馬立克氏病雞紅細胞天然免疫黏附活性及其超微結(jié)構(gòu)研究

馬立克氏病雞紅細胞天然免疫黏附活性及其超微結(jié)構(gòu)研究

自1981年以來，美國免疫學(xué)家sieger。紅細胞免疫在畜牧獸醫(yī)領(lǐng)域也引起了廣大學(xué)者的重視,從調(diào)整紅細胞免疫功能的角度研究疾病的發(fā)病機制、確定預(yù)防與治療方案、檢驗治療效果、評定飼料的營養(yǎng)價值等。但目前還沒有建立起動物紅細胞花環(huán)率的正常值范圍11.1測試雞40羽1日齡海蘭褐公雛雞均購自太谷某種雞場。1.2病毒馬立克氏病強毒京-1株血毒購自北京市農(nóng)林科學(xué)院畜牧獸醫(yī)研究所,批號:200806,液氮中保存。1.3試驗雞感染血毒液養(yǎng)雞將40羽1日齡海蘭褐公雛雞分為兩組,即健康對照組(C)、馬立克強毒攻毒組(GD),每組20羽,隔離飼養(yǎng)。對照組每羽雞腹腔注射0.2ml滅菌Hanks液,攻毒組每羽雞腹腔注射0.2ml16倍稀釋的京-1株血毒稀釋液。按照常規(guī)飼養(yǎng)管理,觀察雛雞發(fā)病情況。分別于26、34、35、44日齡進行剖殺,取樣。1.4天然免疫固結(jié)功能測定1.4.1抗凝采血管的制備對各階段試驗雞每組取4羽心臟采血,收集到一次性真空抗凝采血管中。離心,沉淀紅細胞,吸出血漿備用;PBS液洗滌紅細胞3次,配制成1×101.4.2改性pbs液制備采集各階段試驗雞肝臟組織各1g,剪碎呈糊狀,加入PBS液,經(jīng)200目尼龍網(wǎng)過濾,離心棄上清液,PBS液洗3次,再經(jīng)300目尼龍網(wǎng)過濾,離心洗2次,配成1×101.4.3分離細胞后肝臟組織分別取2只1.5mlEP管,每管加待測紅細胞懸液30μl,第1管加等量的肝組織分離細胞懸液和血漿的混合液;第2管直接加等量的肝組織分離細胞懸液,搖勻,37℃水浴40min,取出,加60μlPBS及0.25%戊二醛,混勻后靜置5min,取一半水平涂片,干燥,瑞氏染色,鏡檢。統(tǒng)計結(jié)合2個以上紅細胞的腫瘤細胞個數(shù),計算黏附率。1.5掃描電鏡觀察按照“1.4.3”制備紅細胞免疫黏附腫瘤細胞懸液,離心棄上清,加入2%戊二醛固定5min,PBS洗滌2～3次,將制成的細胞懸液滴于蓋玻片上,用梯度酒精脫水,干燥,用導(dǎo)電膠粘玻片于載物臺上,噴金,掃描電鏡觀察。1.6處理數(shù)據(jù)所有數(shù)據(jù)以22.1雞紅細胞的鑒定紅細胞免疫黏附腫瘤細胞涂片染色后,油鏡下可看到雞紅細胞呈卵圓形,核橢圓形,核濃染,胞漿清晰可見;腫瘤細胞呈圓形,周圍結(jié)合3個紅細胞。見圖1。2.2免疫黏附結(jié)合率從表1看出,與對照組相比,攻毒組在26日齡時紅細胞與馬立克氏病腫瘤細胞免疫黏附結(jié)合率稍高,但差異不顯著;而在44日齡免疫黏附結(jié)合率接近對照組水平。從表2看出,與對照組相比,攻毒組在26、34、35日齡時,紅細胞與馬立克氏病腫瘤細胞免疫黏附結(jié)合率顯著增高。2.3掃描紅細胞免疫損傷3攻毒雞紅細胞免疫功能的變化免疫黏附是紅細胞的最重要的免疫功能之一,因此免疫黏附受體是深入研究紅細胞免疫的關(guān)鍵和基石。紅細胞作為血循環(huán)中數(shù)量巨大的天然免疫細胞類,紅細胞CR1在補體系統(tǒng)及其他天然免疫物質(zhì)協(xié)同下,對血循環(huán)中的癌細胞發(fā)生快速天然免疫反應(yīng)。在外周血中,抗原及腫瘤細胞遇到紅細胞的機會比白細胞大1000倍,結(jié)合有抗體或補體的腫瘤細胞可通過C3b受體黏附到紅細胞上,易被吞噬細胞捕獲、吞噬。在抗馬立克病的免疫機制中,紅細胞免疫應(yīng)具有不可低估的免疫功能。馮來坤等研究,在雞7日齡時,腹腔接種馬立克病病毒京-1株,在攻毒后不同時期采血測定雞的紅細胞免疫功能狀態(tài)。發(fā)現(xiàn)隨著疾病的不斷發(fā)展,紅細胞CR1花環(huán)率不斷下降,與此同時,紅細胞IC花環(huán)率不斷升高,直至明顯高于紅細胞CR1花環(huán)率,而后又顯著下降。這可能是因為隨著病情的不斷加重,體內(nèi)循環(huán)免疫復(fù)合物不斷增加,占據(jù)了較多的紅細胞C3b受體所致;而在疾病后期,紅細胞花環(huán)率均較低,可能是紅細胞C3b受體受到破壞的結(jié)果本試驗中,1日齡雛雞腹腔注射馬立克京-1株血毒,26日齡時經(jīng)剖檢,性腺、肝、腎稍腫大,且分離的肝組織細胞經(jīng)涂片染色鏡檢,已發(fā)現(xiàn)有淋巴細胞,34、35日齡時淋巴細胞數(shù)明顯增多,而且與不加血漿時紅細胞黏附結(jié)合率呈正相關(guān),這也正印證了攻毒雞出現(xiàn)癥狀的時間。同時,陰性對照組中加入分離的正常肝組織細胞,其紅細胞免疫黏附率僅在2.00%以下。另外,紅細胞免疫黏附活性受機體調(diào)節(jié)存在動態(tài)變化,在發(fā)病后期,攻毒組紅細胞免疫黏附活性接近對照組,說明其免疫功能有所增強,但仍抵擋不住