超高效液相色譜-四極桿靜電場軌道阱高分辨質(zhì)譜快速測定食品中的雙胍三辛烷基苯磺酸鹽、雙炔酰菌胺、霉靈3種殺菌劑

超高效液相色譜-四極桿靜電場軌道阱高分辨質(zhì)譜快速測定食品中的雙胍三辛烷基苯磺酸鹽、雙炔酰菌胺、霉靈3種殺菌劑

近年來，在農(nóng)業(yè)、加工和保險的過程中，非法使用添加劑和添加劑，導(dǎo)致農(nóng)業(yè)中殘留顆粒的問題日益嚴(yán)重，并對人類的健康和生活環(huán)境構(gòu)成威脅。我國新頒布的GB2763—2016食品中農(nóng)藥最大殘留限量要求中新增了46種農(nóng)藥,增加了490種農(nóng)藥最大殘留限量標(biāo)準(zhǔn),其中雙胍三辛烷基苯磺酸鹽、雙炔酰菌胺、噁霉靈3種殺菌劑都規(guī)定了最大殘留臨時限量目前殺菌劑檢測方法多采用氣相色譜法本研究采用改良QuEChERS前處理方法,高效液相色譜-四極桿/靜電場軌道阱超高分辨質(zhì)譜聯(lián)用技術(shù)對具有很好的食用價值和藥用價值的瑪咖(Lepidiummeyenii)、沙棘(Hippophaerhamnoides)、菊花(Chrysanthemummorifolium)中的雙胍三辛烷基苯磺酸鹽、雙炔酰菌胺、噁霉靈3種殺菌劑殘留進(jìn)行分析,方法簡便、快速、準(zhǔn)確,為有效監(jiān)測食品中殺菌劑種類和含量提供了有力的技術(shù)支持。1材料和方法1.1高效液相色譜法瑪咖(Lepidiummeyenii)、沙棘(Hippophaerhamnoides)、菊花(Chrysanthemummorifolium)樣品:國家植物源性殘留監(jiān)控抽樣。甲醇、乙腈:色譜純,德國Merck公司;乙酸銨:色譜級,上海阿拉丁生化科技股份有限公司;冰醋酸、無水硫酸鎂(使用前于450℃烘4h)、氯化鈉:分析純,西隴科學(xué)股份有限公司;實(shí)驗(yàn)用標(biāo)準(zhǔn)品雙胍三辛烷基苯磺酸鹽(Iminoctadinetrialbesilate)雙炔酰菌胺(Mandipropamid)、噁霉靈(Hymexazol):德國Dr.Ehrenstorfer公司;實(shí)驗(yàn)用水:超純水。1.2研究適用的保持因素Q-Exactive液相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用系統(tǒng)、HypersilGOLDC18色譜柱(100mm×2.1nm,1.8μm):美國ThermoFisherScientific公司;3K15型高速冷凍離心機(jī):德國Sigma公司;Milli-Q純水系統(tǒng):美國Millipore公司;渦旋振蕩器:中國Wiggens公司;分析天平(0.01mg):瑞士Mettler公司。1.3乙腈用量的篩選精密稱取10g試樣(精確至0.001g,若為干樣品稱取1g加5mL水),置于50mL離心管中,加入乙腈(含0.1%乙酸)溶液30mL,渦旋混勻,超聲提取10min,加入4.00g無水硫酸鎂和1.00g氯化鈉,渦旋混勻,以4000r/min離心5min,取上清液于45℃水浴下氮?dú)獯蹈?分別加入0.5mL乙腈,0.5mL去離子水渦旋混勻,過0.22μm有機(jī)濾膜至進(jìn)樣瓶中供儀器檢測。1.4設(shè)備操作參數(shù)1.4.1流動相a/l乙酸銨水溶液nm色譜柱:HypersilGOLDC18(100mm×2.1nm,1.8μm);流動相A:甲醇;B:10mmol/L乙酸銨水溶液(含0.1%甲酸);流速:0.3mL/min,柱溫30℃;進(jìn)樣量:10μL;分析時間:20min;梯度洗脫程序見表1。1.4.2質(zhì)量分析條件可加熱電噴霧離子源(H-ESI);正離子掃描模式;FullMS-ddMS1.5標(biāo)準(zhǔn)儲備液的配制分別準(zhǔn)確稱取雙胍三辛烷基苯磺酸鹽、雙炔酰菌胺、噁霉靈標(biāo)準(zhǔn)品各10mg(精確至0.001mg)于10mL容量瓶中,以甲醇定容,配制成1.0g/L標(biāo)準(zhǔn)儲備液,于冷藏條件下保存。實(shí)驗(yàn)中根據(jù)需要進(jìn)行稀釋。2結(jié)果與分析2.1色譜條件的優(yōu)化本實(shí)驗(yàn)采用10mmol/L乙酸銨水溶液(含0.1%甲酸)甲醇為流動相。分別考察了5、10、15mmol/L和30mmol/L乙酸銨與甲醇組成的流動相體系分離效果。發(fā)現(xiàn)不加酸時,3種化合物的色譜峰峰形較差;加入0.1%甲酸后峰形得到明顯改善,其中10、15mmol/L和30mmol/L乙酸銨時質(zhì)譜響應(yīng)理想,分離效果好,綜合考慮增大緩沖鹽濃度容易導(dǎo)致色譜柱堵塞和質(zhì)譜的污染,本實(shí)驗(yàn)采用10mmol/L乙酸銨水溶液(含0.1%甲酸)-甲醇為流動相,通過優(yōu)化實(shí)驗(yàn)條件采用梯度洗脫。2.2正、負(fù)離子模式下不同藥劑的質(zhì)譜響應(yīng)在空白樣品中添加3種化合物的標(biāo)準(zhǔn)溶液(0.05mg/L),分別在正、負(fù)離子模式下考察了3種殺菌劑的質(zhì)譜響應(yīng)。3種化合物均在正離子模式下有較強(qiáng)響應(yīng),因此選擇在正離子模式下同時檢測3種目標(biāo)物質(zhì)。2.3提取色譜圖的建立根據(jù)3種殺菌劑的分子結(jié)構(gòu),采用正離子電噴霧模式ESI+進(jìn)行檢測。首先在70000分辨率下通過FullMS模式找到3種殺菌劑一級提取離子色譜圖,樣品基質(zhì)中的3種殺菌劑提取色譜圖清晰完整,可以進(jìn)行準(zhǔn)確的定性。為避免因基質(zhì)復(fù)雜而導(dǎo)致假陽性的情況發(fā)生,同時添加了ddMS2.4標(biāo)準(zhǔn)曲線及檢出限以標(biāo)準(zhǔn)品峰面積為縱坐標(biāo),對應(yīng)工作溶液濃度(μg/L)為橫坐標(biāo),在優(yōu)化條件下考察了3種殺菌劑的線性范圍和相關(guān)系數(shù),實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示3種殺菌劑在(5~500)μg/L范圍內(nèi)線性關(guān)系良好,相關(guān)系數(shù)均大于0.999。對混合標(biāo)準(zhǔn)溶液進(jìn)行逐級稀釋,以3倍信噪比計算檢出限(LOD),10倍信噪比計算定量下限(LOQ),結(jié)果見表3。GB2763—2016規(guī)定了雙胍三辛烷基苯磺酸鹽、雙炔酰菌胺、噁霉靈在各種植物源食品中的MRL,其中雙胍三辛烷基苯磺酸鹽在西瓜中的MRL值最小,為20μg/kg;雙炔酰菌胺在馬鈴薯中的MRL值最小,為10μg/kg;噁霉靈在糙米中的MRL值最小,為100μg/kg,本方法均可滿足其檢測分析的需求。2.5回收率、精密度分別在瑪咖、沙棘、菊花的空白樣品中添加3種殺菌劑混合標(biāo)準(zhǔn)溶液進(jìn)行加標(biāo)回收實(shí)驗(yàn),雙炔酰菌胺、噁霉靈分別在5、10、50μg/kg3個水平做添加回收,雙胍三辛烷基苯磺酸鹽在25、100、500μg/kg3個水平做添加回收,每個水平平行測定6次,方法的回收率在73%~106%之間,相對標(biāo)準(zhǔn)偏差在2.1%~5.9%之間,符合農(nóng)藥殘留測定允許范圍,說明該方法的準(zhǔn)確度和精密度符合檢測要求。2.6種雙臨床最優(yōu)制劑的檢測結(jié)果分別對國家植物源性殘留監(jiān)控抽樣提供的瑪咖、沙棘、菊花樣品各50個,使用本方法對其中的雙胍三辛烷基苯磺酸鹽、雙炔酰菌胺、噁霉靈3種殺菌劑進(jìn)行監(jiān)測,監(jiān)測結(jié)果均為未檢出。方法具有較高的靈敏度和較好的重現(xiàn)性,可以滿足市場樣品監(jiān)測的需求。3快速定性定量無定分法本研究建立了藥