新生隱球菌的致病機理

CHANGZHENGHOSPITAL,SHANGHAI1精選ppt隱球菌病的致病菌2精選pptCC.3精選pptMaturebasidiaPostmeioticmitosisMeiosisKaryogamyinbasidiumDikaryotichyphaeConjugationHaploidcycleaaLifeCycleMATaXMATa4精選pptBloodstreamBrainCryptococcosis:Routeofinfectionanddissemination5精選ppt隱球菌病病原菌:新生隱球菌感染途徑:吸入，皮膚，胃腸道？分布:世界范圍

腦、肺、皮膚、骨和關(guān)節(jié)

HIV,淋巴瘤,激素治療,器官移植

原發(fā)性CD4淋巴細胞減少未治療的腦膜炎死亡率為100%

易感因素:易感器官：預后:6精選ppt新生隱球菌的毒性因子莢膜黑素磷脂酶37℃下生長良好7精選ppt新生隱球菌致病機理中

幾個關(guān)鍵問題新生隱球菌是如何穿過血腦屏障后進入中樞神經(jīng)系統(tǒng)的？為什么新生隱球菌易于感染中樞神經(jīng)系統(tǒng)？新生隱球菌進入機體的途徑是否只有吸入肺部后入血一個？8精選ppt新生隱球菌通過血腦屏障的機制研究人臍靜脈內(nèi)皮細胞（HUVEC）建立血腦屏障模型，觀察新生隱球菌對HUVEC的影響新生隱球菌靜脈感染C57BL/6小鼠后，檢測大腦皮質(zhì)內(nèi)新生隱球菌感染情況，大腦皮質(zhì)內(nèi)細胞凋亡及大腦皮質(zhì)中特異蛋白的表達9精選pptMousemodelofcryptococcosis10精選ppt血腦屏障模式圖11精選ppt

緊密連接血腦屏障病原體1231:細胞內(nèi)侵襲2:細胞旁通過－打開緊密連接3:

木馬機制：通過巨嗜細胞穿越ECM巨嗜細胞病原體穿越血腦屏障的方式

12精選pptHBMEC單層半通透膜Filter-insert腦側(cè)血液側(cè)新生隱球菌檢測新生隱球菌通過血腦屏障的體外模型13精選ppt新生隱球菌對血腦屏障內(nèi)皮細胞凋亡的影響

A:對照組B:2hC:6hD:12h新生隱球菌侵襲血腦屏障EC細胞的凋亡率14精選ppt新生隱球菌侵襲血腦屏障透射電鏡A:對照組B:0.5hC:0.5hD:0.5hE:0.5hF:6hG:6hH:12h15精選ppt新生隱球菌侵襲血腦屏障EC掃描電鏡結(jié)果

A:對照組B:2hC:6hD:12h16精選pptHUVECBcl-2(抑凋亡基因)的表達被抑制

A：對照組B：2hC：6h：D：12h17精選pptHUVECBax

(凋亡基因)的表達被啟動A：對照組B：2hC：6h：D：12h18精選ppt新生隱球菌對血腦屏障緊密連接通透性的影響HUVEC緊密連接相關(guān)蛋白表達緊密連接胞質(zhì)附著蛋白ZO-1血管滲透因子VEGFIL-619精選ppt新生隱球菌對C57BL/6小鼠大腦皮質(zhì)作用研究

大腦皮質(zhì)PAS染色

A：CgroupB：CTXgroupC：0.5hD：2hE：6hF：12hG：24hH：72h大腦皮質(zhì)透射電鏡A：CgroupB：24hC：72hD：CgroupE：24hF：72h20精選ppt新生隱球菌對C57BL/6小鼠大腦皮質(zhì)作用研究小鼠大腦皮質(zhì)Bcl-2在不同時相點的比較不同時相點的小鼠大腦皮質(zhì)凋亡細胞比較不同時相點的小鼠大腦皮質(zhì)Bax比較21精選ppt新生隱球菌對C57BL/6小鼠大腦皮質(zhì)作用研究

22精選ppt初步結(jié)論新生隱球菌入血后到達血腦屏障，通過相關(guān)細胞因子如IL-6和VEGF等作用引起腦微血管內(nèi)皮細胞的凋亡，緊密連接開放，細胞間隙增大，并可能使血腦屏障完整性被破壞，穿越血腦屏障，感染宿主腦組織23精選ppt隱球菌腦膜炎發(fā)病機制新生隱球菌的跨膜作用穿越腦微血管內(nèi)皮細胞緊密連接腦微血管內(nèi)皮細胞凋亡其它相關(guān)因子導致的通透性的增加24精選ppt新生隱球菌嗜中樞性的研究利用蛋白質(zhì)組學技術(shù)分析新生隱球菌與血管內(nèi)皮細胞共孵育后血管內(nèi)皮細胞蛋白質(zhì)譜的變化篩選差異表達蛋白，并在基因的轉(zhuǎn)錄層面進行驗證

25精選ppt血管內(nèi)皮細胞總蛋白差異表達譜

實驗組蛋白二維凝膠電泳圖譜對照組蛋白二維凝膠電泳圖譜26精選ppt實驗組與對照組細胞蛋白表達差異共找到可信差異表達蛋白點19個5個蛋白點僅在對照組細胞中表達3個蛋白點僅在實驗組細胞中表達10個蛋白點在實驗組細胞中表達降低1個蛋白點在實驗組細胞中表達升高

27精選ppt差異表達蛋白點肽指紋譜鑒定S100A10PrxⅠ

Prohibitin(PHB)

HSP27MalatedehydrogenaseCacyBPPSA7_HUMANcofilin28精選ppt隱球菌嗜中樞性可能的相關(guān)機制增強細胞骨架活動能力，促進細胞胞吞胞吐活動減少HUVEC對氧應激的耐受能力，細胞損傷增加，增殖能力下降促進細胞凋亡影響了HUVEC正常的細胞內(nèi)信號轉(zhuǎn)導過程抑制細胞能量代謝

29精選ppt皮膚隱球菌感染的研究小鼠原發(fā)性皮膚隱球菌感染模型的建立宿主免疫狀態(tài)、隱球菌變種和莢膜與皮膚隱球菌感染的關(guān)系小鼠隱球菌皮膚感染后是否發(fā)生播散人角質(zhì)形成細胞株－HaCat體外與新生隱球菌相互作用30精選ppt31精選ppt小鼠原發(fā)性皮膚隱球菌感染模型傳染性軟疣樣皮損潰瘍結(jié)節(jié)樣皮損PAS染色32精選ppt小鼠隱球菌感染后的血行播散免疫抑制與免疫正常小鼠各個臟器及血液真菌培養(yǎng)均為陰性免疫抑制小鼠血清乳膠凝集試驗陽性

乳膠凝集試驗是目前比較成熟的技術(shù)，在去除試驗本身因素影響后，其陽性率接近100％

免疫嚴重受損的患者，皮膚局部創(chuàng)傷后大劑量接種隱球菌還是可能引起播散性的隱球菌感染33精選ppt隱球菌皮膚致病性中的影響因素免疫抑制的作用可以使隱球菌感染皮損出現(xiàn)時間提前，感染加重。無莢膜株與父代有莢膜株在皮膚的致病力方面沒有明顯差別兩個變種之間的致病力沒有顯著差別34精選ppt新生隱球菌與角質(zhì)形成細胞的體外相互作用

35精選ppt透射電鏡觀察新生隱球菌與角質(zhì)形成細胞的作用

角質(zhì)形成細胞中的B3501，可見菌體正在出芽。角質(zhì)形成細胞中的cap64，可見菌體中出現(xiàn)空泡。36精選ppt新生隱球菌觸發(fā)角質(zhì)形成細胞表面蛋白酪氨酸殘基磷酸化空白對照B3501作用2h