瑪咖行走菜對雌激素大鼠體脂、性激素、骨代謝的影響

瑪咖行走菜對雌激素大鼠體脂、性激素、骨代謝的影響

1材料和方法1.1藥物、試劑與儀器maca樣品由農(nóng)業(yè)部優(yōu)質(zhì)農(nóng)產(chǎn)品開發(fā)中心提供。干燥后，它被粉碎成粉末，顏色為淺黃色，味道略帶甜和苦。實驗前將Maca用蒸餾水制成懸濁液,備用。主要藥物己烯雌酚、青霉素購自北京宣武醫(yī)院。生化指標(biāo)總膽固醇(TC)、甘油三酯(TG)、高密度脂蛋白膽固醇(HDL)、低密度脂蛋白膽固醇(LDL)、等試劑盒購自中生北控生物科技股份有限公司;17β-雌二醇(17β-E2)、卵泡刺激素(FSH)、孕酮(P)、睪酮(T)、骨鈣素(BGP)等放射免疫測試盒購自北京福瑞生物工程公司;血堿性磷酸酶(ALP)購自BIO-MED公司。其它實驗室常規(guī)試劑均為分析純。1.2模型、分組、給藥55只雌性SD大鼠,體重范圍在180~200g之間,由北京維通利華實驗動物技術(shù)有限公司提供。適應(yīng)性飼養(yǎng)3天后,大鼠以45mgkgbw戊巴比妥鈉(0.5%)腹腔麻醉,進(jìn)行雙側(cè)卵巢切除術(shù),創(chuàng)面縫合后于創(chuàng)口處注入0.2~0.3ml青霉素,單籠飼養(yǎng)進(jìn)入手術(shù)恢復(fù)期。8天后,待手術(shù)創(chuàng)口完全愈合,根據(jù)體重將大鼠隨機(jī)分為5組:模型組、雌激素組、Maca低、中、高劑量組,每組11只;另取15只大鼠僅切除卵巢周圍脂肪,保留卵巢,作為假手術(shù)組。實驗期間,雌激素組每天給予己烯雌酚(30μgkgbw);Maca低、中、高劑量組每天分別灌予MACA懸濁液0.3、0.6和1.8gkgbw,假手術(shù)組和模型組每天灌與蒸餾水作為對照。1.3大鼠骨代謝相關(guān)指標(biāo)檢測大鼠連續(xù)喂養(yǎng)7周,實驗期間觀察大鼠生長狀況,每3天稱體重一次,于第2、4、7周抽取血樣測定血脂;實驗結(jié)束時,大鼠經(jīng)乙醚麻醉,腹主動脈取血,剝離子宮、肝、左側(cè)腎及腎上腺等臟器稱重;分離股骨,刮去肌肉和軟組織組織。主要測定指標(biāo)包括血脂相關(guān)指標(biāo);骨及骨代謝相關(guān)指標(biāo),包括股骨干濕重量和長度、骨礦含量(BMC)、骨密度(BMD)、BGP、ALP,其中BMD采用標(biāo)準(zhǔn)骨模型校準(zhǔn)單光子骨密度儀測定;以及性激素指標(biāo)(17β-E2、FSH、P、T)。1.4數(shù)據(jù)計數(shù)各項指標(biāo)結(jié)果以表示。組間差別采用方差分析進(jìn)行統(tǒng)計學(xué)檢驗。以P<0.05作為檢驗顯著性水準(zhǔn),所有統(tǒng)計學(xué)分析采用SPSS軟件包。2結(jié)果2.1大鼠體重、內(nèi)臟重量變化的比較圖1顯示,大鼠切除卵巢后體重增高趨勢明顯,在手術(shù)恢復(fù)期末即表現(xiàn)出體重高于假手術(shù)大鼠的現(xiàn)象;在隨后的7周實驗中,模型組大鼠體重增長明顯高于假手術(shù)組(P<0.05)。雌激素可以較好地控制大鼠體重的過快增長,使生長曲線與假手術(shù)組曲線趨勢一致(P>0.05),說明卵巢切除大鼠體重變化與激素水平密切相關(guān)。相比之下高劑量MACA大鼠體重增長明顯低于模型組(P<0.05),提示MACA有助于減緩卵巢切除后大鼠體征變化。同時,卵巢切除大鼠內(nèi)臟重量也發(fā)生了顯著變化,主要表現(xiàn)為子宮、腎上腺重量明顯降低,模型組和假手術(shù)組相比,P<0.05。雌激素有助于緩解上述改變,部分維持子宮和腎上腺重量(和模型組相比,P<0.05),但Maca各劑量組大鼠臟器變化未見與模型組有明顯差異(P>0.05)(表1)。2.2各組大鼠血脂、血脂水平的比較經(jīng)卵巢切除手術(shù)后,大鼠出現(xiàn)一定程度的血脂改變,模型組大鼠TC水平明顯升高(和假手術(shù)組相比,P<0.05),LDL-C略有上升趨勢但未見統(tǒng)計學(xué)差異(P>0.05)。雌激素組血脂水平與假手術(shù)組接近,但與模型組相比未見統(tǒng)計學(xué)顯著差異(P>0.05)。和模型組相比,給與Maca的大鼠隨劑量增高呈現(xiàn)TG、LDL-C、HDL-C水平下降趨勢,其中高劑量組TG、LDL-C與模型組有統(tǒng)計學(xué)顯著意義(P<0.05)。Maca各劑量組血脂水平與雌激素組無統(tǒng)計學(xué)顯著差異(P>0.05)(表2)。2.3模型大鼠骨寬及生化指標(biāo)在本實驗設(shè)定的實驗期內(nèi),模型組大鼠未觀察到明顯的骨質(zhì)變化,但由于體重增長過快,導(dǎo)致骨體重比降低,即同樣重量的骨骼需承受更重的體重。和模型組及假手術(shù)組相比,給與雌激素的大鼠骨寬呈降低趨勢,干垢端骨寬明顯低于模型組(P<0.05);相比之下,Maca低、中劑量組骨寬高于雌激素組(P<0.05)(表3)。分析骨代謝相關(guān)的生化指標(biāo)發(fā)現(xiàn),大鼠進(jìn)行卵巢切除手術(shù)后,模型組ALP水平顯著升高,而相比之下其他各組與假手術(shù)組水平相當(dāng)。另外,隨Maca用量增高,BGP呈現(xiàn)逐漸升高趨勢,以中、高劑量組BGP水平最高,Maca劑量與BGP水平呈一定相關(guān)性(P<0.05)(圖2)。2.3maca對大鼠血清激素水平的影響卵巢切除手術(shù)使大鼠17β-雌二醇(17β-E2)、孕酮(P)、睪酮(T)水平明顯降低(和假手術(shù)組相比,P<0.05),Maca的三個劑量組大鼠未觀察到性激素水平的明顯變化(表3)。3maca和其他營養(yǎng)成分分析表明,Maca為富碳水化合物食物,其組成以不易被機(jī)體消化吸收的不溶性膳食纖維和抗性淀粉為主。由于膳食纖維可以促進(jìn)胃腸蠕動,降低血糖吸收和TC、TG、LDL-C水平,由此可以解釋Maca減少去卵巢大鼠體重過分增長以及改善血脂水平的作用。除此之外,分析化學(xué)表明Maca還含有多種生物活性物質(zhì),如生物堿、異硫氰酸酯、芥子油苷、植物固醇、兒茶酚等,而這些生物活性成分可不同程度地通過抗氧化等機(jī)制參與到脂質(zhì)代謝調(diào)節(jié)、以及改善與性激素缺乏有關(guān)的不良反應(yīng)?，斂┖同斂０肥荕aca特有的物質(zhì),包括分子結(jié)構(gòu)為N-卞基辛酰胺、N-卞基-16-羥基-9氧基-10E,12E,14E-十八三烯酰胺、N-卞基-16-羥基-9,16-二氧基-10E,12E,14E-十八三烯酰胺的三種物質(zhì)及其同系物,是最有可能提高性功能的物質(zhì)。一些研究指出,Maca及其提取物并不影響17β-雌二醇分泌,但可增加正常3周齡雌性小鼠P水平和雄性小鼠T水平;使3月齡大鼠產(chǎn)仔數(shù)增多。本研究中對于卵巢切除大鼠Maca也未表現(xiàn)出類雌激素樣作用,使性激素水平低下的大鼠雌激素水平上升及子宮重量增加,提示盡管Maca對絕經(jīng)后生理變化影響的作用機(jī)制還不十分明確,但有別于雌激素作用,推測可能通過間接作用。由于卵巢激素缺乏造成了骨代謝紊亂、骨轉(zhuǎn)換率提高以及骨快速丟失,因此本研究針對了Maca對骨丟失影響。骨鈣素(BGP)作為評價骨形成和骨轉(zhuǎn)換率的特異性指標(biāo),起著調(diào)節(jié)和維持骨鈣的作用,當(dāng)骨質(zhì)合成時尤其是新骨合成的早期血清增高。相比之下血堿性磷酸酶(ALP)或骨堿性磷酸酶(BAP)是更為穩(wěn)定的骨形成指標(biāo),與骨質(zhì)疏松發(fā)生密切相關(guān),骨密度低下的老年人多有BAP升高現(xiàn)象,卵巢切除術(shù)后大鼠也表現(xiàn)為ALP升高。本研究在卵巢切除術(shù)后骨丟失發(fā)生的早期(7周)同樣觀察到了ALP顯著升高,盡管大鼠尚未出現(xiàn)明顯的骨密度異常。乙烯雌酚可以明顯降低ALP的升高,增進(jìn)骨形成降低去卵巢引起的骨高轉(zhuǎn)換。和乙烯雌酚類似,Maca也表現(xiàn)了降低ALP的作用,但同時可使BGP升高、骨寬增加,提示Maca比乙烯雌酚更強(qiáng)的促進(jìn)成骨細(xì)胞活性的作用,對骨形成有利。另有研究采用Maca提取物(0.24gkgbw)延長觀察時間至28周,發(fā)現(xiàn)Maca可改善激素缺乏引起的骨丟失,佐證了本研究結(jié)果。婦女在絕經(jīng)后由于激素水平急劇下降可引起的器質(zhì)萎縮癥狀及骨質(zhì)疏松,雌激素替代療法目前仍是臨床治療更年期綜合癥的主要手段,