細(xì)胞工程6-10章答案

第六章原生質(zhì)體培養(yǎng)與誘變一、名詞解釋原生質(zhì)體:除去植物細(xì)胞壁的裸露細(xì)胞，稱為原生質(zhì)體。二、問(wèn)答題原生質(zhì)體具有哪些特點(diǎn)？答：（1）無(wú)細(xì)胞壁障礙，能攝取DNA、質(zhì)粒、病毒、細(xì)菌、細(xì)胞器等外源物質(zhì),是植物細(xì)胞工程進(jìn)行遺傳操作、基因轉(zhuǎn)移的良好材料。（2） 具有全能性，可再生細(xì)胞壁并再生成完整植株；（3） 原生質(zhì)體適合進(jìn)行融合形成雜種細(xì)胞。能克服不同種細(xì)胞的不親和障礙，培育新品種。試述原生質(zhì)體的分離純化的方法。答：分離方法：機(jī)械分離法，酶解分離法純化方法：A、過(guò)濾-離心法采用40?100Mm的網(wǎng)篩過(guò)濾，在適當(dāng)溶劑內(nèi)低速離心使原生質(zhì)體沉于離心管底部，反復(fù)3?4次。B、 漂浮法具有一定滲透壓（25%蔗糖）的溶液中漂浮，然后用吸管收集。C、 沉降法和漂浮法結(jié)合將原生質(zhì)體酶解液低速離心，將沉降得到的原生質(zhì)體重新懸浮于純化液（含21%蔗糖）中，吸收表面的原生質(zhì)體，重新懸浮，洗滌，重復(fù)兩次以上。4.試述原生質(zhì)體鑒定與活力測(cè)定方法。答：原生質(zhì)體鑒定：低滲爆破法：原生質(zhì)體低滲溶液顯微鏡觀察：無(wú)形、有形熒光染色法原生質(zhì)體的活力測(cè)定：1）染色法：?用0.1%酚藏花紅染料法一一無(wú)色是活的,紅色是死的。?伊文思蘭染色法 無(wú)色是活的；藍(lán)色是死的。?用熒光素雙醋酸酯（FDA）染色法——在熒光顯微鏡下觀察到帶有熒光的是有活力的原生質(zhì)體。2）胞質(zhì)環(huán)流法：顯微鏡下觀察：有胞質(zhì)環(huán)流的是有活力的。3）滲透壓變化：放入低滲透壓的溶液中，體積會(huì)膨脹。放入高滲透壓的溶液中體積會(huì)縮小，這樣的是有活力的原生質(zhì)體，體積不變的死亡的。4）氧電極法：有活力的在光照下放出氧氣，在無(wú)光照下呼吸而耗氧。原生質(zhì)體再生為完整植株的過(guò)程。細(xì)胞壁再生：-體積膨大，葉綠體重新排列，新的細(xì)胞壁開(kāi)始合成，細(xì)胞由球形變成橢圓形°細(xì)胞分裂形成細(xì)胞團(tuán)：-一般在培養(yǎng)2-3天后細(xì)胞質(zhì)增加，細(xì)胞器增殖，DNA、蛋白質(zhì)等合成增加，細(xì)胞分裂，形成小的細(xì)胞團(tuán)，發(fā)育成愈傷組織或胚狀體。器官形成植株再生：-從愈傷組織誘導(dǎo)發(fā)生答-胚狀體發(fā)育再結(jié)合書(shū)答。4，如何獲得原生體，并通過(guò)原生質(zhì)體培養(yǎng)獲得完整的再生植株？3..試述原生質(zhì)體變異的途徑。答：自發(fā)突變?cè)颍喝旧w結(jié)構(gòu)變異或數(shù)目變異基因突變?cè)|(zhì)體誘變結(jié)合書(shū)第七章細(xì)胞融合與體細(xì)胞雜交一、名詞解釋細(xì)胞融合：又稱細(xì)胞雜交（cellhybridizaion）：用人工的方法使兩個(gè)或兩個(gè)以上的細(xì)胞融合成一個(gè)細(xì)胞的技術(shù)。體細(xì)胞雜交：將不同來(lái)源的體細(xì)胞融合并使之分化再生、形成新品種的一種技術(shù)。同核體：基因型相同的細(xì)胞融合成的融合細(xì)胞。異核體：來(lái)自不同基因型的融合細(xì)胞。對(duì)稱融合：即兩個(gè)完整的細(xì)胞間的融合。不對(duì)稱融合：利用物理或化學(xué)方法使某親本的核或細(xì)胞質(zhì)失活后再與另外一個(gè)完整的細(xì)胞進(jìn)行融合。合核細(xì)胞：含有多個(gè)核的異核細(xì)胞合并后形成的單核細(xì)胞。嵌合細(xì)胞：發(fā)生了細(xì)胞質(zhì)融合的融合細(xì)胞。嵌合植株二、問(wèn)答題簡(jiǎn)述細(xì)胞融合的步驟。（生物法、物理法）答：細(xì)胞融合的步驟：①兩原生質(zhì)體或細(xì)胞互相靠近；質(zhì)膜融合形成細(xì)胞橋；③胞質(zhì)滲透；④細(xì)胞核融合。試述細(xì)胞融合的方法及各自的特點(diǎn)。答：①生物法 特點(diǎn)：要提前大量培養(yǎng)病毒，滅活后才能作為融合劑使用，操作繁瑣，滅活不充分的話，病毒還可能感染操作者與親本細(xì)胞。②化學(xué)法特點(diǎn)：融合成本低，不需特殊設(shè)備，產(chǎn)生的異核率較高，融合過(guò)程不受物種限制。但融合過(guò)程繁瑣，PEG可能對(duì)細(xì)胞有毒害。物理法——電融合法特點(diǎn)：融合效率高、操作簡(jiǎn)便、易于控制、重復(fù)性強(qiáng)、對(duì)細(xì)胞傷害性小。試述化學(xué)法進(jìn)行細(xì)胞融合常采用的誘導(dǎo)劑。答：NaN03誘導(dǎo)融合 高pH值的高Ca2+誘導(dǎo)融合聚乙二醇（PEG）誘導(dǎo)融合 高pH值、高Ca2+的PEG誘導(dǎo)融合試述PEG促使細(xì)胞融合的可能機(jī)制。答：PEG的作用機(jī)理：由于PEG分子具有輕微的負(fù)極性，故可以與具有正極性基團(tuán)的水、蛋白質(zhì)和碳水化合物等形成H鍵，從而在在質(zhì)膜之間形成分子橋，其結(jié)果是使細(xì)胞質(zhì)膜發(fā)生粘連進(jìn)而促使質(zhì)膜的融合；另外，PEG能增加類脂膜的流動(dòng)性，也使細(xì)胞的核、細(xì)胞器發(fā)生融合成為可能。試述體細(xì)胞雜交的意義（作用）及過(guò)程。答：①可以避開(kāi)生殖細(xì)胞的受精過(guò)程，從而在親緣關(guān)系較遠(yuǎn)的物種間實(shí)現(xiàn)基因轉(zhuǎn)移，創(chuàng)造出自然界中沒(méi)有的新物種。②創(chuàng)造細(xì)胞質(zhì)雜種。在體細(xì)胞雜交中雙親的細(xì)胞質(zhì)都有一定的貢獻(xiàn)。有可能通過(guò)細(xì)胞融合獲得細(xì)胞核、葉綠體、線粒體基因組的不同組合。體細(xì)胞雜交的過(guò)程（步驟）：?親本選擇；?原生質(zhì)體制備；原生質(zhì)體融合；融合細(xì)胞（雜種細(xì)胞）篩選；融合細(xì)胞（雜種細(xì)胞）的培養(yǎng)由愈傷組織再生植株；雜種植物鑒定。為什么體細(xì)胞雜交（融合）后要進(jìn)行篩選？如何篩選雜種細(xì)胞？答：雜種細(xì)胞選擇的方法互補(bǔ)選擇法（遺傳和生理生化特性）：①抗藥性篩選法：利用細(xì)胞對(duì)藥物敏感性差異篩選融合細(xì)胞。營(yíng)養(yǎng)互補(bǔ)篩選法：細(xì)胞在缺乏一種或幾種營(yíng)養(yǎng)成分時(shí)不能生長(zhǎng)繁殖，即屬于營(yíng)養(yǎng)缺陷型細(xì)胞。可見(jiàn)標(biāo)記法：物理特性篩選法：利用細(xì)胞在形態(tài)、大小、顏色上的差別可以在倒置顯微鏡下用微管將融合細(xì)胞吸取挑選出來(lái)，也可以采用離心方法分離融合細(xì)胞。熒光標(biāo)記法：采用不同的熒光染料分別標(biāo)記兩個(gè)親本細(xì)胞，這樣融合細(xì)胞內(nèi)存在兩種熒光標(biāo)記，可以在熒光顯微鏡下挑選分離或用流式細(xì)胞儀分離。7．如何鑒定雜種植物。答：形態(tài)學(xué)鑒定：根據(jù)莖、葉、花等組織的形態(tài)、顏色來(lái)鑒別雜種。兩親本的親源關(guān)系較遠(yuǎn)時(shí)，雜種植物的形態(tài)傾向于親本之一，但存在差異。細(xì)胞學(xué)鑒定：原生質(zhì)體融合的親本材料一般為二倍體，雜種細(xì)胞的染色體應(yīng)該為雙二倍體。如果親本的親源關(guān)系較遠(yuǎn)，染色體差異會(huì)較大；同時(shí)，雜種細(xì)胞中一親本的染色體可能會(huì)受到另外一親本的排斥，可能會(huì)產(chǎn)生大量非整倍體。因此可以從雜種植物染色體的形態(tài)、大小和數(shù)目上鑒定是否是雜種植物。同工酶（isoenzyme）鑒定：原理：根據(jù)親本和雜種植物的同工酶譜的差異來(lái)鑒別雜種植物。雜種植物的同工酶譜是雙親本酶譜的總和，表現(xiàn)為條帶增多、酶帶顏色加深、寬度加大，有時(shí)還出現(xiàn)兩親本都不具有的新譜帶或者丟失部分親本酶帶。DNA分子標(biāo)記鑒定DNA分子標(biāo)記鑒定：是在分子水平對(duì)親本和雜種植物遺傳一、名詞解釋染色體工程:是人們按照一定的設(shè)計(jì)，有計(jì)劃地消減、添加或代換同種或異種染色體從而達(dá)到定向改變遺傳性狀和選育新品種的一種技術(shù)。多倍體單倍體同源多倍體：染色體組來(lái)源相同的多倍體多倍體異源多倍體：染色體組來(lái)源不同的多倍體二、問(wèn)答題試述多倍體植物的特點(diǎn)。答：形態(tài)上的巨大性?育性差，結(jié)實(shí)率低一同源多倍體?抗逆性強(qiáng)：抗病、抗旱、耐寒 如三倍體甜菜比較耐寒?營(yíng)養(yǎng)成分高：糖類、蛋白質(zhì)及其它產(chǎn)物的含量也有所提高，如四倍體番茄的維生素C的含量比二倍體的品種幾乎增加了一倍。三倍體甜菜含糖量高。試述多倍體培育的方法。自然誘導(dǎo)答：途徑有性雜交答：途徑有性雜交物理誘導(dǎo)法：溫度驟變，機(jī)械創(chuàng)傷，電離和非電離輻射，離心力等化學(xué)誘導(dǎo)法：化學(xué)藥劑：秋水仙素；富民隆；吲哚乙酸用秋水仙素培育多倍體植物時(shí)應(yīng)注意哪些問(wèn)題。答：①幼苗生長(zhǎng)點(diǎn)的處理愈早，獲得四倍性細(xì)胞的數(shù)目就愈多，而處理時(shí)間晚,得到的多是嵌合體。植物組織經(jīng)秋水仙素處理后,生長(zhǎng)上會(huì)受到一定影響,因而處理后應(yīng)加強(qiáng)植株的培育和管理。誘導(dǎo)多倍體時(shí),處理的數(shù)量宜多些,以便從中選擇有利變異個(gè)體。處理后要用清水沖洗,避免藥效殘留。秋水仙素的藥效可保持很久,且具較大毒性,尤其是干燥的粉劑,因而在配制和使用時(shí),要注意安全,不能讓其粉末在空氣中飛揚(yáng),以免誤入呼吸道,也不可觸及皮膚,其水溶液用棕色瓶盛裝，放置于黑暗處。如何鑒定多倍體植物?答：間接法核體積測(cè)量、形態(tài)學(xué)檢查直接法 染色體計(jì)數(shù)、DNA含量測(cè)定外形鑒定多倍體幼根尖端膨大，胚軸肥厚。幼苗生長(zhǎng)緩慢，拔節(jié)后生長(zhǎng)旺盛。葉片寬大，色深綠，葉緣有皺褶?；ù蠖o湊，籽粒增大，千粒重增加，氣孔和花粉粒增大，莖葉產(chǎn)量高。核體積測(cè)量：二倍體/三倍體核體積之比為1:1.5，二倍體與四倍體的核體積之比為1:1.74染色體計(jì)數(shù)：是鑒定多倍性的一個(gè)準(zhǔn)確的直接方法。觀察根尖細(xì)胞或花粉母細(xì)胞的染色體數(shù)DNA含量測(cè)定：流式細(xì)胞儀。試述單倍體植物的特點(diǎn)。試述培育單倍體植物的方法。答：花藥培養(yǎng)花粉培養(yǎng)——細(xì)胞培養(yǎng)試述鑒定單倍體植物的方法。從單倍體如何獲得純合二倍體植物。第九章植物離體受精一、名詞解釋植物離體受精二、問(wèn)答題植物離體受精培育植物的意義。離體傳粉的步驟（過(guò)程）。試述精卵細(xì)胞的