復(fù)方酮康唑乳膏中硫酸新霉素的測定

復(fù)方酮康唑乳膏中硫酸新霉素的測定

復(fù)方酮康唑乳膏主要用于皮膚平坦的細菌感染。對手、腳、體和股關(guān)節(jié)炎的愈合效果非常好，并且在ot藥物中有很大的銷售額。該品種于2005年版收錄。對于新硫酸鈉含量的測定，采用微生物法進行。該法操作復(fù)雜，需要很長時間，重復(fù)性差，采用高效液相法測定。然而，由于新硫酸鈉在紫外區(qū)域沒有其特征，因此在衍生過程中采用了2-4-二硝基氟苯（cdb）[3]等生津劑，并測定了新霉素粉末。1對照品溶液的制備島津LC-10AP高效液相色譜儀,SPD-10AP紫外檢測器,大連色譜工作站。新霉素標準品(批號:3099310,每毫克相當于709單位包括新霉素B與新霉素C)由中國藥品生物制品檢定所提供;2,4-二硝基氟苯(江陰暨陽醫(yī)藥化工有限公司);復(fù)方酮康唑乳膏(武漢諾安藥業(yè)有限公司,批號:2007091);乙腈為色譜純;其它為分析純;含3%氯化鈉的磷酸鹽緩沖液(pH7.8)(取氯化鈉15g、磷酸氫二鈉35.9g于500ml量瓶中,加水450ml溶解,以磷酸調(diào)pH至7.8,加水至刻度即成);對照品儲備液(精密稱取新霉素標準品100mg,置50ml量瓶中,加含3%氯化鈉的磷酸鹽緩沖液(pH7.8)適量,使溶解并稀釋到刻度,搖勻即成);2,4-二硝氟苯溶液(取2,4-二硝基氟苯0.5g,加無水乙醇50ml溶解,即得);三羥甲基氨基甲烷溶液(取三羥甲基氨基甲烷約0.3g,置100ml量瓶中,加水20ml溶解,再用二甲基亞砜稀釋到刻度,搖勻,即得)。2方法和結(jié)果2.1流動相0.2%色譜柱:HypersilODSC18柱(5μm,4.6mm×150mm);流動相:乙腈-三乙胺溶液(量取三乙胺3ml,加水800ml,用磷酸調(diào)pH值到3.6)(80:20);流速為0.8ml/min;柱溫38℃;檢測波長為365nm,色譜圖見圖1、圖2。2.2標準曲線2.2.1磷酸鹽緩沖液ph7.8精密量取對照品儲備液適量,分別各加含3%氯化鈉的磷酸鹽緩沖液(pH7.8)稀釋成200.0、100.0、50.0、25.0、12.5μg/ml5種濃度的溶液。2.2.2乙腈溶液的配制精密量取上述5種對照品溶液5.0ml,分別置50ml量瓶中,各加2,4-二硝氟苯溶液10ml與三羥甲基氨基甲烷溶液10ml,搖勻。密塞,置60℃水浴中加熱50min,取出放置10min,加乙腈適量,冷卻至室溫,用乙腈稀釋至刻度,搖勻。分別吸取20μl注入色譜儀,記錄色譜圖,以峰面積Y對濃度X進行線性回歸,得線性方程為Y=17582.8X+42140,r=0.9995(n=5),結(jié)果表明新霉素在12.5～200.0μg/ml范圍內(nèi)呈良好線性關(guān)系,見表1,圖3。2.3樣品測定2.3.1基質(zhì)的提取精密量稱取復(fù)方酮康唑乳膏4g(約相當于新霉素20mg),置100ml具塞錐形瓶中,加石油醚(沸程90℃～120℃)50ml,超聲處理約30min,使基質(zhì)溶解后,轉(zhuǎn)移到分液漏斗中,用含3%氯化鈉的磷酸鹽緩沖液(pH7.8)提取4次,每次20ml,合并提取液,置100ml量瓶中,加上述緩沖液稀釋至刻度,搖勻,即成。2.3.2乙腈溶液的配制精密量取供試品溶液與對照品溶液各5.0ml,置50ml量瓶中,各加2,4-二硝基氟苯溶液10ml與三羥甲基氨基甲烷溶液10ml,搖勻,密塞,置60℃水浴中加熱50min,取出放置10min,加乙腈適量,冷卻至室溫,用乙腈稀釋到刻度,搖勻。分別吸取20μl注入色譜儀,記錄色譜圖,按外標法以峰面積進行計算含量,測定6次,結(jié)結(jié)果分別為4.87mg/g、4.75、4.79、4.73、4.72、4.70mg/g(平均值為4.76mg/g,RSD為1.3%)。2.4加標回收率測定精密量取樣品測定項下的供試品溶液10ml,置25ml量瓶中,再精密量取樣品測定項下的對照品溶液10、15、20ml,混合均勻,精密量取混合液5.0ml,照樣測定項下的方法,自“分別置50ml量瓶中”起,依法測定,測得回收率分別為99.0%、101.3%、98.8%,平均回收率為99.7%,RSD=1.39%,見表2。2.5精密度測試精密吸取對照品溶液5ml,按樣品測定方法測定,連續(xù)進樣5次,結(jié)果RSD為1.48%,見表3。2.6進樣穩(wěn)定性測定按含量測定項下的方法,對同一批樣品,重復(fù)進樣5次,色譜峰面積的RSD為1.82%(n=5),被測溶液分別放置1、2、4、8、16、24h再進行測定,結(jié)果沒有變化。2.7與藥物標準的比較結(jié)果表明與藥典標準方法一致,沒有差異,見表4。3峰出峰時間及峰能分離中國藥典2005年版中,本法試劑存在有峰吸收,為前峰,出峰時間在3～4min,樣品峰出峰時間在8～10min