臨床微生物學(xué)檢驗(yàn)：實(shí)驗(yàn)十三 不發(fā)酵革蘭陰性桿菌的檢驗(yàn)(二)

實(shí)驗(yàn)十三不發(fā)酵革蘭陰性桿菌的檢驗(yàn)(二)目的要求：1.熟悉不發(fā)酵革蘭陰性菌的分離鑒定程序及臨床意義；2.掌握不發(fā)酵革蘭陰性菌的形態(tài)、生化反應(yīng)特點(diǎn)和數(shù)值鑒定方法；3.掌握鑒定不發(fā)酵革蘭陰性菌生化反應(yīng)試驗(yàn)的操作方法和結(jié)果分析。實(shí)驗(yàn)內(nèi)容：0.細(xì)菌普通培養(yǎng)基劃線接種（2天前已做）1.菌落形態(tài)觀察；（每人作）2.培養(yǎng)物涂片革蘭染色鏡檢觀察（每人作）；3.培養(yǎng)物氧化酶試驗(yàn)、接種OF培養(yǎng)基、接種微量生化管（2人一組，小組作）；菌落形態(tài)觀察：

細(xì)菌名稱

菌落特征銅綠假單胞菌

專性需氧菌，營養(yǎng)要求不高，生長溫度范圍是20℃-42℃，最適生長溫度35℃，4℃不生長而42℃生長是該菌的鑒別點(diǎn)之一。普通平板形成大小不一、邊緣不齊、扁平、常融合菌落，藍(lán)綠色；血平板見扁平、灰/藍(lán)綠色菌落可見金屬光澤；麥康凱平板呈微小、棕綠色菌落。嗜麥芽窄食單胞菌

專性需氧菌，營養(yǎng)要求不高，生長溫度范圍是20℃-42℃，最適生長溫度35℃。普通瓊脂平板上形成中等大小、圓形、黃色或棕黃色不透明的菌落，有氨氣味；在血平板上菌落不溶血，淡黃色菌落；SS上不生長。細(xì)菌形態(tài)、染色觀察（G’S）：

革蘭陰性桿菌，長短不一，呈球桿狀或長絲狀，單個、呈雙或短鏈狀排列；無芽胞，有莢膜，一端有1-3根鞭毛，運(yùn)動活潑，臨床分離株常有菌毛。銅綠假單胞菌嗜麥芽窄食單胞菌：

革蘭陰性菌桿菌，菌體小，無莢膜無芽胞，一端鞭毛1-8根。氧化酶試驗(yàn)（濾紙法，P30）【原理】：氧化氧化氧化酶細(xì)胞色素C鹽酸二甲基對苯二胺（顯色）【步驟】

取白色潔凈濾紙沾取菌落。加1%鹽酸二甲基對苯二胺溶液一滴，陽性者呈現(xiàn)粉紅色，并逐漸加深。如用鹽酸四甲基對苯二胺為藍(lán)色銅綠假單胞菌氧化酶試驗(yàn)（+）鮑曼不動桿菌氧化酶試驗(yàn)（-）嗜麥芽寡養(yǎng)單孢菌氧化酶試驗(yàn)（-）微量生化管（接種，2人一套）空白：藍(lán)/綠無淡綠藍(lán)黃藍(lán)藍(lán)無色綠黃方法：

1.穿刺接種細(xì)菌。

2.氨基酸及對照管滴加液體石蠟封閉。

3.35度孵育。

4.24-48h觀察顏色變化判斷陽性結(jié)果和數(shù)字編碼鑒定。OF培養(yǎng)基接種（半固體）：成分：正常為草綠色細(xì)菌營養(yǎng)成分—蛋白胨，氯化鈉，瓊脂，KH2PO4

酸堿指示劑—如0.2%溴麝香酚蘭(pH6.0黃～7.6藍(lán))

糖—葡萄糖,和/或麥芽糖,和/或木糖……接種方法：

1.細(xì)菌穿刺接種18-24h幼齡細(xì)菌。

2.接種純種細(xì)菌開管1支、閉管1支（1:1無菌凡士林液體石蠟封閉,隔絕空氣）

3.培養(yǎng)基35°C培養(yǎng)24小時。培養(yǎng)基變黃示分解糖。結(jié)果判斷：

培養(yǎng)基變黃示分解糖產(chǎn)酸；培養(yǎng)基不變黃示不分解糖產(chǎn)酸，O/F試驗(yàn)結(jié)果為-

僅開管變黃為氧化性產(chǎn)酸，