血漿蛋白質(zhì)醋纖膜電泳

血漿蛋白質(zhì)

醋酸纖維素薄膜電泳

（Electrophoresisoncelluloseacetatemembraneofserumproteins)實(shí)驗(yàn)2實(shí)驗(yàn)?zāi)康?、掌握醋酸纖維素薄膜電泳的原理2、掌握醋酸纖維素薄膜電泳分離血漿蛋白質(zhì)的實(shí)驗(yàn)操作技術(shù)和注意事項(xiàng)。3、了解醋酸纖維素薄膜作支持物進(jìn)行電泳的優(yōu)點(diǎn)及使用范圍。醋酸纖維素薄膜電泳采用醋酸纖維素薄膜作為支持物的電泳方法叫做醋酸纖維素薄膜電泳。醋酸纖維素是纖維素的羥基乙酰化所形成的纖維素醋酸酯，將它溶于有機(jī)溶劑（如丙酮、氯仿、氯乙烯、乙酸乙酯等）后，涂抹成均勻的薄膜，干燥后就成為醋酸纖維素薄膜。該膜具有均一的泡沫狀結(jié)構(gòu)，厚度約為120μm，通透性好，對分子移動阻力少，是一種良好的電泳支持物。醋酸纖維素薄膜電泳的優(yōu)點(diǎn)及應(yīng)用具有微量、快速、簡便、區(qū)帶清晰、靈敏度高、便于攝影和保存等優(yōu)點(diǎn)。用于科學(xué)實(shí)驗(yàn)、生化產(chǎn)品分析和臨床化驗(yàn)，如血漿蛋白、血紅蛋白、球蛋白、脂蛋白、糖蛋白、甲胎蛋白、同工酶等的分離鑒定。原理血漿中各種蛋白質(zhì)的等電點(diǎn)不同，一般都低于pH7.4。它們在pH8.6的緩沖液中均解離帶負(fù)電荷，在電場中向正極移動。由于血漿中各種蛋白質(zhì)分子大小、形狀及所帶的電荷量不同，因而在醋酸纖維素薄膜上電泳的速度也不同。因此可以將它們分離為清蛋白（Albumin)、α1-球蛋白、α2-球蛋白、β-球蛋白、γ-球蛋白，纖維蛋白原６條區(qū)帶。血漿蛋白質(zhì)的等電點(diǎn)、

平均相對分子量、及正常含量

球蛋白清蛋白Aα1α2βγpI相對分子量（×104）含量（%）4.886.957~725.06202~55.06304~95.129~156.2~126.85~7.315.6~3012~20實(shí)驗(yàn)材料健康人血漿或動物血漿試劑1、pH8.6巴比妥緩沖液2、氨基黑10B染色液3、漂洗液4、洗脫液5、透明液（試劑配制參見實(shí)驗(yàn)講義）定量時用儀器和器材1、常壓電泳儀、電泳槽2、醋酸纖維素薄膜（2×8cm）3、點(diǎn)樣器（載玻片或蓋玻片）、玻璃板4、培養(yǎng)皿（泡膜、染色和漂洗用）5、濾紙6、鑷子7、試管、試管架、吸量管8、分光光度計(jì)（定量用）操作步驟1、薄膜準(zhǔn)備①將醋酸纖維素薄膜切成2×8cm的小條。②在薄膜粗面一端1.5cm處用鉛筆輕輕畫一橫線。③在薄膜角上用鉛筆作一標(biāo)記。④將醋酸纖維素薄膜浸泡于緩沖液中20min。

操作步驟醋酸纖維素薄膜規(guī)格及點(diǎn)樣位置8cm2cm點(diǎn)樣線點(diǎn)樣區(qū)1.5cm(粗面）操作步驟2、電泳儀準(zhǔn)備在電泳槽內(nèi)加入緩沖液，使兩個電極槽內(nèi)的液面等高。先剪裁尺寸合適的濾紙條，取雙層濾紙條附著在電泳槽的支架上，使它的一端與支架的前沿對齊，而另一端浸入電極槽的緩沖液內(nèi)。用緩沖液將濾紙全部潤濕并驅(qū)除氣泡，使濾紙緊貼在支架上，即為濾紙橋。它是聯(lián)系醋酸纖維薄膜和兩極緩沖液之間的“橋梁”。操作步驟3、點(diǎn)樣（電泳的關(guān)鍵步驟）用鑷子把膜條從緩沖液中取出，夾在兩層濾紙中間，吸去多余的液體，然后平鋪在玻璃板上（粗面朝上），將點(diǎn)樣器先在培養(yǎng)皿的血漿中沾一下，再在膜條點(diǎn)樣線處輕輕地水平落下并隨即提起，這樣即在膜條上點(diǎn)上了細(xì)條狀的血漿樣品。點(diǎn)樣線盡量點(diǎn)得細(xì)窄而均勻。寧少勿多。操作步驟4、上槽待血漿吸入膜后，以薄膜粗面向下、點(diǎn)樣端置陰極端，兩端緊貼在濾紙鹽橋上，膜應(yīng)輕輕拉平，加蓋，平衡約5min，使薄膜滲透的緩沖液達(dá)到平衡。

切勿使點(diǎn)樣處與電泳槽接觸醋酸纖維素薄膜電泳裝置示意圖操作步驟5、電泳檢查電泳裝置是否正確，開啟電源，調(diào)節(jié)電壓、電流，然后通電40~60min。

電壓：110~150V（10V/cm膜長）薄膜的有效長度是兩電極緩沖液面之間濾紙鹽橋和薄膜的長度之和。

電流：0.4~0.6mA/cm膜寬有數(shù)條膜便求數(shù)條膜寬的總和。

操作步驟6、染色和漂洗電泳完畢后，關(guān)閉電源，將膜取出，直接浸于染色液中5min。取出膜，盡量瀝凈染色液，移入漂洗液中浸洗脫色（一般更換2~3次），至背景顏色脫凈為止。取出膜，用濾紙吸干即可。操作步驟血漿蛋白醋酸纖維素薄膜電泳圖譜－＋電泳方向Aα1βγα2纖維蛋白原操作步驟7、透明薄膜完全干燥