。整理課件ACS診斷(zhěnduàn)根據(jù)病史、癥狀(zhèngzhuàng)、體格檢查、心電圖、心肌標(biāo)志物診斷患者是否ACS、有無心肌壞死或死亡的危險(xiǎn)性，其中心電圖和心肌損傷標(biāo)志物已經(jīng)被廣泛使用。目前臨床應(yīng)用的心臟標(biāo)志物大致可分為三類：一類是主要反映心臟組織損傷的標(biāo)志物；第二類是了解心臟功能的標(biāo)志物；第三類是作為心血管炎癥疾病的標(biāo)志物。

第十四頁，共四十一頁。整理課件目前常用的心肌(xīnjī)損傷標(biāo)志物目前診斷ACS常用的生化標(biāo)志物是肌鈣蛋白(cTnI和cTnT)、肌紅蛋(myoglobin)、肌酸激酶同工酶(CK-MB),尤其是cTnI和cTnT在診斷、危險(xiǎn)(wēixiǎn)分層和治療中具有非常重要的作用,但它們均在心肌組織壞死后釋放入血才能測(cè)出。而評(píng)估ACS患者的心肌缺血往往需要在細(xì)胞死亡之前做出,以實(shí)現(xiàn)心肌損害可逆階段的及時(shí)治療第十五頁，共四十一頁。整理課件傳統(tǒng)方法(fāngfǎ)檢測(cè)心肌缺血的局限性心電圖常首先用來評(píng)估(pínɡɡū)以胸部不適就診的病人，但心梗的病人也可多表現(xiàn)為心電圖未見異常，其靈敏度低于50%；第十六頁，共四十一頁。整理課件傳統(tǒng)(chuántǒng)方法檢測(cè)心肌缺血的局限性心肌(xīnjī)肌鈣蛋白I(cTnI)或T(cTnT)具有高特異性,但其在心臟損傷發(fā)生6～12小時(shí)之后才能從血中檢測(cè)出，且對(duì)心肌(xīnjī)細(xì)胞損傷的特異性高，對(duì)可逆的心肌(xīnjī)缺血多為陰性第十七頁，共四十一頁。整理課件肌鈣蛋白三種亞型:TropI（TnI）、TropT（TnT）、TropC（TnC）TropI只特異心肌表達(dá)，不在骨骼肌表達(dá)發(fā)病(fābìng)后12h達(dá)高峰持續(xù)7~10天恢復(fù)正常，此階段不用來檢測(cè)再梗塞血漿TnI或TnT升高可診斷AMI肌鈣蛋白輕度增高可見：UA，CAD和腎衰第十八頁，共四十一頁。整理課件傳統(tǒng)(chuántǒng)方法檢測(cè)心肌缺血的局限性當(dāng)心臟受到損傷時(shí)，肌酸激酶(CK)、肌酸激酶同工酶(CK-MB)、肌紅蛋白(Myoglobin)從心肌細(xì)胞釋放入血，但這些(zhèxiē)酶也存在于骨骼肌，骨骼肌損傷時(shí)這些(zhèxiē)酶也會(huì)釋放入血，故特異性差，第十九頁，共四十一頁。整理課件CK-MB用于ACS診斷12-24hours高峰,2-3天后恢復(fù)正常CK-MB升高5倍后又恢復(fù)正常，診斷AMI24-48hCK-MB再次(zàicì)升高診斷再梗塞第二十頁，共四十一頁。整理課件影響(yǐngxiǎng)CK-MB升高的因素不穩(wěn)定型心絞痛急性冠脈綜合征心臟炎心肌疾病循環(huán)衰竭(shuāijié)和休克橫紋肌溶解癥惡性高熱心臟手術(shù)骨骼肌創(chuàng)傷皮肌炎 多發(fā)性肌炎肌肉(jīròu)萎縮癥高強(qiáng)度運(yùn)動(dòng)慢性乙醇中毒第二十一頁，共四十一頁。整理課件知識(shí)(zhīshi)的邏輯聯(lián)系

心血管疾病是威脅人類健康與生命的頭號(hào)殺手，它具有高發(fā)病率、高致殘率、高死亡率及較高的治療費(fèi)用(fèiyong)等特點(diǎn)，心血管疾病已逐漸成為我國城鄉(xiāng)居民的第一位死因；

ACS是包括不穩(wěn)定心絞痛（UA）、非ST段升高的心肌梗死（NSTEMI）和ST段升高的心肌梗死（STEMI）等一組連續(xù)進(jìn)展的病癥，連續(xù)進(jìn)展的特點(diǎn)是從心肌缺血到心肌損傷的發(fā)展，從可逆性改變向非可逆性改變的發(fā)展；

心肌缺血是ACS最常見的發(fā)病原因；

心肌缺血的早期診斷和干預(yù)能夠及時(shí)阻斷ACS的發(fā)展進(jìn)程，對(duì)于降低AMI的發(fā)病率、致殘率、死亡率具有重要的意義；

IMA是心肌缺血的早期標(biāo)志物；

IMA檢測(cè)試劑是檢測(cè)血清IMA含量的檢測(cè)試劑。

第二十二頁，共四十一頁。整理課件心肌缺血

心肌缺血是由于心肌細(xì)胞沒有受到充足的血液灌注而發(fā)生的生理功能受損；心肌缺血是ACS最常見的發(fā)病原因。

心肌缺血的主要依據(jù)是臨床癥狀和心電圖的改變；

心肌缺血的臨床表現(xiàn)往往是不典型的和多方面的，給診斷帶來困難；

心肌缺血可能導(dǎo)致(dǎozhì)心肌細(xì)胞的死亡，即心肌梗死；

急性心肌梗死的臨床診斷目前主要根據(jù)測(cè)定血清中的CK-MB、cTnIc、cTnT和心電圖等改變作出診斷。第二十三頁，共四十一頁。整理課件理想(lǐxiǎng)的心肌缺血標(biāo)志物的特征理想的心肌缺血標(biāo)志物應(yīng)具備以下特征：（1）靈敏度及特異性均高，必須能檢測(cè)心肌缺血，但在健康個(gè)體、炎癥及其他器官損傷期間均不增加；（2）心肌缺血期間應(yīng)該能夠早期檢測(cè)，且與心肌受累的范圍成比例增加；（3）在循環(huán)中穩(wěn)定性好，可持續(xù)檢測(cè)以保持一個(gè)足夠的期間，提供一個(gè)適宜(shìyí)的診斷窗口期；（4）24h內(nèi)血中濃度恢復(fù)到基礎(chǔ)水平，以便檢測(cè)復(fù)發(fā)性缺血，使勞累缺血的穩(wěn)定性冠脈病的混淆減到最??；（5）試驗(yàn)方法簡(jiǎn)單，TAT（來回時(shí)間）應(yīng)為30～60min或更短；（6）應(yīng)有可靠的分析特性、精密度良好（CV%低）；（7）合理的價(jià)格。第二十四頁，共四十一頁。整理課件IMA的特征(tèzhēng)IMA的特征:心肌特異性;肌缺血后迅速增高;循環(huán)中穩(wěn)定性好;24h內(nèi)血中濃度恢復(fù)基礎(chǔ)水平;容易檢測(cè)(jiǎncè),可很快得到結(jié)果;具有較好的分析特性。第二十五頁，共四十一頁。整理課件缺血修飾白蛋白測(cè)定的臨床(línchuánɡ)應(yīng)用缺血修飾白蛋白測(cè)定是通過測(cè)定白蛋白-鈷結(jié)合能力（ACB）來間接測(cè)定IMA的含量，檢測(cè)的臨床意義是以心肌缺血可引起HSA的N末端發(fā)生變化及其與Co(LL)結(jié)合迅速減少為前提,當(dāng)人體發(fā)生心肌缺血時(shí)，血液中缺血修飾白蛋白含量升高；缺血修飾白蛋白（IMA）測(cè)定的臨床應(yīng)用主要包括：作為診斷急性心肌缺血的早期生化標(biāo)志物用于急性心肌缺血的輔助(fǔzhù)診斷；輔助ACS的排除診斷和危險(xiǎn)分層；預(yù)測(cè)肌鈣蛋白檢測(cè)結(jié)果；判斷心肌缺血的嚴(yán)重程度；

第二十六頁，共四十一頁。整理課件IMA測(cè)定的臨床(línchuánɡ)應(yīng)用作為診斷急性心肌缺血的早期生化標(biāo)志物IMA與傳統(tǒng)的心肌壞死指標(biāo)不同,在心肌缺血發(fā)作后5～10min血中濃度即可升高,而不需發(fā)生心肌細(xì)胞的不可逆損傷,能夠輔助臨床醫(yī)生早期明確缺血的診斷,早期干預(yù)治療(zhìliáo),改善患者的預(yù)后和減少病死率。第二十七頁，共四十一頁。整理課件IMA測(cè)定的臨床(línchuánɡ)應(yīng)用輔助ACS的排除診斷和危險(xiǎn)分層鑒于IMA對(duì)急性心肌缺血診斷的高陰性預(yù)測(cè)值,FDA于2003年批準(zhǔn)其用于ACS的排除診斷,以降低(jiàngdī)對(duì)非心肌缺血性患者的收治率和心血管病高位個(gè)體的漏診率,節(jié)省醫(yī)療資源。第二十八頁，共四十一頁。整理課件IMA測(cè)定(cèdìng)的臨床應(yīng)用預(yù)測(cè)肌鈣蛋白檢測(cè)(jiǎncè)結(jié)果Christenson等進(jìn)行一項(xiàng)研究,在臨床癥狀和體征出現(xiàn)4h之內(nèi)采血測(cè)定IMA,探討IMA預(yù)測(cè)6～24h以后cTnT結(jié)果陽性或陰性的能力。結(jié)果顯示,白蛋白-鈷結(jié)合實(shí)驗(yàn)的ROC曲線下面積是0.78,在最佳臨界值75U/mL時(shí),IMA預(yù)測(cè)cTnT結(jié)果的敏感性和特異性分別是83%和69%,陰性預(yù)測(cè)值和陽性預(yù)測(cè)值分別為96%和33%。從而得出結(jié)論,ACS患者到達(dá)急診科時(shí),測(cè)定IMA的白蛋白-鈷結(jié)合實(shí)驗(yàn)有望成為6～24h以后cTnT結(jié)果陽性或陰性結(jié)果的早期預(yù)測(cè)指標(biāo)。第二十九頁，共四十一頁。整理課件IMA測(cè)定的臨床(línchuánɡ)應(yīng)用判斷心肌缺血的嚴(yán)重程度IMA不僅可早期診斷ACS而且可做為判斷心肌缺血嚴(yán)重程度的指標(biāo)應(yīng)用。Quiles等觀察了34例接受選擇性單支血管PCI治療的穩(wěn)定性心絞痛患者PCI前后IMA水平變化并對(duì)其相關(guān)因素進(jìn)行了分析。在PCI術(shù)前10min及最后一次球囊擴(kuò)張后5min之內(nèi)從股動(dòng)脈鞘管取血測(cè)定IMA水平。結(jié)果顯示,球囊擴(kuò)張前后IMA水平明顯升高(59.5u?mLvs80.9u?mL)。球囊擴(kuò)張4次及以下患者與球囊擴(kuò)張5次或以上的患者比較,IMA水平也明顯升高,且IMA水平與擴(kuò)張壓力及擴(kuò)張時(shí)間之間均呈顯著(xiǎnzhù)相關(guān)。這些結(jié)果提示,IMA是反應(yīng)心肌缺血程度的指標(biāo)。第三十頁，共四十一頁。整理課件ACS患者就診時(shí)各項(xiàng)檢測(cè)(jiǎncè)的臨床特性

靈敏度(%)特異性（%）IMA8246ECG4591CTn2099ECG+cTn5390IMA+ECG9243IMA+cTn9044IMA+ECG+cTn9542第三十一頁，共四十一頁。整理課件ACS患者就診時(shí)各項(xiàng)檢測(cè)(jiǎncè)的臨床特性

靈敏度(%)特異性（%）IMA8246ECG4591CTn2099ECG+cTn5390IMA+ECG9243IMA+cTn9044IMA+ECG+cTn9542第三十二頁，共四十一頁。整理課件第三十三頁，共四十一頁。整理課件第三十四頁，共四十一頁。整理課件第三十五頁，共四十一頁。整理課件肌鈣蛋白作為心肌損害標(biāo)志物具有較好敏感性和特異性,但約需4～6小時(shí)才釋放入血。IMA與傳統(tǒng)心肌壞死指標(biāo)不同,在心肌缺血數(shù)分鐘內(nèi),心肌局部灌注減低氧供減少,組織細(xì)胞進(jìn)行無氧代謝,代謝產(chǎn)物(如乳酸)堆積,局部微環(huán)境pH值下降,使循環(huán)蛋白釋放銅離子,后者導(dǎo)致羥自由基(OH·)增多,人血清白蛋白被氧自由基修飾轉(zhuǎn)化(zhuǎnhuà)為缺血修飾白蛋白(IMA),并可經(jīng)白蛋白鈷結(jié)合實(shí)驗(yàn)檢測(cè)到,從而在傳統(tǒng)檢查尚未發(fā)現(xiàn)異常的急性心肌缺血發(fā)生早期即可做出診斷。本研究入選的ACS患者中80%入院即刻測(cè)定cTnI無升高,僅40%可在入院即刻根據(jù)ECG診斷,而IMA顯示明顯優(yōu)勢(shì),敏感度達(dá)85%,明顯優(yōu)于傳統(tǒng)檢測(cè)方法ECG和生化指標(biāo)cTnI。在現(xiàn)用指標(biāo)cTnI和ECG基礎(chǔ)上加用IMA后,診斷敏感性明顯提高,證實(shí)IMA是傳統(tǒng)