甲殼素發(fā)酵液在彭澤鯽幼魚養(yǎng)殖上應(yīng)用效果研究

甲殼素發(fā)酵液在彭澤鯽幼魚養(yǎng)殖上應(yīng)用效果研究

隨著漁業(yè)養(yǎng)殖的逐漸實(shí)現(xiàn)集中管理和化工過程，魚類容易感染致病性微生物，容易發(fā)生疾病。大量抗生素和農(nóng)藥長期使用不僅使魚肉的品質(zhì)受到嚴(yán)重的影響,并且藥品的長期使用還會通過食物鏈直接影響人類健康1材料和方法1.1病原菌和甲殼素發(fā)酵液魚苗:購自江西省水產(chǎn)科學(xué)研究所,選取體重35g左右彭澤鯽。飼料:市場購買,主要成分含量為粗蛋白28.0%,粗脂肪8.5%,總磷0.60%,粗纖維10.0%,粗灰分11.0%,水份13.0%。病原菌:嗜水氣單胞菌(Aeromonashydrophila),上海海洋大學(xué)贈送。甲殼素發(fā)酵液(CFL):本課題組開發(fā)的一種微生態(tài)制劑,該制劑是由三種芽孢桿菌(Bacillussp.)和一種酵母菌(Saccharomycessp.)聯(lián)合降解膠質(zhì)甲殼素得到的發(fā)酵液,發(fā)酵后甲殼素降解為殼聚糖。發(fā)酵液中含有大量脫乙酰酶和幾丁質(zhì)酶,四種微生物總含量=10×10商品殼聚糖(C):粉狀制品,購于山東青島海良生物制品有限公司,脫乙酰度為99%。1.2養(yǎng)殖重復(fù)與攻毒試驗(yàn)設(shè)4個處理:①對照(CK),僅飼喂基礎(chǔ)飼料;②0.01%甲殼素發(fā)酵液(0.01%CFL),按照池水量0.01%投入,每隔7d潑灑一次;③0.02%甲殼素發(fā)酵液(0.02%CFL),按照池水量0.02%投入,每隔7d潑灑一次;④0.02%甲殼素發(fā)酵液+殼聚糖(0.02%CFL+C),殼聚糖在基礎(chǔ)飼料中按照0.1%添加,甲殼素發(fā)酵液按照池水量0.02%投入,每隔7d潑灑一次。每個水泥養(yǎng)殖池為1個重復(fù),每個處理設(shè)3個重復(fù)。室外水泥養(yǎng)殖池的水體面積為6m選擇健壯、無傷病、體長和體重接近的幼魚,試驗(yàn)開始前對幼魚稱重,每個水池中彭澤鯽40尾。日投喂量按體重的3%飼喂,每天2次,上下午各1次。先用基礎(chǔ)飼料馴養(yǎng)7d,至攝食正常后,開始正式試驗(yàn)。在整個試驗(yàn)過程中,池水日通氣時間不少于10h,養(yǎng)殖過程中不換水。養(yǎng)殖時間為9月25日—11月25日,養(yǎng)殖結(jié)束幼魚稱重。攻毒試驗(yàn):每個水池中選出20尾彭澤鯽進(jìn)行攻毒試驗(yàn)。試驗(yàn)在室內(nèi)可控溫、通氣玻璃魚缸內(nèi)進(jìn)行,溫度控制在25℃左右。嗜水氣單胞菌在接種之前活化3次,經(jīng)預(yù)試驗(yàn)確定攻毒濃度為4×10RPS=(1-處理死亡率/對照死亡率)×100%水質(zhì)測定:不同時間取樣測定養(yǎng)殖水體中亞硝態(tài)氮、總氮和總磷含量,亞硝態(tài)氮采用N-(1-萘基)-乙二胺光度法,總氮采用堿性過硫酸鉀消解紫外分光光度法,總磷采用鉬酸銨分光光度法消化酶測定:養(yǎng)殖試驗(yàn)結(jié)束后取饑餓1d的彭澤鯽,用南京建成生物工程研究所試劑盒測定魚體內(nèi)淀粉酶、脂肪酶和蛋白酶活性。從每個處理組中隨機(jī)取彭澤鯽6尾,取出全腸和肝胰臟,將全腸和肝胰臟一起稱重,置于勻漿器中,加入10倍體積的高純水勻漿,在4℃冰箱中靜置過夜。4℃、10000r/min離心10min,獲得的上清液即為粗酶液,并置于4℃冰箱中待用1.3統(tǒng)計(jì)分析數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)分析采用SASV8軟件的Duncan氏法進(jìn)行多重比較,P<0.05作為差異顯著性判斷標(biāo)準(zhǔn)。2結(jié)果與分析2.1不同處理對彭澤東南角、小瓜蟲感染的效果,對樣品率與比對,總促生效果分析。對于,彭澤姜片認(rèn)為,不同甲殼素發(fā)酵液處理對彭澤鯽幼魚促進(jìn)生長效果明顯(見表1),每個處理中彭澤鯽總體重與養(yǎng)殖初期比較增重均達(dá)到20%以上,三個處理分別比對照增重高101.5%、110.4%和172.7%,增重效果顯著高于對照。比較甲殼素發(fā)酵液與殼聚糖聯(lián)合處理效果,對彭澤鯽促生效果比單獨(dú)甲殼素發(fā)酵液效果更好。在試驗(yàn)過程中,彭澤鯽感染了存活在養(yǎng)殖水泥池中的寄生蟲———小瓜蟲,對照在15d時全部死亡,甲殼素發(fā)酵液處理比對照晚5d出現(xiàn)小瓜蟲感染癥狀,死亡率為50%左右。由于試驗(yàn)中彭澤鯽感染寄生蟲,先前一批養(yǎng)殖20d時清除剩余彭澤鯽,養(yǎng)殖池用石灰水徹底消毒、曝曬后重新開始試驗(yàn)。養(yǎng)殖60d后嗜水氣單胞菌病原菌對不同處理彭澤鯽攻毒,結(jié)果表明(見表2),10d時甲殼素發(fā)酵液都能有效降低彭澤鯽幼魚死亡率,相對保護(hù)率均達(dá)到58%以上。2.2種甲殼素發(fā)酵液對5.7%的脂肪酶表達(dá)的影響從消化系統(tǒng)中三種消化酶測定結(jié)果看(見表3),甲殼素發(fā)酵液處理提高了彭澤鯽幼魚體內(nèi)消化酶活性。0.01%甲殼素發(fā)酵液處理彭澤鯽脂肪酶、蛋白酶和淀粉酶分別比對照高26.13%、25.60%和36.41%,0.02%分別比對照高35.11%、22.03%和43.09%,0.01%和0.02%甲殼素發(fā)酵液差異不明顯。甲殼素發(fā)酵液與殼聚糖聯(lián)合效果對三種消化酶提高效果更明顯,提高幅度都達(dá)到45%以上。2.3不同水體環(huán)境因子的降低效果從表4可以看出不同處理對養(yǎng)殖水質(zhì)因素的影響,甲殼素發(fā)酵液處理均能不同程度降低亞硝態(tài)氮、總氮和總磷含量,0.01%甲殼素發(fā)酵液處理分別比對照相應(yīng)低29.4%、15.2%和77.8%(P<0.05),0.02%甲殼素發(fā)酵液處理分別低32.1%、19.0%和77.8%,0.02%甲殼素發(fā)酵液和殼聚糖聯(lián)合處理分別低27.8%、13.3%和86.9%。從結(jié)果看出,0.02%甲殼素發(fā)酵液對三種水體環(huán)境因子降低效果略好于0.01%甲殼素發(fā)酵液處理,但是沒有達(dá)到顯著性差異;0.02%甲殼素發(fā)酵液和殼聚糖聯(lián)合處理與單獨(dú)0.02%甲殼素發(fā)酵液比較效果不明顯。3脫堿等甲殼素脫乙酰降解為殼聚糖需要大量氫氧化鈉、正戊醇、過氧化氫等化學(xué)試劑,反應(yīng)過程需要高溫和多次洗滌脫堿等,并且能耗高、環(huán)境污染嚴(yán)重。因此,用化學(xué)方法制備殼