抗焦慮化合物的合成

抗焦慮化合物的合成

焦慮是焦慮和復發(fā)焦慮的主要癥狀，嚴重影響患者的身心健康和日常生活，伴有患者精神障礙、無法充分發(fā)揮其正常潛力、工作效率低下等嚴重結果。此外,焦慮癥后期常伴發(fā)抑郁癥狀。據(jù)統(tǒng)計,目前焦慮癥患者占世界人口的8%~13%,但目前臨床上仍缺乏理想的抗焦慮藥物。傳統(tǒng)藥物如地西泮、阿吡坦等在臨床上被廣泛用于治療焦慮和抑郁,但常伴有鎮(zhèn)靜、催眠、健忘、肌肉松弛等不良反應,并易產生依賴性和成癮性研究發(fā)現(xiàn),一種相對分子質量為18000的轉運蛋白(translocatorprotein,TSPO)配體在治療焦慮癥中具有潛在價值。TSPO與相應配體結合可刺激神經甾體的生物合成,所生成的神經甾體作用于γ-氨基丁酸A(GABA-A)受體進而產生抗焦慮作用,卻不產生其他副作用目前已上市的抗焦慮藥物阿吡坦和唑吡坦均為2-芳基咪唑并[1,2-a]吡啶-3-乙酰胺類化合物。本文根據(jù)文獻調研及構效關系分析1實驗部分目標化合物的合成可參照唑吡坦的工藝合成方法1.1材料和機器1.1.1層析硅膠板和柱層析硅膠所用溶劑與試劑未經特殊說明均為市售分析純,北京化學試劑公司、ACROS試劑公司和ALPHA試劑公司;HF型高效薄層層析硅膠板和柱層析硅膠,煙臺信德化學有限公司;ICR小鼠(20~24g,雄性),Wister大鼠(220~260g,雌雄不限)由軍事醫(yī)學科學院實驗動物中心提供。1.1.2儀器、試藥和儀器熔點由RY-1型熔點測定儀測定,溫度計未經校正;核磁共振譜由JNM-ECA-400超導核磁共振儀測定,TMS為內標;質譜由ABI公司API-3000串聯(lián)四極桿型液相色譜質譜聯(lián)用儀及德國Bruker公司Apex-Qe-FTMS(ESI/MALDI)高分辨質譜分析儀測定。20PR-5高速冷凍離心機、SCP85H超速冷凍離心機,Hitachi公司;ULTRA-TURRAXT25勻漿器及UV-250紫外分光光度計,日本島津公司;LS6500型液閃計數(shù)儀,Beckman公司;49型玻璃纖維濾膜,上海羽光凈化材料聯(lián)合公司;多頭抽濾器,自備。1.2吡啶4-1,2-a]吡啶-2-2-甲基咪唑并[1,2-a]吡啶2-2-甲基蒂亞基-2-4-甲基蒂唑2-乙酸乙酯2-甲基蒂亞基-2-甲基蒂唑2-2-4-甲基蒂唑2-2-2-4-甲基蒂亞甲基-2-4-甲基蒂亞甲基-2-4-甲基蒂亞甲基-2--2-4-甲基蒂亞甲基-2-4-甲基蒂亞甲基-2-4-甲基蒂亞甲基-2-2-2-4-甲基蒂亞甲基-2-取代吡啶2-2-2-4-甲基蒂亞甲基-2--2--2-取代吡啶2-2-2-4-甲基蒂亞甲基-2--2--2-4-甲基蒂亞甲基-2--吡啶2-2-2-4-甲基蒂亞甲基-2--2-2-2-2-2-2-2-2-2-2-2-2-甲基蒂唑2-2-2-4-甲基蒂唑2-2-2-2-4-甲基蒂唑2-2-2-2-4-2-2-4-甲基咪唑2-2-2-4-2-2-4-甲基咪唑2-2-2-4-2-2-4-甲基咪唑2-2-2-4-甲基咪唑2-2-2-4-2-2-4-甲基咪唑2-2-2-4-2-2-4-甲基咪唑2-2-2-2-甲基咪唑2-2-2-2-甲基咪唑2-2-2-2-甲基咪唑2-2-2-2-甲基咪唑2-2-2-2-甲基咪唑2-2-2-1-(2-(4-甲氧基苯基)-7-甲基咪唑并[1,2-a]-3-吡啶基)-N,N-二甲基甲胺(Ⅲ2-(4-甲氧基苯基)-7-甲基咪唑并[1,2-a]-吡啶-3-乙酸(Ⅳ將上述Ⅳ化合物Ⅴ2-(4-氯苯基)-7-甲基咪唑并[1,2-a]-吡啶-3-乙酸(Ⅴ2-(4-甲基苯基)-7-甲基咪唑并[1,2-a]吡啶3-乙酸(Ⅴ2-(3,4-二氯苯乙酮)-7-甲基咪唑并[1,2-a]吡啶-3-乙酸(Ⅴ2-(4-甲基苯基)-6-甲基咪唑并[1,2-a]吡啶3-乙酸(Ⅴ2-(4-氯苯基)-6-甲基咪唑并[1,2-a]吡啶3-乙酸(Ⅴ化合物Ⅵ1.3吡啶-3-乙酰胺鹽酸鹽n-乙基-n-3-吡啶甲基-2-4-甲基苯磺酸-2-4-甲基苯磺酸-2-4-甲基苯磺酸-2-4-甲基苯磺酸-2-4-甲基苯磺酸-2-4-甲基苯磺酸-2-4-甲基苯磺酸-2-4-甲基苯磺酸-2-4-甲基苯磺酸-2-4-甲基苯磺酸-2-4-吡啶甲基-2-4-吡啶甲基-2-4-吡啶甲基-2-4-吡啶甲基-2-4-吡啶甲基-2-4-吡啶甲基-2-4-吡啶甲基-2-2-4-吡啶甲基-2-2-4-吡啶甲基-2-2-4-吡啶甲基-2-2-4-吡啶甲基-2-2-4-吡啶甲基-2-2-4-吡啶甲基-2-2-4-吡啶甲基-2-2-4-吡啶甲基-2-2-2-2-2-2-吡啶-2-2-2-2-2-4-吡啶甲基-2-2-2-2-2-2-2-吡啶-2-2-2-2-2-2-吡啶-2-2-2-2-2-吡啶-2-2-2-2-2-2-吡啶-2-2-2-2-吡啶-2-2-2-2-2-2-吡啶-2-2-2-2-2-2-吡啶-2-2-2-2-2-2-吡啶-2-2-2-2-吡啶-2-2-2-2-2-2-吡啶-2-2-2-2-2-2-2-2-2-2-2-2-2-吡啶-2-2-2-2-吡啶-2-2-2-2-2-2-吡啶-2-2-2-2-2-2合成通法:向Ⅴ化合物ⅠN-乙基-N-(2-吡啶甲基)-2-(4-氯苯基)-7-甲基咪唑并[1,2-a]吡啶-3-乙酰胺鹽酸鹽(ⅠN-乙基-N-(3-吡啶甲基)-2-(4-氯苯基)-7-甲基咪唑并[1,2-a]吡啶-3-乙酰胺鹽酸鹽(ⅠN-乙基-N-(4-吡啶甲基)-2-(4-氯苯基)-7-甲基咪唑并[1,2-a]吡啶-3-乙酰胺鹽酸鹽(ⅠN-(2-甲氧基乙基)-N-(2-吡啶甲基)-2-(4-氯苯基)-7-甲基咪唑并[1,2-a]吡啶-3-乙酰胺鹽酸鹽(ⅠN-(2-甲氧基乙基)-N-(3-吡啶甲基)-2-(4-氯苯基)-7-甲基咪唑并[1,2-a]吡啶-3-乙酰胺鹽酸鹽(ⅠN-芐基-N-乙基-2-(3,4-二氯苯基)-7-甲基咪唑并[1,2-a]吡啶-3-乙酰胺(ⅠN-乙基-N-(2-吡啶甲基)-2-(3,4-二氯苯基)-7-甲基咪唑并[1,2-a]吡啶-3-乙酰胺鹽酸鹽(ⅠN-乙基-N-(3-吡啶甲基)-2-(3,4-二氯苯基)-7-甲基咪唑并[1,2-a]吡啶-3-乙酰胺鹽酸鹽(ⅠN-乙基-N-(4-吡啶甲基)-2-(3,4-二氯苯基)-7-甲基咪唑并[1,2-a]吡啶-3-乙酰胺鹽酸鹽(ⅠN-(2-甲氧基乙基)-N-(2-吡啶甲基)-2-(3,4-二氯苯基)-7-甲基咪唑并[1,2-a]吡啶-3-乙酰胺鹽酸鹽(ⅠN-(2-甲氧基乙基)-N-(3-吡啶甲基)-2-(3,4-二氯苯基)-7-甲基咪唑并[1,2-a]吡啶-3-乙酰胺鹽酸鹽(ⅠN-芐基-N-乙基-2-(4-甲基苯基)-7-甲基咪唑并[1,2-a]吡啶-3-乙酰胺(ⅠHNMR(CDClN-乙基-N-(2-吡啶甲基)-2-(4-甲基苯基)-7-甲基咪唑并[1,2-a]吡啶-3-乙酰胺鹽酸鹽(ⅠN-乙基-N-(3-吡啶甲基)-2-(4-甲基苯基)-7-甲基咪唑并[1,2-a]吡啶-3-乙酰胺·鹽酸鹽(ⅠN-乙基-N-(4-吡啶甲基)-2-(4-甲基苯基)-7-甲基咪唑并[1,2-a]吡啶-3-乙酰胺鹽酸鹽(ⅠN-(2-甲氧基乙基)-N-(2-吡啶甲基)-2-(4-甲基苯基)-7-甲基咪唑并[1,2-a]吡啶-3-乙酰胺鹽酸鹽(ⅠN-(2-甲氧基乙基)-N-(3-吡啶甲基)-2-(4-甲基苯基)-7-甲基咪唑并[1,2-a]吡啶-3-乙酰胺鹽酸鹽(ⅠN-芐基-N-乙基-2-(4-甲氧基苯基)-7-甲基咪唑并[1,2-a]吡啶-3-乙酰胺(ⅠN-乙基-N-(2-吡啶甲基)-2-(4-甲氧基苯基)-7-甲基咪唑并[1,2-a]吡啶-3-乙酰胺鹽酸鹽(ⅠN-乙基-N-(3-吡啶甲基)-2-(4-甲氧基苯基)-7-甲基咪唑并[1,2-a]吡啶-3-乙酰胺鹽酸鹽(ⅠN-乙基-N-(4-吡啶甲基)-2-(4-甲氧基苯基)-7-甲基咪唑并[1,2-a]吡啶-3-乙酰胺鹽酸鹽(ⅠN-(2-甲氧基乙基)-N-(2-吡啶甲基)-2-(4-甲氧基苯基)-7-甲基咪唑并[1,2-a]吡啶-3-乙酰胺鹽酸鹽(ⅠN-(2-甲氧基乙基)-N-(3-吡啶甲基)-2-(4-甲氧基苯基)-7-甲基咪唑并[1,2-a]吡啶-3-乙酰胺鹽酸鹽(ⅠN-(2-甲氧基乙基)-N-(2-嗎啉基乙基)-2-(4-甲基苯基)-7-甲基咪唑并[1,2-a]吡啶-3-乙酰胺鹽酸鹽(ⅠN-(2-甲氧基乙基)-N-(2-嗎啉基乙基)-2-(4-甲基苯基)-6-甲基咪唑并[1,2-a]吡啶-3-乙酰胺鹽酸鹽(ⅠN-乙基-N-(4-吡啶甲基)-2-(4-甲基苯基)-6-甲基咪唑并[1,2-a]吡啶-3-乙酰胺鹽酸鹽(ⅠN-乙基-N-(4-吡啶甲基)-2-(4-氯苯基)-6-甲基咪唑并[1,2-a]吡啶-3-乙酰胺鹽酸鹽(Ⅰ1.4生物活性評價對合成的28個目標化合物進行體外BZDR競爭結合試驗。從大鼠心臟中分離純化BZDR作為藥物篩選靶點,通過與放射性配體(1.4.1體外bzdr競爭結合實驗大鼠心臟和腦皮質BZDR膜蛋白的制備Wister大鼠斷頭處死,迅速分離出心臟和腦皮質,稱重后加入10倍體積的Tris-HCl緩沖液(由50mmol/LTris-HCl、5mmol/LMgClBZDR蛋白質含量的測定試劑甲制備:配制含4%碳酸鈉及0.2%酒石酸鈉的0.2mol/LNaOH溶液以及4%硫酸銅水溶液,以體積比100∶1混合均勻即可,配制后1d內使用。試劑乙:Folin酚試劑,終濃度為1mol/L。取樣品100μl,內含BSA5~100μg(作標準曲線用)或待測樣品,不足100μl者用雙蒸水補足,加入試劑甲100μl,混合均勻后室溫放置10min,再加試劑乙20μl,立即混勻,置50℃水浴中孵育15min,取200μl用微量多道掃描光密度計檢測光密度值以確定蛋白含量,檢測波長690nm,光程0.6cm。100μl雙蒸水為空白對照。藥物對受體(鼠心臟BZDR)與放射性配體(3H-PK11195)結合競爭實驗將試管置于30℃反應器中,所有管加入20μg受體蛋白。測試管加入20μl一定濃度的藥物;非特異結合管加入20μl非標配體(PK11195,終濃度為0.1mmol/L),并預先反應30min。然后所有管加入25μl標記配體(I(%)=(總結合CPM數(shù)-加藥管CPM數(shù))/(總結合CPM數(shù)-非特異CPM數(shù))×100%,CPM為射線每分鐘計數(shù)1.4.2大鼠跳躍和迷宮的實驗ICR小鼠分別灌胃給予Ⅰ2結果與討論2.1酰胺n-取代基的合成選擇以2-芳基咪唑并[1,2-a]吡啶-3-乙酰胺類作為先導結構,在保持對TSPO親和力和選擇性的同時,改善其水溶性,以期得到選擇性好、親和性強、生物利用度高的候選藥物。在保留芳環(huán)母體和苯環(huán)的取代基最佳組合的同時,著重對酰胺N-取代基進行改造。首先,用芐基或2-、3-或4-吡啶甲基代替一側的直鏈烷基,或以適當連接子如CH2.2-芳基咪唑并[1,2-a]吡啶環(huán)合的反應物2-芳基咪唑并[1,2-a]吡啶乙酰胺類的合成方法主要有兩類,一是先將α-鹵代-4-苯基-4-氧化丁酸與仲胺反應生成酰胺,再與2-氨基吡啶環(huán)合;或α-鹵代-4-苯基-4-氧化丁酸活潑酯與2-氨基吡啶環(huán)合,再和仲胺反應酰胺。二是先合成2-芳基咪唑并[1,2-a]吡啶母環(huán),再接3-位乙酸,最后與相應的仲胺反應。文獻多采用第1條路線,報道的產率不一。本研究通過預實驗發(fā)現(xiàn),這條路線雖看似簡便,但產率偏低,特別是環(huán)合一步的產率只有5%~12%,且不利于進行多樣性導向的合成。最近文獻報道的唑吡坦的工藝合成路線反應條件溫和、操作簡便、產率高,非常適用于關鍵構建單元,即取代的2-苯基咪唑并[1,2-a]吡啶-3-乙酸的合成。因此,本研究參照唑吡坦的工藝合成路線,合成了28個新型化合物,所有化合物的化學結構經2.3手性中心—化合物的結構解析HNMR顯示這類化合物為混合物,而ESI-MS顯示實際的分子量與理論值一致。隨機選取化合物Ⅰ出現(xiàn)2個不定量的非對映異構體是此類目標化合物的共有特征。究其原因可能是由于3-位N,N-不對稱二取代的乙酰胺的N-芳甲基與2-位苯基間存在較大的相互作用和空間效應,導致N-取代基自由翻轉及2-位苯環(huán)自由旋轉受阻,最