血清胃泌素釋放肽前體（ProGRP）定量檢測(cè)標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)程

血清胃泌素釋放肽前體(ProGRP)定量檢測(cè)標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)程××醫(yī)院檢驗(yàn)科臨床免疫室作業(yè)指導(dǎo)書文件編號(hào):XXX生效日期：共頁(yè)第頁(yè)1.目的規(guī)范操作流程，保證血清胃泌素釋放肽前體(ProGRP)檢測(cè)的準(zhǔn)確性和可靠性。2.原理胃泌素釋放肽前體是一種兩步免疫檢測(cè)，運(yùn)用化學(xué)發(fā)光微粒子免疫檢測(cè)(CMIA)技術(shù)、通過靈活的Chemiflex檢測(cè)法，對(duì)人血清中的ProGRP片段(3198)進(jìn)行定量檢測(cè)。2．1·第1步：混合樣品、項(xiàng)目稀釋液和抗ProGRP抗體包被的順磁微粒。樣品中的ProGRP與抗ProGRP抗體包被的微粒相結(jié)合。2．2·第2步：沖洗后，在第2步添加吖啶酯標(biāo)記的抗ProGRP結(jié)合物，形成反應(yīng)混合液。再次沖洗后，向反應(yīng)混合液中添加預(yù)激發(fā)液和激發(fā)液。通過相對(duì)發(fā)光單位(RLUs)對(duì)產(chǎn)生的化學(xué)發(fā)光反應(yīng)進(jìn)行測(cè)量。樣品中的ProGRP量和ARCHITECi光學(xué)系統(tǒng)檢測(cè)到的RLUs呈比例關(guān)系。由此測(cè)定ProGRP的含量。3.標(biāo)本要求生的內(nèi)源性蛋白酶可能降解血清中的ProGRP，處理血清樣本時(shí)要特別小心。3．2·樣本類型：人血清(包括在血清分離管中采集的血清)，但不能使用含有基于凝血酶促凝劑的血清采集管，因?yàn)樵撝苿?huì)造成ProGRP降解。3．3．1按照生產(chǎn)商的指導(dǎo)說明使用血清采集管。重力分離法不能滿足樣本制備的需要。3．3．2樣本復(fù)融后要顛倒混勻10次或用低速旋渦振蕩器充分混勻。用肉眼觀察樣本，如果發(fā)現(xiàn)分層，則繼續(xù)混合樣本直至達(dá)到均質(zhì)狀態(tài)。復(fù)檢的樣本或者凍融的樣本必須在檢測(cè)前轉(zhuǎn)移至離心管，在≥10000RCF(相對(duì)離心力)的條件下離心10min，將澄清樣本轉(zhuǎn)移至樣品杯以備檢測(cè)。3．3．4如果離心后的樣本上覆蓋著脂質(zhì)層，那么必須分離血清至樣品杯。要注意的是，只吸取血清，而不要吸取脂質(zhì)層。樣本凝固后應(yīng)立即處理或移至2~8℃下儲(chǔ)存。超過3h，應(yīng)將血清從凝塊、紅細(xì)胞或分離膠中分離并冷凍儲(chǔ)存于－15℃以下。冷凍的樣本應(yīng)當(dāng)在7天內(nèi)檢測(cè)。如果樣本需要長(zhǎng)期儲(chǔ)存，應(yīng)將其置于－70℃下。經(jīng)檢測(cè)，樣本在－70℃下儲(chǔ)存12個(gè)月后，濃度沒有變化。血清標(biāo)本的在機(jī)時(shí)間不能超過1h。血清標(biāo)本只能凍融一次。心 (大約15000g，10min或2000~3500r／min，5~10min)澄清，方可進(jìn)行檢測(cè)。3．7·患者準(zhǔn)備的一般要求：患者在采血前24h內(nèi)應(yīng)避免運(yùn)動(dòng)和飲酒，不宜改變飲食習(xí)慣和睡眠習(xí)慣。一般主張?jiān)诮?2h后空腹取血，門診患者提倡靜坐15min后再采血。4.試劑與儀器4．2·試劑使用：試劑盒中的試劑是一個(gè)整體，打開后可立即使用，不能被分開。需要的確切操作信息，分別通過試劑的條碼讀取。MESng／ml。防腐劑：ProClin300。S菌劑。4．4．4試劑可以在ARCHITECTi系統(tǒng)上儲(chǔ)存，也可離機(jī)儲(chǔ)存。從機(jī)上卸載試劑后，需立即將其豎直儲(chǔ)存于2~8℃(蓋有軟蓋和替換蓋)。從系統(tǒng)上取出試劑后，建議將其放回原始托架和包裝盒中以保證直立儲(chǔ)存。如果微粒子試劑盒在離機(jī)儲(chǔ)存時(shí)沒有直立放置(蓋有軟蓋)，必須丟棄該試劑盒。4．5·其他材料：ARCHITECTi系統(tǒng)、ARCHITECTProGRP項(xiàng)目文件、ProGRP校準(zhǔn)替換蓋和移液管。5.操作步驟ProGRP翻轉(zhuǎn)試劑瓶，使運(yùn)輸過程中沉淀的微子重新懸浮。第一次將微粒子試劑瓶裝機(jī)后，無須再對(duì)其進(jìn)行混勻。翻轉(zhuǎn)微粒子試劑瓶30次。觀察試劑瓶，檢查微粒子是否重新懸浮。如果微粒子仍附著在瓶子上，則繼續(xù)翻轉(zhuǎn)瓶子直到微粒子完全懸浮為止。如果微粒子沒有重新懸浮，則不能使用。請(qǐng)與當(dāng)?shù)卦搩x器代理商聯(lián)系。微粒子重新懸浮后，給試劑瓶加蓋軟蓋。5．2·把ProGRP測(cè)定試劑盒裝載到ARCHITECTi系統(tǒng)上，確保該檢測(cè)所需試劑齊全，所有試劑瓶都有軟蓋，必要時(shí)進(jìn)行校準(zhǔn)。統(tǒng)操作規(guī)程。5．4·系統(tǒng)會(huì)計(jì)算出樣品杯的最小樣本量，并打印在申請(qǐng)報(bào)告中。每個(gè)樣品杯可重復(fù)取樣的次數(shù)不得超過10次。為了最大程度降低蒸發(fā)的影響，運(yùn)行檢測(cè)前，要加上足夠的樣本量。6.校準(zhǔn)準(zhǔn)情況時(shí)，必須對(duì)所有水平的ProGRP質(zhì)控品進(jìn)行一次檢測(cè)。確保質(zhì)控值在質(zhì)控說明書所規(guī)定的范圍內(nèi)。校準(zhǔn)品優(yōu)先進(jìn)樣。用新批號(hào)的試劑盒或質(zhì)控品數(shù)值超過范圍。若質(zhì)控在控，則定標(biāo)曲線可延長(zhǎng)至試劑及質(zhì)控品批號(hào)改變。7.質(zhì)控ProGRP項(xiàng)目的建議質(zhì)控要求為，每24h(使用中)、每一個(gè)新批號(hào)試劑盒使用時(shí)或每一次定標(biāo)以后將所有水平的質(zhì)控品各檢測(cè)一次。ProGRP的質(zhì)控值必須在規(guī)定的范圍內(nèi)。如果質(zhì)控值超出了規(guī)定范圍，那么相關(guān)檢測(cè)結(jié)果無效，必須重新檢測(cè)樣本。必要時(shí)需要重新校準(zhǔn)。8.結(jié)果判斷8．1·結(jié)果計(jì)算：ProGRP測(cè)定是通過4參數(shù)logistic曲線擬合(4PLC，Y加權(quán))數(shù)據(jù)約簡(jiǎn)法生成一條校準(zhǔn)曲線來計(jì)算濃度?？赏ㄟ^自動(dòng)稀釋模式或手工稀釋程序進(jìn)行稀釋。如果選擇了自動(dòng)稀釋程序，系統(tǒng)會(huì)按照1∶10的比例稀釋樣本，自動(dòng)計(jì)算出稀釋前樣本的濃度并且報(bào)告結(jié)果。如果選擇手工稀釋程序，建議稀釋比例不要超過1∶10。執(zhí)行1∶10倍稀釋時(shí)，添加50μl患者樣本至450μlARCHITECTi多項(xiàng)目手工稀釋液中。操作人員必須在患者樣本或質(zhì)控品申請(qǐng)屏幕中輸入稀釋系數(shù)。系統(tǒng)會(huì)根據(jù)該稀釋因子自動(dòng)計(jì)算出稀釋前的樣本濃度并報(bào)告結(jié)果。在應(yīng)用稀釋系8．4·檢測(cè)結(jié)果的不確定度：具體參見AFP標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)程的相關(guān)內(nèi)容。9.生物參考區(qū)間本實(shí)驗(yàn)室血清ProGRP生物參考區(qū)間為≤63pg／ml。10.性能參數(shù)ProGRP范圍為25~5000pg／ml的樣本時(shí)，其精密度為總CV≤10％。在低值質(zhì)控品(均值為36．6pg／ml)批內(nèi)和總CV均為4％，在中值質(zhì)控品(均值為CV為4％。