生化基礎(chǔ)物質(zhì)檢測(cè)-脂類(lèi)檢測(cè)

磷酸甘油氧化酶法測(cè)甘油三酯目錄實(shí)驗(yàn)?zāi)康?重點(diǎn)、難點(diǎn)2實(shí)驗(yàn)原理3試劑和器材4實(shí)驗(yàn)步驟5誤差分析及臨床意義6實(shí)驗(yàn)?zāi)康?、掌握測(cè)總甘油三酯的原理、方法和臨床意義。2、學(xué)會(huì)誤差分析測(cè)甘油三酯的原理、方法及基本儀器的規(guī)范操作誤差分析重點(diǎn)難點(diǎn)重點(diǎn)和難點(diǎn)實(shí)驗(yàn)原理主要試劑TG試劑盒蒸餾水主要器材采血器材微量加樣器吸量管恒溫水浴箱分光光度計(jì)試劑和器材制備合格樣本第一步反應(yīng)液制備第二步混勻水浴測(cè)定第三步計(jì)算第四步實(shí)驗(yàn)步驟第一步用真空負(fù)壓管采血，離心，待用第二步

取試管3支試管編號(hào)，按下表依次加樣。加入物(μl)空白管標(biāo)準(zhǔn)管待測(cè)管蒸餾水20－－標(biāo)準(zhǔn)液－20－血清－－20工作液200020002000第三步混勻，37℃恒溫5分鐘，將三只試管中液體分別倒入三只比色皿，依次放入比色池，分光光度計(jì)調(diào)波長(zhǎng)為546nm，以空白管調(diào)零，分別記錄As、Ax。第四步計(jì)算（

C標(biāo)=2.26mmol/L）參考范圍:≤1.70mmol/L

C測(cè)＝

×C標(biāo)

AsAx誤差分析實(shí)驗(yàn)室測(cè)得結(jié)果不正常：檢驗(yàn)者操作不規(guī)范造成臨床意義臨床檢測(cè)結(jié)果不正常：患者生理或病理原因造成誤差分析和臨床意義1.微量移液器使用不規(guī)范2.吸量管使用不規(guī)范誤差分析升高：原發(fā)性高TG血癥多有遺傳因素，包括家族性高TG血癥與家族性型高脂（蛋白）血癥等。繼發(fā)性高TG血癥見(jiàn)于糖尿病、糖原累積病、甲狀腺機(jī)能減退、腎病綜合征、妊娠、口服避孕藥、酗酒等。大量前瞻性的研究證實(shí)，富含TG的脂蛋白是CHD的獨(dú)立的危險(xiǎn)因子，TG增加表明患者存在代謝綜合癥，需進(jìn)行治療。降低：甘油三酯降低比較少見(jiàn)，甲狀腺功能亢進(jìn)、腎上腺皮質(zhì)功能減退和肝功能?chē)?yán)重?fù)p傷時(shí)可以見(jiàn)到甘油三酯降低臨床意義載脂蛋白（a）測(cè)定目錄實(shí)驗(yàn)?zāi)康?重點(diǎn)、難點(diǎn)2實(shí)驗(yàn)原理3試劑和器材4實(shí)驗(yàn)步驟5誤差分析及臨床意義6實(shí)驗(yàn)?zāi)康?、掌握載脂蛋白測(cè)定的原理、方法和臨床意義。2、學(xué)會(huì)誤差分析酶聯(lián)免疫吸附測(cè)載脂蛋白的原理、方法及基本儀器的規(guī)范操作誤差分析重點(diǎn)難點(diǎn)重點(diǎn)和難點(diǎn)實(shí)驗(yàn)原理本試劑盒應(yīng)用雙抗體夾心法測(cè)定標(biāo)本中人載脂蛋白A1(Apo-A1)水平。用純化的A1(Apo-A1)抗體包被微孔板，制成固相抗體，往包被單抗的微孔中依次加入Apo-A1，再與HRP標(biāo)記的載脂蛋白A1(Apo-A1)抗體結(jié)合，形成抗體-抗原-酶標(biāo)抗體復(fù)合物，經(jīng)過(guò)徹底洗滌后加底物TMB顯色。TMB在HRP酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍(lán)色，并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成最終的黃色。主要試劑apoa試劑盒校準(zhǔn)液蒸餾水主要器材采血器材微量加樣器吸量管恒溫水浴箱酶標(biāo)儀試劑和器材制備合格樣本第一步實(shí)驗(yàn)過(guò)程第二步標(biāo)準(zhǔn)曲線第三步計(jì)算第四步實(shí)驗(yàn)步驟第一步用真空負(fù)壓管采血，離心，待用第二步待測(cè)樣品孔中每孔加入待測(cè)樣品100μl，每種樣品設(shè)3個(gè)平行孔；設(shè)兩個(gè)陰性對(duì)照孔，每孔加未處理組的細(xì)胞裂解液100μl；另設(shè)一個(gè)空白對(duì)照孔，加入純細(xì)胞裂解液100μl。第二步酶標(biāo)板置4℃，包被過(guò)夜。第二步洗板：吸干孔內(nèi)反應(yīng)液，用洗滌液過(guò)洗一遍（將洗滌液注滿板孔后，即甩去），之后將洗滌液注滿板孔，浸泡1-2分鐘，間歇搖動(dòng)。甩去孔內(nèi)液體后在吸水紙上拍干。重復(fù)洗滌3-4次。第二步陰性對(duì)照孔每孔加入PBS50μl，樣品孔及空白孔每孔加入1:500稀釋的兔抗人AIF抗體工作液50μl。第二步酶標(biāo)板置37℃培養(yǎng)箱的濕盒內(nèi)，孵育60min。第二步洗板，陰性對(duì)照孔每孔加入PBS50μl，樣品孔及空白孔每孔加入1:500稀釋的兔抗人AIF抗體工作液50μl。第二步每孔加1:5000稀釋的HRP-標(biāo)記的山羊抗兔抗體工作液100μl。酶標(biāo)板置37℃培養(yǎng)箱的濕盒內(nèi)，孵育60min。第二步洗板，陰性對(duì)照孔每孔加入PBS50μl，樣品孔及空白孔每孔加入1:500稀釋的兔抗人AIF抗體工作液50μl。第二步每孔加TMB顯色液100μl，輕輕混勻10s，置37℃暗處反應(yīng)15-20min。每孔加100μl2mol/LH2SO4終止反應(yīng)。第二步分別測(cè)450nm吸光值W1和630nm吸光值W2，最終測(cè)得的OD值為兩者之差（W1-W2），以減少由容器上的劃痕或指印等造成的光干擾。第三步以標(biāo)準(zhǔn)物的濃度為橫坐標(biāo)（對(duì)數(shù)坐標(biāo)），OD值為縱坐標(biāo)（普通坐標(biāo)），在半對(duì)數(shù)坐標(biāo)紙上繪出標(biāo)準(zhǔn)曲線，第四步計(jì)算把樣品的OD值代入標(biāo)準(zhǔn)曲線算出樣品濃度。參考范圍:ApoAI：1.00～1.50g/L。誤差分析實(shí)驗(yàn)室測(cè)得結(jié)果不正常：檢驗(yàn)者操作不規(guī)范造成臨床意義臨床檢測(cè)結(jié)果不正常：患者生理或病理原因造成誤差分析和臨床意義ApoAI是HDL的主要結(jié)構(gòu)蛋白，ApoB是LDL的主要結(jié)構(gòu)蛋白，因此，ApoAI和ApoB可直接反映HDL和LDL的含量。在某些病理情況下，ApoAI與HDL和ApoB與LDL并非成正相關(guān)，因此，同時(shí)測(cè)定載脂蛋白及脂蛋白HDL和LDL對(duì)病理發(fā)生狀態(tài)的分析很有幫助。冠心病、腎病綜合征和糖尿病等都有ApoAI下降和ApoB升高。臨床上常將ApoAI和ApoB比值作為冠心病的危險(xiǎn)指標(biāo)。臨床意義1.微量移液器使用不規(guī)范2.吸量管使用不規(guī)范誤差分析低密度脂蛋白膽固醇測(cè)定目錄實(shí)驗(yàn)?zāi)康?重點(diǎn)、難點(diǎn)2實(shí)驗(yàn)原理3試劑和器材4實(shí)驗(yàn)步驟5誤差分析及臨床意義6實(shí)驗(yàn)?zāi)康?、掌握酶聯(lián)免疫吸附測(cè)定低密度脂蛋白膽固醇的原理、方法和臨床意義。2、學(xué)會(huì)誤差分析酶聯(lián)免疫吸附測(cè)定低密度脂蛋白膽固醇的原理、方法及基本儀器的規(guī)范操作誤差分析重點(diǎn)難點(diǎn)重點(diǎn)和難點(diǎn)實(shí)驗(yàn)原理血清中的低密度脂蛋白膽固醇與抗體結(jié)合，再與過(guò)氧化物酶結(jié)合，形成LDL-C-單克隆抗體-酶復(fù)合物，然后與底物孵育顯色。主要試劑LDL-C試劑盒葡校準(zhǔn)液蒸餾水主要器材采血器材微量加樣器吸量管恒溫水浴箱酶標(biāo)儀試劑和器材制備合格樣本第一步反應(yīng)液制備第二步標(biāo)準(zhǔn)曲線第三步計(jì)算第四步實(shí)驗(yàn)步驟第一步用真空負(fù)壓管采血，離心，待用第二步從室溫平衡60min后的鋁箔袋中取出所需板條，剩余板條用自封袋密封放回4℃。第二步設(shè)置標(biāo)準(zhǔn)品孔和樣本孔，標(biāo)準(zhǔn)品孔各加不同濃度的標(biāo)準(zhǔn)品50μL；待測(cè)樣本孔先加待測(cè)樣本10μL，再加樣本稀釋液40μL第二步后標(biāo)準(zhǔn)品孔和樣本孔中每孔加入辣根過(guò)氧化物酶（HRP）標(biāo)記的檢測(cè)抗體100μL，用封板膜封住反應(yīng)孔，37℃水浴鍋或恒溫箱溫育60min。第二步棄去液體，吸水紙上拍干，每孔加滿洗滌液，靜置1min，甩去洗滌液，吸水紙上拍干，如此重復(fù)洗板5次第二步每孔加入底物A、B各50μL，37℃避光孵育15min。第三步每孔加入終止液50μL，15min內(nèi)，在450nm波長(zhǎng)處測(cè)定各孔的OD值。根據(jù)OD值制作標(biāo)準(zhǔn)曲線。第四步計(jì)算把樣品的OD值代入標(biāo)準(zhǔn)曲線算出樣品濃度。參考范圍:≤3.12mmol/L(120mg/dl)誤差分析實(shí)驗(yàn)室測(cè)得結(jié)果不正常：檢驗(yàn)者操作不規(guī)范造成臨床意義臨床檢測(cè)結(jié)果不正常：患者生理或病理原因造成誤差分析和臨床意義LDL-C增高是動(dòng)脈粥樣硬化發(fā)生發(fā)展的主要脂類(lèi)危險(xiǎn)因素。由于TC水平同時(shí)也受HDL-C水平的影響，所以最好以LDL-C代替TC作為冠心病危險(xiǎn)因素指標(biāo)。美國(guó)國(guó)家膽固醇教育計(jì)劃成人治療專(zhuān)業(yè)組規(guī)定以LDL-C水平作高脂蛋白血癥的治療決策及其需要達(dá)到的治療目標(biāo)。臨床意義1.微量移液器使用不規(guī)范2.吸量管使用不規(guī)范誤差分析PTA-Mg2+法測(cè)HDL-C目錄實(shí)驗(yàn)?zāi)康?重點(diǎn)、難點(diǎn)2實(shí)驗(yàn)原理3試劑和器材4實(shí)驗(yàn)步驟5誤差分析及臨床意義6實(shí)驗(yàn)?zāi)康?、掌握PTA-Mg2+法測(cè)HDL-C的原理、方法和臨床意義。2、學(xué)會(huì)誤差分析PTA-Mg2+法測(cè)HDL-C的原理、方法及基本儀器的規(guī)范操作誤差分析重點(diǎn)難點(diǎn)重點(diǎn)和難點(diǎn)實(shí)驗(yàn)原理主要試劑HDL-C試劑盒蒸餾水主要器材采血器材微量加樣器吸量管恒溫水浴箱分光光度計(jì)試劑和器材制備合格樣本第一步反應(yīng)液制備第二步混勻水浴測(cè)定第三步計(jì)算第四步實(shí)驗(yàn)步驟第一步用真空負(fù)壓管采血，離心，待用第二步取三只試管，分別標(biāo)號(hào)為空白管B、標(biāo)準(zhǔn)管S和測(cè)定管T，2、按照下表向試管中加入試劑并處理試管內(nèi)的液體

空白管B標(biāo)準(zhǔn)管S測(cè)定管T蒸餾水/μl200——血清/μl——200標(biāo)準(zhǔn)液/μl—200—沉淀劑/μl200200200混勻，置于室溫保溫10min，再以3000r/min離心15min，吸取上清液上清液/μl150150150工作液/μl150015001500第三步試劑添加完畢后，混勻，置于37℃保溫10min。將三只試管中液體分別倒入三只比色皿，依次放入比色池，分光光度計(jì)調(diào)波長(zhǎng)為546nm，以空白管調(diào)零，分別記錄As、Ax。第四步計(jì)算（

C標(biāo)=1.29mmol/L）參考范圍:＞1.04mmol/L減低：＜0.91mmol/L升高：＞1.55mmol/L

C測(cè)＝

×C標(biāo)

AsAx誤差分析實(shí)驗(yàn)室測(cè)得結(jié)果不正常：檢驗(yàn)者操作不規(guī)范造成臨床意義臨床檢測(cè)結(jié)果不正常：患者生理或病理原因造成誤差分析和臨床意義HDL-C與冠心病發(fā)病呈負(fù)相關(guān)升高：HDL-C＞1.55mmol/L被認(rèn)為是冠心病的“負(fù)”危險(xiǎn)因素。降低：HDL-C下降多見(jiàn)于腦血管病、糖尿病、肝炎、肝硬化患者。高TG血癥往往伴隨著低HDL-C，肥胖者也偏低。吸煙可下使其降。適量飲酒，長(zhǎng)期體力勞動(dòng)和運(yùn)動(dòng)會(huì)使其升高。

HDL-C＜0.9mmol/L是冠心病的危險(xiǎn)因素。臨床意義1.微量移液器使用不規(guī)范2.吸量管使用不規(guī)范誤差分析膽固醇氧化酶法測(cè)總膽固醇目錄實(shí)驗(yàn)?zāi)康?重點(diǎn)、難點(diǎn)2實(shí)驗(yàn)原理3試劑和器材4實(shí)驗(yàn)步驟5誤差分析及臨床意義6實(shí)驗(yàn)?zāi)康?、掌握測(cè)總膽固醇的原理、方法和臨床意義。2、學(xué)會(huì)誤差分析測(cè)總膽固醇的原理、方法及基本儀器的規(guī)范操作誤差分析重點(diǎn)難點(diǎn)重點(diǎn)和難點(diǎn)實(shí)驗(yàn)原理膽固醇酯在膽固醇酯酶催化下生成膽固醇，總膽固醇在COD催化下產(chǎn)生過(guò)氧化氫，最后在過(guò)氧化物酶催化下生成紅色的醌類(lèi)化合物.顏色深淺與總膽固醇濃度成正比。主要試劑CHO試劑校準(zhǔn)液蒸餾水主要器材采血器材微量加樣器吸量管恒溫水浴箱分光光度計(jì)試劑和器材制備合格樣本第一步反應(yīng)液制備第二步混勻水浴測(cè)定第三步計(jì)算第四步實(shí)驗(yàn)步驟第一步用真空負(fù)壓管采血，離心，待用第二步

取試管3支試管編號(hào)，按下表依次加樣。加入物(μl)空白管標(biāo)準(zhǔn)管待測(cè)管蒸餾水20－－標(biāo)準(zhǔn)液－20－血清－－20工作液200020002000第三步混勻，37℃恒溫6分鐘，將三只試管中液體分別倒入三只比色皿，依次放入比色池，分光光度計(jì)調(diào)波長(zhǎng)為500nm，以空白管調(diào)零，分別記錄As、Ax。第四步計(jì)算（

C標(biāo)=4.85mmol/L）參考范圍:≤5.2