旋覆花化學(xué)成分及其抗炎活性研究

旋覆花化學(xué)成分及其抗炎活性研究

《中國藥典》2010年版中的花是薔薇科植物的花，屬于植物的花。i.brianin。作為一種傳統(tǒng)的中藥，它主要分布在歐洲、非洲和亞洲的中國、韓國和日本。1測定柱及試劑BrukerAV400核磁共振儀(TMS內(nèi)標(biāo));液質(zhì)聯(lián)用色譜儀:Alliance2695QuattroMicroTMESI(Waters);半制備高效液相色譜儀:日本分光公司(JASCO),PU-2089(泵),RI-2031及UV-2075(檢測器);制備HPLC色譜柱:GPC(凝膠滲透色譜柱)Shodex,AsahipakGS-20G(20mm×500mm),YMC-PackODS-ASH-343-5(20mm×250mm),YMC-PackSIL-06(20mm×250mm,5μm);凝膠柱色譜ToyopearlHW-40C(Tosoh);日本HitachiUV-3310型紫外-可見分光光度計(jì);柱色譜和薄層色譜用硅膠均系青島海洋化工廠生產(chǎn),所用試劑均為分析純;氘代試劑購自美國Sigma-Aldrich公司。小鼠單核巨噬細(xì)胞RAW264.7細(xì)胞(韓國細(xì)胞株銀行);LTC旋覆花于2010年采集于河南,經(jīng)天津醫(yī)科大學(xué)藥學(xué)院周曄教授鑒定為I.japonica,標(biāo)本(D20110331)存放于天津醫(yī)科大學(xué)藥學(xué)院。2化合物的分離純化2.1提取與分離旋覆花干燥頭狀花序8kg,用75%乙醇回流提取3次,每次2h,提取液減壓濃縮,提取物(672g)以水混懸,依次用石油醚、乙酸乙酯、正丁醇萃取,分別得到石油醚提取物(36g)、乙酸乙酯提取物(117g)、正丁醇提取物(266g)。旋覆花乙酸乙酯提取物(117g),以硅膠柱色譜分離,分別用石油醚-乙酸乙酯(4∶1,3∶1,2∶1,1∶1,1∶2),乙酸乙酯,乙酸乙酯-甲醇(95∶5,9∶1,8∶2)梯度洗脫,TLC合并類似組分,得到組分XFH0101-0128。組分XFH0112經(jīng)過凝膠(ToyopearlHW-40)柱色譜分離得到5個(gè)組分(12.1~12.5)。組分12.3經(jīng)制備高效液相色譜ODS分離(甲醇-水,7∶3)和制備凝膠滲透色譜GPC(MeOH)純化,得到化合物1(7.0mg),2(7.5mg),3(14.0mg)。組分12.4進(jìn)一步經(jīng)制備高效液相ODS(甲醇-水,6∶4)純化,得到化合物10(13.5mg)。XHF0115經(jīng)過凝膠(Toyo-pearlHW-40)柱色譜分離得到6個(gè)組分(15.1~15.6)。組分15.3和15.4分別經(jīng)制備高效液相色譜(ODS-A,甲醇-水,6∶4;GPC,甲醇)分離純化,得到化合物6(9.4mg),11(55.5mg)。XFH0111經(jīng)過凝膠(ToyopearlHW-40)柱色譜分離,經(jīng)制備高效液相色譜(GPC,甲醇)純化得到化合物7(13.4mg),8(9.1mg),9(38.7mg),14(35.3mg)。組分XFH0114(2.8g)以凝膠(ToyopearlHW-40)柱色譜分離,進(jìn)一步重結(jié)晶得到化合物12(300.0mg)。XFH0109(2.8g)經(jīng)過凝膠(ToyopearlHW-40)柱色譜分離,進(jìn)一步經(jīng)制備高效液相色譜ODS(甲醇-水,8∶2)和GPC(甲醇)分離純化得到化合物4(3.0mg),5(8.6mg),13(7.0mg)。XFH0113(2.2g)經(jīng)過凝膠(ToyopearlHW-40)柱色譜分離,進(jìn)一步經(jīng)制備高效液相色譜GPC分離得到化合物15(5.0mg)。2.2NO生成的測定RAW264.7細(xì)胞培養(yǎng)于含10%FBS的DMEM培養(yǎng)基。取對數(shù)生長期的細(xì)胞(3×102.3LTC3ei-msm/z400m/h化合物結(jié)構(gòu)表征化合物1無色油狀物;ESI-MSm/z211[M-H]化合物2無色油狀物;EI-MSm/z224(M化合物3無色油狀物;EI-MSm/z208(M化合物4白色無定形粉末;EI-MSm/z442(M化合物5白色無定形粉末;EI-MSm/z468(M化合物6無色油狀物;ESI-MSm/z199[M+H]化合物7淺黃色粉末;ESI-MSm/z305[M+H]化合物8黃色無定形粉末;ESI-MSm/z309[M+Na]化合物9淡黃色針狀結(jié)晶(甲醇);ESI-MSm/z339[M+Na]化合物10黃色無定性粉末;ESI-MSm/z383[M+Na]化合物11黃色無定性粉末;ESI-MSm/z369[M+Na]化合物12黃色粉末;ESI-MSm/z303[M+H]化合物13白色粉末;ESI-MSm/z165[M+H]化合物14白色針晶;ESI-MSm/z203[M+Na]化合物15白色片狀結(jié)晶(甲醇);ESI-MSm/z231[M+Na]4no釋放活性的檢測4.1各種化合物對LPS誘導(dǎo)的RAW264.7細(xì)胞釋放NO的影響利用Griess法測定RAW264.7細(xì)胞NO的釋放量,在非細(xì)胞毒濃度下檢測各化合物對NO的釋放的抑制活性?；衔?,12與其他化合物相比顯示出較強(qiáng)的NO生成抑制作用,而且其活性呈劑量依賴性,IC4.2各種化合物對KL誘導(dǎo)的BMMCs生成LTC5植物基、化合物3,4,9,1