新生隱球菌的致病機(jī)理

CHANGZHENGHOSPITAL,SHANGHAI1精選ppt隱球菌病的致病菌2精選pptCC.3精選pptMaturebasidiaPostmeioticmitosisMeiosisKaryogamyinbasidiumDikaryotichyphaeConjugationHaploidcycleaaLifeCycleMATaXMATa4精選pptBloodstreamBrainCryptococcosis:Routeofinfectionanddissemination5精選ppt隱球菌病病原菌:新生隱球菌感染途徑:吸入，皮膚，胃腸道？分布:世界范圍

腦、肺、皮膚、骨和關(guān)節(jié)

HIV,淋巴瘤,激素治療,器官移植

原發(fā)性CD4淋巴細(xì)胞減少未治療的腦膜炎死亡率為100%

易感因素:易感器官：預(yù)后:6精選ppt新生隱球菌的毒性因子莢膜黑素磷脂酶37℃下生長(zhǎng)良好7精選ppt新生隱球菌致病機(jī)理中

幾個(gè)關(guān)鍵問(wèn)題新生隱球菌是如何穿過(guò)血腦屏障后進(jìn)入中樞神經(jīng)系統(tǒng)的？為什么新生隱球菌易于感染中樞神經(jīng)系統(tǒng)？新生隱球菌進(jìn)入機(jī)體的途徑是否只有吸入肺部后入血一個(gè)？8精選ppt新生隱球菌通過(guò)血腦屏障的機(jī)制研究人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞（HUVEC）建立血腦屏障模型，觀察新生隱球菌對(duì)HUVEC的影響新生隱球菌靜脈感染C57BL/6小鼠后，檢測(cè)大腦皮質(zhì)內(nèi)新生隱球菌感染情況，大腦皮質(zhì)內(nèi)細(xì)胞凋亡及大腦皮質(zhì)中特異蛋白的表達(dá)9精選pptMousemodelofcryptococcosis10精選ppt血腦屏障模式圖11精選ppt

緊密連接血腦屏障病原體1231:細(xì)胞內(nèi)侵襲2:細(xì)胞旁通過(guò)－打開(kāi)緊密連接3:

木馬機(jī)制：通過(guò)巨嗜細(xì)胞穿越ECM巨嗜細(xì)胞病原體穿越血腦屏障的方式

12精選pptHBMEC單層半通透膜Filter-insert腦側(cè)血液側(cè)新生隱球菌檢測(cè)新生隱球菌通過(guò)血腦屏障的體外模型13精選ppt新生隱球菌對(duì)血腦屏障內(nèi)皮細(xì)胞凋亡的影響

A:對(duì)照組B:2hC:6hD:12h新生隱球菌侵襲血腦屏障EC細(xì)胞的凋亡率14精選ppt新生隱球菌侵襲血腦屏障透射電鏡A:對(duì)照組B:0.5hC:0.5hD:0.5hE:0.5hF:6hG:6hH:12h15精選ppt新生隱球菌侵襲血腦屏障EC掃描電鏡結(jié)果

A:對(duì)照組B:2hC:6hD:12h16精選pptHUVECBcl-2(抑凋亡基因)的表達(dá)被抑制

A：對(duì)照組B：2hC：6h：D：12h17精選pptHUVECBax

(凋亡基因)的表達(dá)被啟動(dòng)A：對(duì)照組B：2hC：6h：D：12h18精選ppt新生隱球菌對(duì)血腦屏障緊密連接通透性的影響HUVEC緊密連接相關(guān)蛋白表達(dá)緊密連接胞質(zhì)附著蛋白ZO-1血管滲透因子VEGFIL-619精選ppt新生隱球菌對(duì)C57BL/6小鼠大腦皮質(zhì)作用研究

大腦皮質(zhì)PAS染色

A：CgroupB：CTXgroupC：0.5hD：2hE：6hF：12hG：24hH：72h大腦皮質(zhì)透射電鏡A：CgroupB：24hC：72hD：CgroupE：24hF：72h20精選ppt新生隱球菌對(duì)C57BL/6小鼠大腦皮質(zhì)作用研究小鼠大腦皮質(zhì)Bcl-2在不同時(shí)相點(diǎn)的比較不同時(shí)相點(diǎn)的小鼠大腦皮質(zhì)凋亡細(xì)胞比較不同時(shí)相點(diǎn)的小鼠大腦皮質(zhì)Bax比較21精選ppt新生隱球菌對(duì)C57BL/6小鼠大腦皮質(zhì)作用研究

22精選ppt初步結(jié)論新生隱球菌入血后到達(dá)血腦屏障，通過(guò)相關(guān)細(xì)胞因子如IL-6和VEGF等作用引起腦微血管內(nèi)皮細(xì)胞的凋亡，緊密連接開(kāi)放，細(xì)胞間隙增大，并可能使血腦屏障完整性被破壞，穿越血腦屏障，感染宿主腦組織23精選ppt隱球菌腦膜炎發(fā)病機(jī)制新生隱球菌的跨膜作用穿越腦微血管內(nèi)皮細(xì)胞緊密連接腦微血管內(nèi)皮細(xì)胞凋亡其它相關(guān)因子導(dǎo)致的通透性的增加24精選ppt新生隱球菌嗜中樞性的研究利用蛋白質(zhì)組學(xué)技術(shù)分析新生隱球菌與血管內(nèi)皮細(xì)胞共孵育后血管內(nèi)皮細(xì)胞蛋白質(zhì)譜的變化篩選差異表達(dá)蛋白，并在基因的轉(zhuǎn)錄層面進(jìn)行驗(yàn)證

25精選ppt血管內(nèi)皮細(xì)胞總蛋白差異表達(dá)譜

實(shí)驗(yàn)組蛋白二維凝膠電泳圖譜對(duì)照組蛋白二維凝膠電泳圖譜26精選ppt實(shí)驗(yàn)組與對(duì)照組細(xì)胞蛋白表達(dá)差異共找到可信差異表達(dá)蛋白點(diǎn)19個(gè)5個(gè)蛋白點(diǎn)僅在對(duì)照組細(xì)胞中表達(dá)3個(gè)蛋白點(diǎn)僅在實(shí)驗(yàn)組細(xì)胞中表達(dá)10個(gè)蛋白點(diǎn)在實(shí)驗(yàn)組細(xì)胞中表達(dá)降低1個(gè)蛋白點(diǎn)在實(shí)驗(yàn)組細(xì)胞中表達(dá)升高

27精選ppt差異表達(dá)蛋白點(diǎn)肽指紋譜鑒定S100A10PrxⅠ

Prohibitin(PHB)

HSP27MalatedehydrogenaseCacyBPPSA7_HUMANcofilin28精選ppt隱球菌嗜中樞性可能的相關(guān)機(jī)制增強(qiáng)細(xì)胞骨架活動(dòng)能力，促進(jìn)細(xì)胞胞吞胞吐活動(dòng)減少HUVEC對(duì)氧應(yīng)激的耐受能力，細(xì)胞損傷增加，增殖能力下降促進(jìn)細(xì)胞凋亡影響了HUVEC正常的細(xì)胞內(nèi)信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)過(guò)程抑制細(xì)胞能量代謝

29精選ppt皮膚隱球菌感染的研究小鼠原發(fā)性皮膚隱球菌感染模型的建立宿主免疫狀態(tài)、隱球菌變種和莢膜與皮膚隱球菌感染的關(guān)系小鼠隱球菌皮膚感染后是否發(fā)生播散人角質(zhì)形成細(xì)胞株－HaCat體外與新生隱球菌相互作用30精選ppt31精選ppt小鼠原發(fā)性皮膚隱球菌感染模型傳染性軟疣樣皮損潰瘍結(jié)節(jié)樣皮損PAS染色32精選ppt小鼠隱球菌感染后的血行播散免疫抑制與免疫正常小鼠各個(gè)臟器及血液真菌培養(yǎng)均為陰性免疫抑制小鼠血清乳膠凝集試驗(yàn)陽(yáng)性

乳膠凝集試驗(yàn)是目前比較成熟的技術(shù)，在去除試驗(yàn)本身因素影響后，其陽(yáng)性率接近100％

免疫嚴(yán)重受損的患者，皮膚局部創(chuàng)傷后大劑量接種隱球菌還是可能引起播散性的隱球菌感染33精選ppt隱球菌皮膚致病性中的影響因素免疫抑制的作用可以使隱球菌感染皮損出現(xiàn)時(shí)間提前，感染加重。無(wú)莢膜株與父代有莢膜株在皮膚的致病力方面沒(méi)有明顯差別兩個(gè)變種之間的致病力沒(méi)有顯著差別34精選ppt新生隱球菌與角質(zhì)形成細(xì)胞的體外相互作用

35精選ppt透射電鏡觀察新生隱球菌與角質(zhì)形成細(xì)胞的作用

角質(zhì)形成細(xì)胞中的B3501，可見(jiàn)菌體正在出芽。角質(zhì)形成細(xì)胞中的cap64，可見(jiàn)菌體中出現(xiàn)空泡。36精選ppt新生隱球菌觸發(fā)角質(zhì)形成細(xì)胞表面蛋白酪氨酸殘基磷酸化空白對(duì)照B3501作用2h