動物源性食品中喹諾酮類物質(zhì)的快速檢測,膠體金免疫層析法(KJ2023年06)

第第1頁共10頁編號：編號：時間：2023xx日學(xué)無止境頁碼：第1頁共10頁動物源性食品中喹諾酮類物質(zhì)的快速檢測,膠體金免疫層析法〔KJ202306〕通過整理的動物源性食品中喹諾酮類物質(zhì)的快速檢測,膠體金免疫層析法〔KJ202306〕相關(guān)文檔，渴望對大家有所扶植，感謝觀看！附件6 動物源性食品中喹諾酮類物質(zhì)的快速檢測 膠體金免疫層析法 (KJ202306) 1范圍 本方法規(guī)定了動物源性食品中喹諾酮類物質(zhì)的膠體金免疫層析快速檢測方法。本方法適用于生乳、巴氏殺菌乳、滅菌乳、豬肉、豬肝、豬腎中洛美沙星、培氟沙星、氧氟沙星、諾氟沙星、達(dá)氟沙星、二氟沙星、恩諾沙星、環(huán)丙沙星、氟甲喹、噁喹酸殘留的快速測定。原理本方法承受競爭抑制免疫層析原理。樣品中的喹諾酮類物質(zhì)與膠體金標(biāo)記的特異性抗體結(jié)合，抑制了抗體和檢測線〔T線〕線〔C〕顏色深淺比較，對樣品中喹諾酮類物質(zhì)進(jìn)展定性判定。試劑和材料除另有規(guī)定外，本方法所用試劑均為分析純，水GB/T6682編號：時間：2023編號：時間：2023xx日學(xué)無止境頁碼：第2頁共10頁第第2頁共10頁試劑 3.1.1乙腈。甲酸。分散固相萃取劑I18g4.5g于研缽中研碎。分散固相萃取劑II：分別稱取硫酸鎂27g、N-丙基乙二胺〔PSA〕4.5g放于研缽中研碎。甲酸-乙腈溶液：98mL2mL甲醇。稀釋液：脫脂奶粉︰水1。參考物質(zhì) 喹諾酮類參考物質(zhì)的中文名稱、英文名稱、CAS、分子式、相對分子量見表1，純度≥99%。表1喹諾酮類參考物質(zhì)的中文名稱、英文名稱CAS登錄號、分子式相對分子量 序號 中文名稱 英文名稱 CAS登錄號 分子編號：時間：2023編號：時間：2023xx日學(xué)無止境頁碼：第3頁共10頁第第3頁共10頁式相對分子量1洛美沙星Lomefloxacin98079-51-7C17H19F2N3O3351.352培氟沙星Pefloxacin70458-92-3C17H20FN3O3333.363氧氟沙星Ofloxacin82419-36-1C18H20FN3O4361.374諾氟沙星Norfloxacin70458-96-7C16H18FN3O3319.335達(dá)氟沙星Danofloxacin112398-08-0C19H20FN3O3357.386二氟沙星Difloxacin5522-39-4 C28H33N3F2 449.58 7 恩諾沙星 Enrofloxacin93106-60-6 C19H22FN3O3 359.16 8 環(huán)丙沙星 Ciprofloxacin85721-33-1 C17H18FN3O3 331.13 9 氟甲喹 Flumequine42835-25-6 C14H12FNO3 261.25 10 噁喹酸 OxolinicAcid14698-29-4 C13H11NO5 261.23 注：或等同可溯源物質(zhì)。標(biāo)準(zhǔn)溶液的配制3.3.1喹諾酮類物質(zhì)標(biāo)準(zhǔn)儲藏液〔1：分別周密稱取喹諾酮類參考物質(zhì)〕適量，置于0燒杯中，參加適量甲醇〔3.1.6〕超聲溶解后，用甲醇轉(zhuǎn)入10mL容量1mg/mL液。-20℃6喹諾酮類物質(zhì)標(biāo)準(zhǔn)中間液〔1準(zhǔn)儲藏液1〔〕100L于0L容量瓶中，用甲醇〔3.1.6〕1μg/mL的喹諾酮類標(biāo)準(zhǔn)編號：時間：2023編號：時間：2023xx日學(xué)無止境頁碼：第4頁共10頁第第4頁共10頁中間液。材料 3.4.1金標(biāo)微孔〔含膠體金標(biāo)記的特異性抗體。試劑條或檢測卡。儀器和設(shè)備 4.1移液器：100μL、200μL和1mL。渦旋混合器。離心機：轉(zhuǎn)速≥4000r/min。電子天平：感量為0.01g。孵育器：可調(diào)整時間、溫度，控溫精度±1℃。讀數(shù)儀。氮吹儀。環(huán)境條件：溫度15℃～35℃，濕度≤80%〔承受孵育器與讀編號：時間：2023編號：時間：2023xx日學(xué)無止境頁碼：第5頁共10頁第第5頁共10頁數(shù)儀時可不要求環(huán)境溫度。分析步驟 5.1試樣制備 液體乳干脆用于測定，豬肉、豬肝、豬腎用組織搗碎機等攪碎后備用。試樣的提取5.2.1生乳、巴氏殺菌乳、滅菌乳分別吸取同等體積的液體乳樣品與稀釋液混合后為待測液。5.2.2豬肉豬肝豬腎 準(zhǔn)確稱取2.5±0.01g均質(zhì)后的組織樣品于5L離心管中，參加5L甲酸-乙腈溶液，渦旋混合1min，振蕩5min，4000r/min離心5min。將上清液2mL轉(zhuǎn)入10mL離心管中，分別參加0.6g分散固相萃取劑I(3.1.3)漩渦混合1min、再參加0.6g分散固相萃取劑II(3.1.4)后漩渦混合1min，靜置分層后取1mL于10mL離心管中于氮吹儀60℃吹干后用1mL樣品稀釋液溶解作為待測液。測定步驟5.3.1檢測卡測定步驟5.3.1.1將檢測卡平放入綿。用移液器取待測液〔5.2〕300μL，避開產(chǎn)生泡沫和氣泡。編號：時間：2023編號：時間：2023xx日學(xué)無止境頁碼：第6頁共10頁第第6頁共10頁豎直緩慢的滴加至檢測卡兩側(cè)隨便一側(cè)的凹槽中，將粘箔重粘好。蓋上孵育器的蓋子，孵育器上的計時器自動起先計時，紅3min。取出檢測卡，不要擠壓樣品槽，放于讀數(shù)儀中，讀數(shù)前保脆目視法進(jìn)展結(jié)果判定。5.3.2試劑條與金標(biāo)微孔測定步驟 吸取300μL待測〔5.2〕于金標(biāo)微〔3.4.1〕中抽吸5～10次使混合勻整將試劑〔3.4.2〕吸水海綿端垂直向下插入金標(biāo)微孔中，孵育5～8min，從微孔中取出試劑條，進(jìn)展結(jié)果判定。注：試劑條〔或檢測卡〕具體檢測步驟可參考相應(yīng)的說明書操作。質(zhì)控試驗 每批樣品應(yīng)同時進(jìn)展空白試驗和加標(biāo)質(zhì)控試驗。空白試驗 取空白試樣，依據(jù)5.2和5.3步驟與樣品同法操作。編號：時間：2023編號：時間：2023xx日學(xué)無止境頁碼：第7頁共10頁第第7頁共10頁加標(biāo)質(zhì)控試驗 準(zhǔn)確稱取空白試樣〔準(zhǔn)確至0.01g〕置于具6μg/kg，5.25.3結(jié)果判定6.1讀數(shù)儀測定法 按讀數(shù)儀說明書要求操作干脆讀取并進(jìn)展結(jié)果判定，6.2目視法 通過比照限制線〔C見圖1。無效限制線〔C線〕不顯色，說明不正確操作或試劑條/檢測卡無效。陰性檢測線〔T〕顏色比限制線〔C〕顏色深或者檢測線〔T線〕顏色與限制線〔C線〕顏色相當(dāng)，說明樣品中喹諾酮類低于方法檢測限，判定為陰性。陽性檢測線〔T線〕不顯色或檢測線〔T線〕顏色比限制定為陽性。編號：時間：2023編號：時間：2023xx日學(xué)無止境頁碼：第8頁共10頁第第8頁共10頁6.3質(zhì)控試驗要求 空白試驗測定結(jié)果應(yīng)為陰性，加標(biāo)質(zhì)控試驗測定結(jié)果應(yīng)為陽性。圖1目視判定示意圖 7結(jié)論 當(dāng)檢測結(jié)果為陽性時應(yīng)對結(jié)果進(jìn)展確證。性能指標(biāo) 8.1檢測限 生乳、巴氏殺菌乳、滅菌乳、豬肉、豬肝豬腎中洛美沙星培氟沙星氧氟沙星諾氟沙星達(dá)氟沙星、二氟沙星、恩諾沙星、環(huán)丙沙星、氟甲喹、噁喹酸為3μg/kg。靈敏度 靈敏度應(yīng)≥99%。特異性 特異性應(yīng)≥95%。假陰性率 假陰性率應(yīng)≤1%。假陽性率 假陽性率應(yīng)≤5%。注：性能指標(biāo)計算方法見附錄A。其他 本方法所述試劑、試劑盒信息及操作步驟是為給方法運編號：時間：2023編號：時間：2023xx日學(xué)無止境頁碼：第9頁共10頁第第9頁共10頁項性能指標(biāo)。本方法參比標(biāo)準(zhǔn)為GB/T21312-2023《動物源性食品中14種喹諾酮藥物殘留檢測方法液相色譜-質(zhì)譜/A定性方法性能指標(biāo)計算方法表A.1性能指標(biāo)計算表樣品狀況a檢測結(jié)果b總數(shù)陽性陰性陽性N11N12N1.=N11+N12陰性N21N22N2.=N21+N22總數(shù)N.1=N11+N12N.2=N21+N22N=N1.+N2.或N.1+N.2顯著性差異〔х2〕c2=， 自由〔1 靈敏. 特異性-%〕 . 假陰性率靈敏度 假陽性〕特異性 相對準(zhǔn)確度，%c 〔N11+N22〕/〔N1.+N2.〕 注： a由參比方法檢驗得到的結(jié)果或者樣品中實際的公議值結(jié)果； b由待確認(rèn)方法檢驗得到的結(jié)果。靈敏度的計算運用確認(rèn)后的結(jié)果。N：任何特定單元的結(jié)果數(shù)，第一個下標(biāo)指行，其次個下標(biāo)指列。例如：N11表示第一行，第一列，N1.表示全部的第一行，N.2表示全部的其次列；N12編號：時間