食品中大腸菌群的測定含MPN檢索表

食品中大腸菌群的測定含MPN檢索表頒布的食品衛(wèi)生檢驗(yàn)方法微生物學(xué)部分,大腸菌群系指一群在℃、能發(fā)酵乳糖,產(chǎn)酸、產(chǎn)氣,需氧和兼性厭氧的革蘭氏陰性無芽胞桿菌。

大腸菌群主要是由腸桿菌科中四個(gè)菌屬內(nèi)的一些細(xì)菌所組成,即艾希氏菌屆、拘櫞酸桿菌屬、克雷伯氏菌屬及腸桿菌屬,其生化特性分類見表-。

表-大腸菌群生化特性分類表靛基***-拘櫞明膠動(dòng)力.℃質(zhì)紅酸乳糖大腸艾希氏菌Ⅰ++————+-+大腸艾希氏菌Ⅱ+————+-—大腸艾希氏菌Ⅲ++————+-—費(fèi)勞地拘櫞酸桿菌Ⅰ—+—++-—+-—費(fèi)勞地拘櫞酸桿菌Ⅱ++—++-—+-—產(chǎn)氣克雷伯氏菌Ⅰ——+—————產(chǎn)氣克雷伯氏菌Ⅱ+—++————陰溝腸桿菌+—++——+-—注:+,表示陽性;—,表示陰性;+-,表示多數(shù)陽性,少數(shù)陰性。

由上表可以看出,大腸菌群中大腸艾希氏菌型和Ⅲ型的特點(diǎn)是,對靛基質(zhì)、***紅、-和拘櫞酸鹽利用四個(gè)生化反應(yīng)分別為“十十一一”,通常稱為典型大腸桿菌;而其他類大腸桿菌則披稱為非典型大腸桿菌。

二大腸菌群的測定意義、糞便污染的指標(biāo)細(xì)菌早在年,沙爾丁格氏首先提出大腸桿菌作為水源中病原菌污染的指標(biāo)菌的意見,由于大腸桿菌是存在于人和動(dòng)物的腸道內(nèi)的常見細(xì)菌。

一年后,塞烏博耳德“斯密斯氏指出,大腸桿菌因普遍存在于腸道內(nèi),若在腸道以外的環(huán)境中發(fā)覺,就可以認(rèn)為這是由于人或動(dòng)物的糞便污染造成的;從今,就開頭應(yīng)用大腸桿菌作為水源中糞便污染的指標(biāo)菌。

據(jù)討論發(fā)覺,***糞便中的大腸菌群的含量為:個(gè)一個(gè)。

若水中或食品中發(fā)覺有大腸菌群,即可證明已被糞便污染,有糞便污染也就有可能有腸道病原菌存在。

依據(jù)這個(gè)理由,就可以認(rèn)為這種含有大腸菌群的水或食品供食用是擔(dān)心全的。

所以目前為評定食品的衛(wèi)生質(zhì)量而進(jìn)行檢驗(yàn)時(shí),也都采納大腸菌群或大腸桿菌作為糞便污染的指標(biāo)細(xì)菌。

當(dāng)然,有糞便污染,不肯定就有腸道病原菌存在,但即使無病原菌,只要被糞便污染的水或食品,也是不衛(wèi)生的,不受人喜愛的。

.糞便污染指標(biāo)菌的選擇作為抱負(fù)的糞便污染的指標(biāo)菌應(yīng)具備以下幾個(gè)特性,才能起到比較正確的指標(biāo)作用。

①存在于腸道內(nèi)持有的細(xì)菌,才能顯示出指標(biāo)的特異性。

⑧在腸道內(nèi)占有極高的數(shù)量,即使被高度稀釋后,也能被檢出。

⑧在腸道以外的環(huán)境中,其反抗力大于腸道致病菌或相像,進(jìn)入水中不再繁殖。

④檢驗(yàn)方法簡便,易于檢出和計(jì)數(shù)。

在食品衛(wèi)生微生物檢驗(yàn)中,可作為糞便污染指標(biāo)菌依據(jù)的上述條件,糞便中數(shù)量最多的是大腸菌群,而且大腸菌群隨糞便排出體外后,其存活時(shí)間與腸道主要致病菌大致相像,在檢驗(yàn)方法上,也以大腸菌群的檢驗(yàn)計(jì)數(shù)簡便易行。

因此,我國選用大腸菌群作為糞便污染指標(biāo)菌是比較相宜的。

另外,作為糞便污染的指標(biāo)細(xì)菌還有:分叉桿菌、擬桿菌、乳酸菌、腸桿菌科中的梭狀芽胞和底群鏈球菌等,據(jù)報(bào)道,擬桿菌是人體腸道內(nèi)其次個(gè)較大的菌群;厭氣性乳酸菌占人體腸道內(nèi)細(xì)菌組分的%以上,一般糞便中該菌量為個(gè)—個(gè)。

腸道內(nèi)屬于腸桿菌科的細(xì)菌,除上述的細(xì)菌外,還有克雷伯氏菌屬、變形桿菌和副大腸桿菌等,也可以充當(dāng)糞便污染指標(biāo)菌。

許多討論者認(rèn)為,在冷蹤食品或冷凍狀態(tài)照耀處理過的食品中,大腸桿菌可比其他多種病原菌簡單死亡,因此,像這類食品,用大腸菌群作為指標(biāo)菌就不夠抱負(fù),而底群鏈球菌對低溫反抗力強(qiáng),作為這類食品的糞便污染指標(biāo)菌就比較相宜。

上述的這些腸道內(nèi)的其他細(xì)菌,雖與糞便有關(guān),因均比不上大腸菌群所具備的指標(biāo)特異性,所以目前還沒有列入作為公認(rèn)的糞便污染的指標(biāo)細(xì)菌。

當(dāng)然,大腸菌群作為糞便污染指標(biāo)菌也有一些不足之處:①飲用水中含有較少量大腸菌群的狀況下,有時(shí)仍能引起腸道傳染病的流行。

⑧大腸菌群在肯定條件下能在水中生長繁殖。

②在外界環(huán)境中,有的沙門氏菌比大腸菌群更有耐受力。

.大腸菌群作為糞便污染指標(biāo)菌的意義糞便污染的食品,往往是腸道傳染病發(fā)生的主要緣由,因此檢查食品中有無腸道菌,這對掌握腸道傳染病的發(fā)生和流行,具有非常重要的意義。

很多討論者的調(diào)查證明,人、畜糞便對外界環(huán)境的污染是大腸菌群在自然界存在的主要緣由。

在腹瀉患者所排糞便中,非典型大腸桿菌常有增多趨勢,這可能與機(jī)體腸道發(fā)生紊亂,大腸菌群在型別組成的比例上因而發(fā)生轉(zhuǎn)變所致;隨糞便排至外環(huán)境中的典型大腸桿菌,也可因條件的轉(zhuǎn)變。

使生化性狀發(fā)生變異,因而轉(zhuǎn)變?yōu)榉堑湫痛竽c桿菌。

由此看來,大腸菌群無論;莊糞便內(nèi)還是在外環(huán)境中,都是作為一個(gè)整體而存在的,它的菌型組成往往是多種的,只是在比例上,因條件不同而有差異。

因此,大腸菌群的檢出,不僅反映校樣被糞便污染總的狀況,而且在肯定程度上也反映了食品在生產(chǎn)加工、運(yùn)輸、保存等過程中的衛(wèi)生狀況,所以具有廣泛的衛(wèi)生學(xué)意義。

由于大腸菌群作為糞便污染指標(biāo)菌而被列入食品衛(wèi)生微生物學(xué)常規(guī)檢驗(yàn)項(xiàng)目,假如食品中大腸菌群超過規(guī)定的限量,則表示該食品有被糞便污染的可能,而糞便假如是來自腸道致病菌者或者腹瀉患者,該食品即有可能污染腸道致病菌。

所以,凡是大腸菌群數(shù)超過規(guī)定限量的食品,即可確定其衛(wèi)生學(xué)上是不合格的,該食品食用是擔(dān)心全的。

二、試驗(yàn)?zāi)康?、了解大腸菌群在食品衛(wèi)生檢驗(yàn)中的意義。

、并把握大腸菌群的檢驗(yàn)方法。

三、原理大腸菌群系指一群能發(fā)酵乳糖,產(chǎn)酸產(chǎn)氣,需氧和兼性厭氧的革蘭氏陰性無芽孢桿菌。

該菌主要來源于人畜糞便,故以此作為糞便污染指標(biāo)來評價(jià)食品的衛(wèi)生質(zhì)量,具有廣泛的衛(wèi)生學(xué)意義。

它反映了食品是否被糞便污染,同時(shí)間接地指出食品是否有腸道致病菌污染的可能性。

食品中大腸菌群數(shù)系以每或檢樣內(nèi)大腸菌群最近似數(shù)簡稱表示。

三、材料、樣品乳、肉、禽蛋制品、飲料、糕點(diǎn)、發(fā)酵調(diào)味品或其他食品。

、菌種大腸埃希氏菌產(chǎn)氣腸桿菌、培育基及試劑單料乳糖膽鹽發(fā)酵管、雙料乳糖膽鹽發(fā)酵管、乳糖膽鹽發(fā)酵管、伊紅美藍(lán)瓊脂、革蘭氏染色液、蛋白陳水、靛基質(zhì)試劑、麥康凱、其它設(shè)備和材料溫箱土℃、水浴鍋土.℃、天平、顯微鏡、均質(zhì)器或乳缽、溫度計(jì)、平皿、試管、發(fā)酵管、吸管、載玻片、接種針。

四、試驗(yàn)步驟一檢驗(yàn)程序大腸菌群檢驗(yàn)程序見圖—二①以無菌操作將校樣或放于含有滅菌生理鹽水或其他稀釋液的滅菌玻璃瓶內(nèi)瓶內(nèi)預(yù)置適當(dāng)數(shù)量的玻璃珠或滅菌乳缽內(nèi),經(jīng)充分振搖或研磨做成:的勻稱稀釋液。

固體檢樣最好用無菌均質(zhì)器,以—的速度處理,做成:的稀釋液。

②用滅菌吸管吸取:稀釋液,注入含有滅菌生理鹽水或其他稀釋液的試管內(nèi),振搖混勻,做成:的稀釋液,換用支滅菌吸管,按上述操作依次作倍遞增稀釋液。

③依據(jù)食品衛(wèi)生要求或?qū)z驗(yàn)樣品污染狀況的估量按種管。

也可直接用樣品接種。

.乳糖初發(fā)酵試驗(yàn)即通常所說的假定試驗(yàn)。

其目的在于檢查樣品中有無發(fā)酵乳糖產(chǎn)生氣體的細(xì)菌。

將待校樣品接種子乳糖服鹽發(fā)酵管內(nèi),接種量在以上者,用雙料乳糖膽鹽發(fā)酵管及以下者,用單料乳糖發(fā)酵管。

每一個(gè)稀釋度接種管,置土℃培育箱內(nèi),培育土,的全部乳糖膽鹽發(fā)酵管都不產(chǎn)氣,則可報(bào)告為大腸菌群陰性,勿有產(chǎn)生者,則按下列程序進(jìn)行。

如有產(chǎn)生者,則按下列程序進(jìn)行。

.分別培育將產(chǎn)氣的發(fā)酵管分別轉(zhuǎn)種在伊紅美藍(lán)瓊脂板或麥康凱瓊脂平板上,置土℃溫箱內(nèi),培育一,:然后取出,觀看菌落形態(tài)并作革蘭氏染色鏡檢和復(fù)發(fā)酵試驗(yàn)。

.乳糖復(fù)發(fā)酵試驗(yàn)即通常所說的證明試驗(yàn),其目的在于證明從乳糖初酪管試驗(yàn)呈陽性反應(yīng)的試管內(nèi)分別到的革蘭氏陰性無芽孢桿菌,確能發(fā)酵乳糖產(chǎn)生氣體。

在上述的選擇性培育基上,挑取可疑大腸菌群—個(gè)進(jìn)行革蘭氏染色,同時(shí)接種乳糖發(fā)酵管,置士℃的溫箱內(nèi)培育土,觀看產(chǎn)氣狀況。

檢樣乳糖膽鹽發(fā)酵管稀釋℃,不產(chǎn)氣產(chǎn)氣大腸桿菌陰性報(bào)告伊紅美藍(lán)瓊脂平板℃,-革蘭氏染色乳糖發(fā)酵管℃,,即報(bào)告為大腸桿菌陽性糖發(fā)酵管不產(chǎn)氣或革蘭氏染色為陽性,則報(bào)告為大腸桿菌為陰性。