反芻家畜小腸消化率測(cè)定方法的比較

反芻家畜小腸消化率測(cè)定方法的比較

反芻動(dòng)物的養(yǎng)分消化主要從腫瘤胃和結(jié)腸開(kāi)始。國(guó)內(nèi)外對(duì)瘤胃發(fā)酵進(jìn)行了大量的研究,對(duì)反芻家畜小腸消化率的測(cè)定方法國(guó)外報(bào)道較多,國(guó)內(nèi)研究較為少見(jiàn)。綜合國(guó)內(nèi)外的研究結(jié)果來(lái)看,反芻家畜小腸消化率的測(cè)定方法常見(jiàn)的有體內(nèi)法、小尼龍袋法、實(shí)驗(yàn)動(dòng)物模擬法及體外法。1型瘺管飼料營(yíng)養(yǎng)成分測(cè)定體內(nèi)法是一種直接測(cè)定消化率的古典方法。原理是通過(guò)分析進(jìn)入真胃或十二指腸的營(yíng)養(yǎng)成分與糞或回腸末端食糜中飼料未消化成分之差來(lái)估算營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)的表觀消化率,真消化率是在此基礎(chǔ)上用內(nèi)源成分損失校正。在有十二脂腸過(guò)橋瘺管的情況下,可以全收集食糜(Zinn等,1980)而不用標(biāo)記物,但在只有“T”型瘺管時(shí),必須使用標(biāo)記物(Orskov,1969)。糞或回腸末端食糜組成的分析與十二指腸相似。糞中采樣會(huì)高估飼料中營(yíng)養(yǎng)成分的小腸消化率?；啬c末端采樣更具有科學(xué)性,但由于試驗(yàn)方法成本較高,試驗(yàn)動(dòng)物的成活率也低,因此僅限于個(gè)別試驗(yàn)采用?；旌先占Z中營(yíng)養(yǎng)成分消化率測(cè)定比較簡(jiǎn)單,而單個(gè)飼料的測(cè)定比較復(fù)雜。常用的方法有純化日糧法、半純化日糧法和真胃灌注法。真胃灌注法產(chǎn)生于80年代。該方法最初用于計(jì)算瘤胃未降解蛋白質(zhì)(UDP)的消化率,Hvelplund等(1987)用此方法測(cè)定了豆粕、棉籽餅、菜籽餅、向日葵餅、魚(yú)粉和椰子餅?zāi)膛Ａ鑫概囵B(yǎng)16h殘?jiān)南?得出各飼料間單個(gè)氨基酸消化率存在有顯著性差異,從而證實(shí)測(cè)定單個(gè)飼料UDP消化率的必要性。體內(nèi)法測(cè)定的消化率存在著很大的誤差,日糧的頻繁更換對(duì)動(dòng)物來(lái)說(shuō)是一種應(yīng)激,同時(shí)標(biāo)記物的回收率往往低于100%,且不同的處理方法獲得的標(biāo)記物回收率不同,另外食糜或糞采樣的代表性及化學(xué)成分不同引起的誤差也在所難免。2小鼠體內(nèi)法和微生物n對(duì)udp消化率的影響Johnson等(1944)首次用小鼠來(lái)預(yù)測(cè)微生物蛋白質(zhì)的消化率,隨后許多研究者重復(fù)了這次試驗(yàn)。用小鼠預(yù)測(cè)UDP的消化率開(kāi)始較晚,不論是微生物N還是UDP利用小鼠獲得的試驗(yàn)數(shù)據(jù)均低于反芻動(dòng)物體內(nèi)法獲得的結(jié)果。原因是反芻家畜與單胃動(dòng)物在消化能力上存在著很大差異,另外,試驗(yàn)小鼠日糧蛋白質(zhì)水平(Johnosn,1944)及小鼠性別和年齡(McNaught等,1954)上的差異也可能是小鼠模擬數(shù)據(jù)偏低的原因。3小尼龍袋法測(cè)定小尼龍袋干草經(jīng)酶活性的方法此法又叫運(yùn)動(dòng)尼龍袋法(mobilednylonbagteehuique),最初用于豬消化率的測(cè)定。Krikpatrick和Kennelly(1984)首次將它用于生長(zhǎng)母牛UDP腸消化率的測(cè)定。這種方法是將一定量的飼料(瘤胃降解殘?jiān)?封閉在一定大小的小尼龍袋內(nèi),按規(guī)定方法塞入真胃瘺管或十二指腸瘺管內(nèi),然后從糞中收集小尼龍袋,通過(guò)分析小尼龍袋內(nèi)營(yíng)養(yǎng)成分殘留來(lái)計(jì)算消化率。由于該法具有良好的重復(fù)性(deBoer等,1987)和與體內(nèi)法數(shù)據(jù)的強(qiáng)烈相關(guān)(Hvelplund,1985),很快受到人們的重視。該種方法測(cè)得的消化率是全腸道的消化率。部分研究者試圖從回盲處(回盲瘺管術(shù))收集運(yùn)動(dòng)尼龍袋,這樣可測(cè)出小腸的消化率,但從回盲處收集小尼龍袋較困難,并容易發(fā)生堵塞,因此絕大多數(shù)報(bào)道材料是全腸道的消化率數(shù)據(jù)。Frydrych(1992)利用這種方法測(cè)定了各種能量飼料、蛋白質(zhì)飼料、新鮮牧草、青貯飼料和干草經(jīng)瘤胃培養(yǎng)16h后飼料殘?jiān)谀c內(nèi)的消化率,并對(duì)它們進(jìn)行比較,發(fā)現(xiàn)重復(fù)性較高,而且與前人數(shù)據(jù)存在有良好的相關(guān)。如何獲得瘤胃非降解殘?jiān)切∧猃埓y(cè)定腸消化率的關(guān)鍵,根據(jù)已有的報(bào)道材料看出,多數(shù)在瘤胃內(nèi)培養(yǎng)十多個(gè)小時(shí)。飼料樣品量/尼龍袋表面積的大小影響瘤胃內(nèi)飼料降解率,進(jìn)而會(huì)影響腸消化率。Nocek(1985)比較了四種不同比例(2.5、12.6、25.3、37.9mg/cm2)情況下豆餅蛋白質(zhì)消化率,結(jié)果表明12.6mg/cm2條件下測(cè)定值近似于體內(nèi)值。按此標(biāo)準(zhǔn),小尼龍袋內(nèi)裝0.5g左右飼料為好。但由于0.5g飼料量太少,給化學(xué)分析帶來(lái)困難。為了解決這一矛盾,Frydrych(1992)提出:飼料樣品放在大尼龍袋內(nèi)(6cm×12cm)內(nèi)培養(yǎng)16h,將獲得的殘?jiān)∩僭S(0.5g粗料或1g精料)放入小尼龍袋內(nèi)測(cè)UDP的腸消化率。Antoniewicz等(1992)用此法測(cè)得30種飼料DM和CP消化率的重復(fù)性很好。Varrikko和Vannatalo(1990)綜合考慮了小尼龍袋空白部分相對(duì)表面積與網(wǎng)孔大小對(duì)飼料腸消化率的影響。裝有1.1g精料或0.8g粗料的小尼龍袋空白部分相對(duì)表面積(%):網(wǎng)孔大小(μm)為2∶1,2∶10,5∶6,15∶30,15∶41,小尼龍袋直接塞入奶牛十二指腸,測(cè)得腸消化率最低的是空白部分相對(duì)表面積為2%組,而空白部分相對(duì)表面積大于或等于5%時(shí)結(jié)果比較一致,且不受網(wǎng)孔大小的影響。Nocek(1988)建議,尼龍袋網(wǎng)眼大小應(yīng)在40~60μm之間。小尼龍袋法測(cè)腸消化率的矛盾主要體現(xiàn)在小尼龍袋的塞入速度上。大多數(shù)研究者認(rèn)為間隔30~45min,使每頭奶牛每天塞入10~15個(gè)小尼龍袋,有利于小尼龍袋在腸內(nèi)的分離,降低小腸阻塞的機(jī)會(huì)。綜合考慮小尼龍袋法測(cè)定飼料消化率的全過(guò)程,發(fā)現(xiàn)最大誤差來(lái)源于腸道對(duì)小尼龍袋的排斥現(xiàn)象。尼龍袋刺激腸粘膜使腸蠕動(dòng)加快。尼龍袋在腸內(nèi)停留時(shí)間(13.3h±1.9h,Voigt等,1985;14.1h±4.9h,Antoniewicz等,1992)低于食糜(21~30h)。迄今為止,小尼龍袋法還未像瘤胃尼龍袋法那樣完善,主要表現(xiàn)在飼料在瘤胃內(nèi)培養(yǎng)的時(shí)間,小尼龍袋的規(guī)格大小,網(wǎng)孔的大小,尼龍袋內(nèi)的飼料殘?jiān)鼣?shù)據(jù),小尼龍袋的塞入速度及小尼龍袋的收集等,有待于進(jìn)一步的完善和標(biāo)準(zhǔn)化。4消化率的測(cè)定—酶解法體內(nèi)法和小尼龍袋法都必須借助于瘤胃、真胃瘺管、十二指腸瘺管或回盲瘺管,致使這些方法的應(yīng)用受到很大限制,試驗(yàn)小鼠模擬法測(cè)定值又偏低,于是一些研究者又在尋找一種能很好預(yù)測(cè)體內(nèi)結(jié)果的體外消化率測(cè)定方法——酶解法。胃蛋白酶-胰蛋白酶法最早被人們用來(lái)評(píng)定豬飼料的消化率。胃蛋白酶和胰蛋白酶用于反芻家畜UDP消化率的測(cè)定起步于80年代。Antoniewicz等(1988)對(duì)甲醛處理飼料UDP消化率進(jìn)行了評(píng)定,發(fā)現(xiàn)酶解法與小尼龍袋法相關(guān)性很好(r=0.90,n=20;P<0.00