第五章 生物制品制

第五章生物制品制造新技術(shù)主要講一些生物制品中一些新疫苗、新診斷劑及抗體的概念及原理。第一節(jié)基因工程疫苗

指DNA重組技術(shù)研制的疫苗，包括將保護性抗原基因在原核細(xì)胞或真核細(xì)胞中表達(dá)的重組亞單位疫苗；及病毒或細(xì)菌的活載體疫苗，基因缺失疫苗，DNA疫苗等。一、重組亞單位疫苗將編碼微生物保護性抗原的基因?qū)氲皆思?xì)胞或真核細(xì)胞，使其表達(dá)分泌性保護性多肽抗原，加佐劑而成。優(yōu)點：A、安全、無病原性，無熱源質(zhì)和負(fù)作用。B、可用于不好培養(yǎng)的微生物疫苗制備（圓環(huán)病毒、附紅細(xì)胞體）。缺點：研究困難，價格貴。已經(jīng)生產(chǎn)的有：口蹄疫多肽疫苗，炭疽三聯(lián)毒素，皰疹病毒亞單位疫苗，激素亞單位疫苗（生長抑制激素14肽）。二、重組活體載體疫苗將保護性抗原基因轉(zhuǎn)移到活載體中表達(dá)的活疫苗。理想的載體是弱毒疫苗病毒和疫苗細(xì)菌，病毒有痘病毒，腺病毒，皰疹病毒等。一般大病毒做載體可以插入25kb的基因，小病毒僅插入2kb，故大病毒可插入多種保護性抗原基因，制成多價疫苗。非復(fù)制性疫苗（稱活-死疫苗）：載體病毒半復(fù)制，無排毒危險，但可以表達(dá)目的抗原。如金絲雀痘病毒可表達(dá)新城疫HF基因。重組載體病毒活疫苗：雞痘病毒可表達(dá)多種病毒的保護性抗原基因。重組載體細(xì)菌活疫苗：如卡介苗，沙門氏菌，李氏桿菌等載體。三、基因缺失疫苗切除病毒強毒基因而制成的活疫苗，如切除偽狂犬病毒TK基因，其次還有自然缺失弱毒疫苗，如Barth-k61，以及雙基因缺失gG,gE，有利于區(qū)別野毒抗體?；蛱砑右呙纾翰迦牖?，使微生物變異為弱毒疫苗，也可能是插入破壞病原基因作用。四、基因疫苗有DNA和RNA疫苗，是保護性抗原基因與載體結(jié)合，注入機體表達(dá)，不與宿主染色體整合。步驟：a、目的基因提取；b、選擇載體；c、測序確定整合；d、體外試驗；e、動物試驗；f、結(jié)構(gòu)評價。自殺DNA疫苗：注入體內(nèi)的DNA疫苗，在復(fù)制幾代后自動停止，安全，不會與宿主染色體整合。五、多肽疫苗用化學(xué)或基因工程合成保護性抗原多肽，加載體和佐劑制成。

六、轉(zhuǎn)基因植物疫苗將某種基因?qū)胫参镏斜磉_(dá)，食用植物就被免疫，也叫食用疫苗，如：果蔬疫苗。導(dǎo)入方式：1、穩(wěn)定整合表達(dá)：基因直接整合在植物上表達(dá)，并能遺傳下代。2、瞬時表達(dá)：基因整合病毒，病毒感染植物，然后表達(dá)。第二節(jié)診斷制劑

疫病診斷最重要，新型診斷試劑開發(fā)，彌補了臨床診斷的不足。一、重組表達(dá)抗原是制備出高純度的診斷抗原方法。步驟：將編碼特定抗原的基因插入質(zhì)粒，再轉(zhuǎn)入宿主細(xì)胞表達(dá)，然后提取出來做診斷抗原。二、核酸圖譜分析將被測核酸提取、切割、酶切、電泳等方法，進(jìn)行分析診斷。有核酸電泳圖譜；核酸酶切圖譜、寡核苷酸指紋圖譜等三、核酸探針用已知核酸片段同位素標(biāo)記為核酸探針，與樣品核酸雜交（互補結(jié)合），然后檢測互補雙鏈中有效放射同位素。四、聚合酶鏈反應(yīng)（PCR）是DNA體外擴增技術(shù)：以單鏈DNA為模板，在DNA聚合酶作用下,在引物上不斷延伸，加入有4種堿基（dNTP—三磷酸脫氧核苷酸），不斷互補成DNA雙鏈，然后高溫解鏈—降溫退火—延伸，試驗不斷反復(fù)，DNA擴增數(shù)百萬倍，然后電泳來診斷。五、基因芯片也叫DNA芯片，是指將許多特定寡核苷酸片段作為探針，有規(guī)律排列固定在支撐物上，加檢測標(biāo)本，相同DNA會結(jié)合成雙鏈（雙鏈吸收光譜和單鏈不一樣），然后用激光共聚焦熒光檢測系統(tǒng)，對芯片掃描，記錄分析。第三節(jié)抗體工程技術(shù)

一、單克隆抗體（一）概念：具有產(chǎn)生抗體的B