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文檔簡介
實驗常用試劑、緩沖液的配制方法1、lMTri-HCl口組份濃度1MTri-HCl(pH7.4,7.6,8.0)口配制量1L□配置方法1.稱量121.1gTri置于1L燒杯中。加入約800mL的去離子水,充分攪拌溶解。3.按下表量加入濃鹽酸調(diào)節(jié)所需要的pH值。pH值濃HCl7.4約70mL7.6約60mL8.0約42mL4.將溶解定容至1L。5.高溫高壓滅菌后,室溫保存。注意:應使溶液冷卻至室溫后再調(diào)定pH值,因為Tri溶液的pH值隨溫度的變化差很大,溫度每升高1°C,溶液的pH值大約降低0.03個單位。2、1.5MTri-HCl口組份濃度1.5MTri-HCl(pH8.8)□配制量1L□配置方法1.稱取181.7gTri置于1L燒杯中。加入約800mL的去離子水,充分攪拌溶解。3.用濃鹽酸調(diào)pH值至8.8。4.將溶液定容至1L。5.高溫高壓滅菌后,室溫保存。注意:應使溶液冷卻至室溫后再調(diào)定pH值,因為Tri溶液的pH值隨溫度的變化差異很大,溫度每升高1C,溶液的pH值大約降低0.03個單位。3、10某TEBuffer□組份濃度100mMTri-HCl,10mMEDTA(pH7.4,7.6,8.0)口配制量1L□配置方法1.量取下列溶液,置于1L燒杯中。1MTri-HClBuffer(pH7.4,7.6,8.0)100mL500mMEDTA(pH8.0)20mL向燒杯中加入約800mL的去離子水,均勻混合。3.將溶液定至1L后,高溫高壓滅菌。4.室溫保存。4、3M醋酸鈉□組份濃度3M醋酸鈉(pH5.2)□配制量100mL□配置方法1.稱取40.8gNaOAc3H2O置于100?200mL燒杯中,加入約40mL的去離子水攪拌溶解。2.加入冰乙酸調(diào)節(jié)pH值至5.2。3.加入去離子水將溶液定容至100mL。高溫高壓滅菌后,室溫保存。5、PBSBuffer□組份濃度137mMNaCl,2.7mMKCl,10mMNa2HPO4,2mMKH2P04□配制量1L□配置方法1.稱量下列試劑,置于1L燒杯中。NaCl8gKCl0.2gNa2HPO41.42gKH2PO40.27g2.向燒杯中加入約800mL的去離子水,充分攪拌溶解。3.滴加HC1將pH值調(diào)節(jié)至7.4,然后加入去離子水將溶液定容至1L。4.高溫高壓滅菌后,室溫保存。注意:上述PBSBuffer中無二價陽離子,如需要,可在配方中補充1mMCaCl2和0.5mMMgCl2。6、10M醋酸銨□組份濃度10M醋酸銨□配制量100mL□配置方法1.稱量77.1g醋酸銨置于100?200mL燒杯中,加入約30mL的去離子水攪拌溶解。加去離子水將溶液定容至100mL。3.使用0.22um濾膜過濾除菌。4.密封瓶口于室溫保存。注意:醋酸銨受熱易分解,所以不能高溫高壓滅菌。7、Tri-HCl平衡苯酚□配置方法使用原料:大多數(shù)市售液化苯酚是清亮無色的,無需重蒸餾便可用于分子生物學實驗。但有些液化苯酚呈粉紅色或黃色,應避免使用。同時也應避免使用結(jié)晶苯酚,結(jié)晶苯酚必須在160°C對其進行重蒸餾除去諸如醌等氧化產(chǎn)物,這些氧化產(chǎn)物可引起磷酸二酯鍵的斷裂或?qū)е翿NA和DNA的交聯(lián)等。因此,苯酚的質(zhì)量對DNA、RNA的提取極為重要,我們推薦使用高質(zhì)量的苯酚進行分子生物學實驗。操作注意:苯酚腐蝕性極強,并可引起嚴重灼傷,操作時應戴手套及防護鏡等。所有操作均應在通風櫥中進行,與苯酚接觸過的皮膚部位應用大量水清洗,并用肥皂和水洗滌,忌用乙醇。3.苯酚平衡:因為在酸性pH條件下DNA分配于有機相,因此使用苯酚前必須對苯酚進行平衡使其pH值達到7.8以上,苯酚平衡操作方法如下:液化苯酚應貯存于-20C,此時的苯酚呈現(xiàn)結(jié)晶狀態(tài)。從冰柜中取出的苯酚首先在室溫下放置使其達到室溫,然后在68C水浴中使苯酚充分溶解。加入羥基喹啉(8-Quinolinol)至終濃度0.1%。該化合物是一種還原劑、RNA酶的不完全抑制劑及金屬離子的弱螯合劑,同時因其呈黃色。有助于方便識別有機相。加入等體積的1MTri-HCl(pH8.0),使用磁力攪拌器攪拌15分鐘,靜置使其充分分層后,除去上層水相。④重復操作步驟③。⑤加入等體積的0.1MTri-HCl(pH8.0),使用磁力攪拌器攪拌15分鐘,靜置使其充分分層后,除去上層水相。⑥重復操作步驟⑤,稍微殘留部分上層水相。⑦使用pH試紙確認有機相的pH值大于7.8。⑧將苯酚置于棕色玻璃瓶中4°C避光保存。8、苯酚/氯仿/異戊醇□配置方法說明:從核酸樣品中除去蛋白質(zhì)時常常使用苯/酚/氯仿/異戊醇(25:24:1)。氯仿可使蛋白(25:24:1)質(zhì)變性并有助于液相與有機相的分離,而異戊醇則有助于消除抽提過程中出現(xiàn)的氣泡。配置方法:將Tri-HCl平衡苯酚與等體積的氯仿/異戊醇(24:1)均勻混合后,移入棕色玻璃瓶中4C保存。9、10%(W/V)SDS□組份濃度10%(W/V)SDS口配制量100mL□配置方法1.稱量10g高純度的SDS置于100?200mL燒杯中,加入約80mL的去離子水,68C加熱溶解。2.滴加數(shù)滴濃鹽酸調(diào)節(jié)pH值至7.2。3.將溶液定容至100mL后,室溫保存。10、2NNaOH□組份濃度2NNaOH□配制量100mL□配置方法量取80mL去離子水置于100?200mL塑料燒杯中(NaOH溶解過程中大量放熱,有可能使玻璃燒杯炸裂)。稱取8gNaOH小心地逐漸加入到燒杯中,邊加邊攪拌。3.待NaOH完全溶解后,用去離子水將溶液體積定容至100mL°4.將溶液轉(zhuǎn)移至塑料容器中后,室溫保存。11、2.5NHCl口組份濃度2.5NHC1□配制量100mL□配置方法1.在78.4mL的去離子水中加入21.6mL的濃鹽酸(11.6N),均勻混合。2.室溫保存。12、5MNaCl口組份濃度5MNaCl口配制量1L□配置方法1.稱取292.2gNaCl置于1L燒杯中,加入約800mL的去離子水后攪拌溶解。2.加去離子水將溶液定容至1L后,適量分成小份。3.高溫高壓滅菌后,4°C保存。13、20%(W/V)Glucoe□組份濃度20%(W/V)Glucoe2□配制量100mL□配置方法1.稱取20gGlucoe置于100?200mL燒杯中,加入約80mL的去離子水后,攪拌溶解。加去離子水將溶液定容至100mL。3.高溫高壓滅菌后,4C保存。14、Solutionl口組份濃度25mMTri-HCl(pH8.0),10mMEDTA,50mMGlucoe(質(zhì)粒提取用)□配制量1L□配置方法1.量取下列溶液,置于1L燒杯中。1MTri-HCl(pH8.0)25mL0.5MEDTA(pH8.0)20mL20%Glucoe(1.11M)45mLdH2O910mL2.高溫高壓滅菌后,4C保存。使用前每50mL的Soliutionl中加入加L的RNaeA(20mg/mL)。15、Solutionll口組份濃度250mMNaOH,1%(W/V)SDS(質(zhì)粒提取用)□配制量500mL□配置方法1.量取下列溶液置于500mL燒杯中。10%SDS50mL2NNaOH50mL2.加滅菌水定容至500mL,充分混勻。室溫保存。此溶液保存時間最好不要超過一個月。注意:SDS易產(chǎn)生氣泡,不要劇烈攪拌。16、Solutionlll口組份濃度3MK0Ac,5MCH3C00H(質(zhì)粒提取用)□配制量500mL□配置方法1.量取下列溶液置于500mL燒杯中。K0Acl47gCH3C00H57.5mL2.加入300mL去離子水后攪拌溶解。3.加去離子水將溶液定容至500mL。4.高溫高壓滅菌后,4°C保存。17、0.5MEDTA□組份濃度0.5MEDTA(pH8.0)□配制量1L□配置方法1.稱取186.1gNa2EDTA2H20,置于1L燒杯中。2.加入約800mL的去離子水,充分攪拌。3.用NaOH調(diào)節(jié)pH值值8.0(約20gNaOH)。注意:pH值至8.0時,EDTA才能完全溶解。4.加去離子水將溶液定容至1L。5.適量分成小份后,高溫高壓滅菌。6.室溫保存。18、1MDTT□組份濃度1MDTT□配制量20mL□配置方法1.稱取3.09gDTT,加入到50mL塑料離心管內(nèi)。2.加20mL的0.01M的NaOAc(pH5.2),溶解后使用0.22um濾器過濾除菌。適量分成小份后,-20C保存。19、10mMATP□組份濃度10mMATP□配制量20mL□配置方法1.稱取121mgNa2ATP3H2O,加入到50mL塑料離心管內(nèi)。加20mL的25mMTri-HCl(pH8.0),攪拌溶解。3.適量分成小份,-20C保存。分子生物學實驗常用培養(yǎng)基的配制方法1、Ampicillin□組份濃度100mg/mlAmpicillin(100mg/ml)□配制量50mL□配置方法1.稱量5gAmpicillin置于50mL離心管中。加入40mL滅菌水,充分混合溶解后,定容至50mL。3.用0.22um濾膜過濾除菌。小份分裝(ImL/份)后,-20°C保存。2、IPTG□組份濃度24mg/mLIPTG(24mg/mL)□配制量50mL配置方法1.稱量1.2gIPTG置于50mL離心管中。加入40mL滅菌水,充分混合溶解后,定容至50mL。3.用0.22um濾膜過濾除菌。小份分裝(ImL/份)后,-20C保存。3、某-Gal□組份濃度20mg/mL某-Gal(20mg/mL)□配制量50mL□配置方法1.稱取1g某-Gal置于50mL離心管中。2.加入40mLDMF(二甲基甲酰胺),充分混合溶解后,定容至50mL。小份分裝(ImL/份)后,-20C保存。4、LB培養(yǎng)基□組份濃度1%(W/V)Tryptone,0.5%(W/V)YeatE某tract,l%(W/V)NaCl口配制量1L□配置方法1.稱量下列試劑,置于1L燒杯中TryptonelOgYeatE某tract5gNaCl10g2.加入約800mL的去離子水,充分攪拌溶解。3.滴加5NNaOH(約0.2mL),調(diào)節(jié)pH值至7.0。4.高溫高壓滅菌后,4°C保存。5、LB/Amp培養(yǎng)基□組份濃度1%(W/V)Tryptone0.5%(W/V)YeatE某tract1%(W/V)NaCl0.1mg/mLAmpicillin□配制量1L□配置方法1.稱量下列試劑,置于1L燒杯中Tryptone10gYeatE某tract5gNaCl10g2.加入約800mL的去離子水,充分攪拌溶解。3.滴加5NNaOH(約0.2mL),調(diào)節(jié)pH值至7.0。4.加去離子水將培養(yǎng)基定容至1L。5.高溫高壓滅菌后,冷卻至室溫。3加入1mLAmpicillin(100mg/mL)后均勻混合°7.4C保存。6、TB培養(yǎng)基□組份濃度1.2%(W/V)Tryptone2.4%(W/V)YeatE某tract0.4%(V/V)Glycerol17mMKH2PO472mMK2HPO4□配制量1L□配置方法1.配制磷酸鹽緩沖液(0.17MKH2PO4,0.72MK2HPO4)100mL。2?稱取下列試劑,置于1L燒杯中。Tryptone12gYeatE某tract24gGlycerol4mL3.加入約800mL的去離子水,充分攪拌溶解。4.加去離子水將培養(yǎng)基定容至1L后,高溫高壓滅菌。5.待溶液冷卻至60C以下時,加入100mL的上述滅菌磷酸鹽緩沖液°6.4C保存。7、TB/Apm培養(yǎng)基□組份濃度1.2%(W/V)Tryptone2.4%(W/V)YeatE某tract0.4%(V/V)Glycerol17mMKH2PO472mMK2HPO40.1mg/mLAmpicillin□配制量1L□配置方法配制磷酸鹽緩沖液(0.17MKH2PO4,0.72MK2HPO4)100mL。溶解2.31gKH2P04和2.54gK2HP04于90mL的去離子水中,攪拌溶解后,加去離子水定容至100mL,高溫高壓滅菌。2.稱取下列試劑,置于1L燒杯中。Tryptonel2gYeatE某tract24gGlycerol4mL3.加入約800mL的去離子水,充分攪拌溶解。4.加去離子水將培養(yǎng)基定容至1L后,高溫高壓滅菌待溶液冷卻至60°C以下時,加入100mL的上述滅菌磷酸鹽緩沖液和ImLAmpicillin(100mg/mL)。6.均勻混合后4C保存。8、SOB培養(yǎng)基□組份濃度2%(W/V)Tryptone0.5%(W/V)YeatE某tract0.05%(W/V)NaCl2.5mMKCl10mMMgCl2□配制量IL□配置方法配制250mMKCl溶液。在90mL的去離子水中溶解1.86gKCl后,定容至100mL。配制2MMgCl2溶液。在90mL的去離子水中溶解19gMgCl2后,定容至100mL,高溫高壓滅菌。3.稱取下列試劑,置于1L燒杯中。Tryptone20gYeatE某tract5gNaCl0.5g4.加入約800mL的去離子水,充分攪拌溶解。5量取10mL250mMKCl溶液,加入到燒杯中。6.滴加5NNaOH溶液(約0.2mL),調(diào)節(jié)pH值至7.0。7.加入去離子水將培養(yǎng)基定容至1L。8.高溫高壓滅菌后,4C保存。使用前加入5mL滅菌的2MMgCl2溶液。9、SOC培養(yǎng)基□組份濃度2%(W/V)Tryptone0.5%(W/V)YeatE某tract0.05%(W/V)NaCl2.5mMKCl10mMMgCl220mM葡萄糖□配制量100mL□配置方法配制1M葡萄糖溶液。將18g葡萄糖溶于90mL去離子水中,充分溶解后定容至100mL,用0.22um濾膜過濾除菌。向100mLSOB培養(yǎng)基中加入除菌的1M葡萄糖溶液加L,均勻混合。3.4£保存。10、2某YT培養(yǎng)基□組份濃度1.6%(W/V)Tryptone,1%(W/V)YeatE某tract,0.5%(W/V)NaCl口配制量1L□配置方法1.稱取下列試劑,置于1L燒杯中。Tryptone16gYeatE某tract10gNaCl5g2.加入約800mL的去離子水,充分攪拌溶解。3.滴加1NKOH,調(diào)節(jié)pH值至7.0。4..加水離子水將培養(yǎng)基定容至1L。5.高溫高壓后,4°C保存。11、①b某broth培養(yǎng)基□組份濃度2%(W/V)Tryptone,0.5%(W/V)YeatE某tract,0.5%(W/V)MgSO47H2O□配制量1L□配置方法1.稱取下列試劑,置于1L燒杯中。Tryptone20gYeatE某tract5gMgS047H205g2.加入約800mL的去離子水,充分攪拌溶解。滴加1NKOH,調(diào)節(jié)pH值至7.5。加水離子水將培養(yǎng)基定容至1L。5.高溫高壓后,4C保存。12、NZCYM培養(yǎng)基□組份濃度0.5%(W/V)YeatE某tract40.1%(W/V)CaaminoAcid1%(W/V)NZ胺0.5%(W/V)NaCl0.2%(W/V)MgS047H20□配制量1L□配置方法1.稱取下列試劑,置于1L燒杯中。YeatE某tract5gCaaminoAcid1gNZ胺10gNaCl5gMgSO47H2O2g2.加入約800mL的去離子水,充分攪拌溶解。3.滴加5NNaOH溶液(約0.2mL),調(diào)節(jié)pH值至7.0。4..加水離子水將培養(yǎng)基定容至1L。5.高溫高壓后,4°C保存。13、NZYM培養(yǎng)基□組份濃度0.5%(W/V)YeatE某tractl%(W/V)NZ胺0.5%(W/V)NaCl0.2%(W/V)MgSO47H2O□配置方法NZYM培養(yǎng)基除不含CaaminoAcid(酪蛋白氨基酸)外,其他成份與NZCYM培養(yǎng)基相同。14、NZM培養(yǎng)基□組份濃度1%(W/V)NZ胺0.5%(W/V)NaCl0.2%(W/V)MgS047H20□配置方法NZM培養(yǎng)基除不含YeatE某tract(酵母提取物)外,其他成份與NZYM培養(yǎng)基相同。15、一般固體培養(yǎng)基的□配置方法1.按照液體培養(yǎng)基配方準備好液體培養(yǎng)基,在高溫高壓滅菌前,加入下列試劑中的一種。配制Agar(瓊脂:鋪制平板用)15g/LAgar(瓊脂:配制頂層瓊脂用)7g/LAgaroe(瓊脂糖:鋪制平板用)15g/LAgaroe(瓊脂糖:配制頂層瓊脂用)7g/L2.高溫高壓滅菌后,帶上手套取出培養(yǎng)基,搖動容器使瓊脂或瓊脂糖充分混勻(此時培養(yǎng)基溫度很高,小心燙傷)。3.待培養(yǎng)基冷卻至50?60C時,加入熱不穩(wěn)定物質(zhì)(如抗生素),搖動容器充分混勻。鋪制平板(30?35mL培養(yǎng)基/90mm培養(yǎng)皿)。16、LB/Amp/某-Gal/IPTG□組份濃度1%(W/V)Tryptone平板培養(yǎng)基0.5%(W/V)YeatE某tract1%(W/V)NaCl0.1mg/mLAmpicillin0.5%(W/V)IPTG0.04mg/mL某-Gal1.5%(W/V)Agar□配制量1L□配置方法1.稱取下列試劑,置于1L燒杯中。Tryptone10gYeatE某tract5gNaCl10g2.加入約800mL的去離子水,充分攪拌溶解。滴加5NNaOH溶液(約0.2mL),調(diào)節(jié)pH值至7.0。4.加水離子水將培養(yǎng)基定容至1L后,加入15gAgar。5.高溫高壓滅菌后,冷卻至60°C左右。加入ImLAmpicillin(100mg/mL)、ImLIPTG(24mg/mL)、2mL某-Gal(20mg/mL)后均勻混合。7.鋪制平板(30?35mL培養(yǎng)基/90mm培養(yǎng)基)。8.4C保存平板。17、TB/Amp/某-Gal/IPTG□組份濃度1.2%(W/V)Tryptone平板培養(yǎng)基2.4%(W/V)YeatE某tract0.4%(W/V)Glycerol17mMKH2PO472mMK2HPO40.1mg/mLAmpicillin0.024mg/mLIPTG0.04mg/mL某-Gal1.5%(W/V)Agar□配制量1L□配置方法1.配制磷酸鹽緩沖液(0.17MKH2PO4,0.72MK2HPO4)100mL。稱取下列試劑,置于1L燒杯中。Tryptone12gYeatE某tract24gGlycerol4mL3.加入約800mL的去離子水,充分攪拌溶解。4.加水離子水將培養(yǎng)基定容至1L后,加入15gAgar5.高溫高壓滅菌后,冷卻至60C左右。6.加入100mL的上述滅菌磷酸鹽緩沖液、1mLAmpicillin(100mg/mL)、1mLIPTG(24mg/mL)、2mL某-Gal(20mg/mL)后均勻混合。鋪制平板(30?35mL培養(yǎng)基/90mm培養(yǎng)基)°8.4C保存平板。生物化學實驗常用試劑的配制方法1、0.5mol/L氫氧化鈉溶液□組份濃度0.5mol/L□配制量2L□配置方法1.準確稱取氫氧化鈉40g。2.用去離子水溶解并稀釋至2L。2、0.5mol/L鹽酸溶液□組份濃度0.5mol/L□配制量2L□配置方法1.準確量取鹽酸83.4mLo2.用去離子水稀釋至2L。4、0.2%葡萄糖標準溶液□組份濃度0.2%口配制量1L□配置方法1.稱取葡萄糖2.5g置于稱量瓶中,在70°C干燥2小時。干燥器中冷卻至室溫,重復干燥,冷卻至恒重。5準確稱取葡萄糖2.000go4.用去離子水溶解并定容至1L5.于4C保存。5、250Mg/mL牛血清□組份濃度250ug/mL白蛋白標準液□配制量2L□配置方法1.準確稱取250mg標準牛血清白蛋白。用0.03mol/LpH7.8的磷酸緩沖液溶解并定容至1L°3.4C保存。6、Folin試劑甲□配置方法1.稱取10g氫氧化鈉溶于400mL去離子水中,加入50g無水碳酸鈉,溶解,待用。2.稱取0.5g酒石酸鉀鈉,溶于80mL去離子水中,加入0.25g硫酸銅5水,溶解。將1:2:去離子水按20:4:1的比例混合即可。4.4C保存,可用一周。7、Folin試劑乙□配置方法在500mL的磨口回流裝置內(nèi)加入鴇酸鈉2水25.0359g,鉗酸鈉2水6.2526g,去離子水175mL,85%磷酸12.5mL,濃鹽酸25mL,充分混合。回流10小時,再加硫酸鋰37.5g,去離子水12.5mL及數(shù)滴溴。3.然后開口沸騰15min,以驅(qū)除過量的溴,冷卻后定容到250mL。4.于棕色瓶中保存,可使用多年注意:上述制備地Folin試劑乙地貯備液濃度一般在加ol/L左右,幾種操作方案都是把Folin試劑乙稀釋至1mol/L的濃度作為應用液,我們這時是把貯備液于使用前稀釋18倍,使之濃度為0.1mol/L略高。這種稀釋18倍后的Folin試劑乙就是上文稱之為的“應用液”。Folin試劑乙貯備液濃度的標定,一般是以酚酞為指示劑。用Folin試劑乙去滴定1mol/L左右的標準氫氧化鈉溶液,當溶液顏色由紅變?yōu)樽匣?,再突然變成墨綠即為終點,如果用氫氧化鈉去滴定Folin試劑乙,終點不太好掌握溶液地顏色是由淺黃變?yōu)闇\綠,再變?yōu)榛易仙珵榻K點。8、DNS試劑□配置方法1.取3,5-二硝基水楊酸10g,加入加ol/L氫氧化鈉溶液200mLo(3,5-二硝基水楊酸試劑)2.將3,5-二硝基水楊酸溶解,然后加入酒石酸鉀鈉300go3.待其完全溶解,用去離子水稀釋至2000mL,棕色瓶保存。9、5%蔗糖溶液□組份濃度5%口配制量1L□配置方法稱取蔗糖50g,用去離子水溶解定容至1Lo10、0.1mol/L蔗糖溶液□組份濃度0.1mol/L□配制量1L□配置方法稱取蔗糖34.230g,用去離子水溶解并定容至1Lo11、20%乙酸溶液□組份濃度20%口配制量1.2L□配置方法量取冰乙酸300mL,用去離子水稀釋至1200mL。12、30%(W/V)Acrylamide□組份濃度30%(W/V)Acrylamide0.05%口配制量1L□配置方法1.稱量下列試劑,置于1L燒杯中Acrylamide290gBIS10g2.向燒杯中加入約600mL的去離子水,充分攪拌溶解3.加入去離子水將溶液定容至1L,用0.45um濾膜濾去雜質(zhì)。4.于棕色瓶中4°C保存。注意:丙稀銑胺具有很強的神經(jīng)毒性,并可通過皮膚吸收,其作用有積累性,配制時應戴手套等。聚丙烯酰胺無毒,但也應謹慎操作,因為有可能含有少量的未聚合成份。13、40%(W/V)Acrylamide□組份濃度40%(W/V)Acrylamide0.05%口配制量1L□配置方法1.稱量下列試劑,置于1L燒杯中Acrylamide380gBIS20g2.向燒杯中加入約600mL的去離子水,充分攪拌溶解3.加入去離子水將溶液定容至1L,用0.45um濾膜濾去雜質(zhì)。于棕色瓶中4C保存。注意:丙稀銑胺具有很強的神經(jīng)毒性,并可通過皮膚吸收,其作用有積累性,配制時應戴手套等。聚丙烯酰胺無毒,但也應謹慎操作,因為有可能含有少量的未聚合成份。14、10%(W/V)過硫酸銨□組份濃度10%(W/V)過硫酸銨□配制量10mL□配置方法1.稱取1g過硫酸銨。2.加入10mL的去離子水后攪拌溶解。3.貯存于4C。注意:10%過硫酸胺溶液在4C保存時間可使用2周左右,超過期限會失去催化作用。15、考馬斯亮藍R-250染色液□組份濃度0.1%(W/V)考馬斯亮藍R-250,25%(V/V)異丙醇,10%(V/V)冰醋酸□配制量1L□配置方法1.稱取1g考馬斯亮藍R-250,置于1L燒杯中。2.量取250mL的異丙醇加入上述燒杯中,攪拌溶解。3.加入100mL的冰乙醋酸,均勻攪拌。4.加入650mL的去離子水,均勻攪拌。5.用濾紙出去顆粒物質(zhì)后,室溫保存。16、考馬斯亮藍染色脫色液□組份濃度10%(V/V)醋酸,5%(V/V)乙醇□配制量1L□配置方法1.量取下列溶液,置于1L燒杯中。醋酸100mL乙醇50mLdH2O850mL2.充分混合后使用。17、凝膠固定液□組份濃度50%(V/V)甲醇,10%(V/V)醋酸(SDS-銀氨染色用)□配制量100L□配置方法1.量取下列溶液,置于1L燒杯中。甲醇500mL醋酸100mLdH2O400mL2.均勻混合后室溫保存。18、凝膠處理液□組份濃度50%(V/V)甲醇,10%(V/V)戊二醛(SDS-銀氨染色用)口配制量1L□配置方法1.量取下列溶液,置于1L燒杯中。甲醇50mL戊二醛10mLdH2O40mL2.均勻混合后室溫保存。19、凝膠染色液□組份濃度0.4%(W/V)硝酸銀,1%(V/V)濃氨水,(SDS-銀氨染色用)0.04%(W/V)氫氧化鈉□配制量100L□配置方法1.量取下列試劑,加入100?200mL試劑瓶中。20%硝酸銀2mL濃氨水1mL4%氫氧化鈉1mLdH2096mL2.均勻混合。該溶液應為無色透明狀。如氨水濃度過低時溶液會呈現(xiàn)混濁狀,此時應補加濃氨水,直至透明。3.本染色液應現(xiàn)用現(xiàn)配,不宜保存。20、顯影液□組份濃度0.005%(V/V)檸檬酸,0.02%(V/V)甲醛(SDS-銀氨染色用)□配制量1L□配置方法1.稱取下列試劑,置于1L試劑瓶中。檸檬酸50mg甲醛0.2mL2.加入1L去離子水后,搖動混合后溶解。3.室溫保存。21、45%乙醇溶液□組份濃度45%口配制量1L□配置方法量取無水乙醇450mL,加入去離子水550mL,混勻。22、5%的十二烷基硫酸鈉溶液□組份濃度5%(W/V)口配制量0.1L配置方法:稱取5.0g十二烷基硫酸鈉,溶于100mL4%的乙醇溶液中。23、三氯甲烷-異戊醇混合試劑配置方法取500mL三氯甲烷試劑,加入21mL異戊醇試劑,混勻。24、1.6%乙醛溶液□組份濃度1.6%6□配制量0.1L□配置方法取47%乙醛3.4mL,用去離子水定容至100mL。25、二苯胺試劑□配置方法1.稱取二苯胺試劑0.8g,溶解于180mL冰乙酸中,2.再加入8mL高氯酸混勻。臨用前加入0.8mL1.6%乙醛溶液。注意:配制完成后試劑應為無色。26、15%三氯乙酸溶液□組份濃度15%口配制量2L□配置方法稱取三氯乙酸300g,用去離子水溶解定容至2000mL。27、1%谷氨酸溶液□組份濃度1%口配制量0.5L□配置方法1.稱取5g谷氨酸,先用適量得用去離子水溶解。2.再用氫氧化鉀溶液中和至中性。3.最后用去離子水定容至0.5L。28.1%丙酮酸溶液□組份濃度1%□配制量0.5L77□配置方法1.稱取5g丙氨酸,先用適量得用去離子水溶解。2.再用氫氧化鉀溶液中和至中性。3.最后用去離子水定容至0.5L。29、0.1%的碳酸氫鉀溶液□組份濃度0.1%口配制量0.5L□配置方法稱取碳酸氫鉀0.5g,用去離子水溶解定容至0.5L。30、0.05%的碘乙酸溶液□組份濃度0.05%口配制量0.25L□配置方法稱取0.125g碘乙酸,用去離子水溶解定容至0.25L。31、Locke氏溶液□配制量2L配置方法稱取18g氯化鈉,0.84g氯化鉀,48g氯化鈣,0.3g碳酸氫鈉,2g葡萄糖,用去離子水溶解定容至2000mL。32、0.2mol/L的丁酸溶液口組份濃度0.2mol/L□配制量1L□配置方法1.量取18mL正丁酸試劑。2.用1mol/L的氫氧化鈉中和。3.再用去離子水定容至1L。33、0.1mol/L的硫代硫酸鈉溶液□組份濃度0.1mol/L□配制量10L□配置方法稱248.17g硫代硫酸鈉,用去離子水溶解并定至10L。34、0.1mol/L的碘溶液□組份濃度0.1mol/L□配制量1L□配置方法1.稱取碘12.7g和碘化鉀25g。2.用去離子水溶解并定容至1L。3.用0.1mol/L的硫代硫酸鈉標定。35.10%氫氧化鈉溶液□組份濃度10%口配制量2L□配置方法稱取200g氫氧化鈉,用去離子水溶解并定容至2L。36、10%鹽酸溶液□組份濃度10%口配制量0.2L□配置方法量取濃鹽酸49.3mL,用去離子水定至0.2mL。37、0.1%標準丙氨酸溶液□組份濃度0.1%口配制量0.5L□配置方法稱取丙氨酸0.5g,用去離子水溶解并定容至0.5mL。38、0.1%標準谷氨酸溶液□組份濃度0.1%口配制量0.5L□配置方法稱取谷氨酸0.5g,用去離子水溶解并定容至500mL。39、0.1%水合茚三酮乙醇溶液□組份濃度0.1%口配制量1L□配置方法稱取1g水合茚三酮試劑,溶于1000mL無水乙醇中。40、酚溶液□配置方法在大燒杯中加入80mL去離子水,再加入300g苯酚,在水浴中加熱攪拌、混合至苯酚完全溶解。將該溶液倒入盛有200mL去離子水的1000mL分液漏斗內(nèi),輕輕振蕩混合,使其成為乳狀液。靜止7?10小時,乳狀液變成兩層透明溶液,下層為被水飽和的酚溶液,放出下層,貯存于棕色瓶中備用。41、0.5%淀粉溶液□組份濃度0.5%口配制量0.1L□配置方法稱取淀粉0.5g,用去離子水溶解定容至0.1L。42、對羥基聯(lián)苯試劑配置方法稱取對羥基聯(lián)苯1.5g,溶于100mL0.5%氫氧化鈉溶液中,配制成1.5%的溶液。若對羥基聯(lián)苯顏色較深,應用丙酮或無水乙醇重結(jié)晶,放置時間較長后,會出項針狀結(jié)晶,應搖勻后使用。生物化學實驗常用緩沖液的配制方法1、0.2mol/L磷酸緩沖液□組份濃度0.2mol/L(pH6.0)□配制量1L□配置方法1.稱取磷酸氫二鈉12水8.82g。2.稱取磷酸二氫鈉2水27.34g。3.用去離子水溶解并定容至1L。室溫保存。注意:此為母液,使用時稀釋40倍使用。2、洗脫液□組份濃度0.15mol/L(含0.15mol/L氯口配制量10L化鈉的0.005mol/L□配置方法1.稱取氯化鈉87.66g。pH6.0的磷酸緩沖液)2.用0.2mol/LpH6.0的磷酸緩沖液250mL溶解。3.用去離子水稀釋至10L。室溫保存。3、0.3mol/L磷酸緩沖液□組份濃度0.3mol/L(pH7.8)□配制量0.5L□配置方法1.準確稱取磷酸氫二鈉12水49.150g。2.磷酸二氫鈉2水2.000g。3.用去離子水溶解并定容至0.5L。室溫保存。注意:此為母液,使用時稀釋10倍使用。4、0.2mol/L乙酸緩沖液□組份濃度0.2mol/L(pH4.6)口配制量2L□配置方法1.準確稱取乙酸鈉3水54.44g。2.加入23mL冰乙酸,溶解。3.用去離子水溶解并定容至2L°4°C保存。5、0.2mol/L磷酸-檸檬酸□組份濃度0.2mol/L緩沖液□配制量各1L(pH2.6、4.6、6.6)□配置方法1.母液A(0.2mol/L的Na2HP04溶液):稱取Na2HP0412水143.256g,用去離子水定容至2L。母液B(0.1mol/L的檸檬酸溶液):稱取檸檬酸1水42.028g用去離子水溶解定容至2L。pH2.6、4.6、6.6的三種緩沖液如下表配制:pH值A(mL)B(mL)2.6109.0891.04.6467.5532.56.6727.5272.54.按上表混勻后,4°C保存。6、20某SSC緩沖液□配制量1L(pH7.0)□配置方法1.準確稱取175.2g氯化鈉。2.準確稱取88.2g檸檬酸鈉2水。3.溶解于800mL去離子水中。4.加入數(shù)滴10mol/L氫氧化鈉溶液調(diào)節(jié)pH值至7.0。5.加去離子水定容至1L。注意:按實驗需要可分裝后高壓滅菌。10某SSC、5某SSC、1某SSC可由20某SSC做相應稀釋得到。7、0.15mol/L氯化鈉-□組份濃度0.15mol/L乙二胺四乙酸二鈉□配制量1L緩沖液□配置方法1.準確稱取氯化鈉8.77go(pH8.0)2.稱取乙二胺四乙酸二鈉37.2go3.溶于800mL去離子水中。4.用固體的氫氧化鈉調(diào)pH值為8.0。5?加去離子水定容至1L。8、1/15mol/L的磷酸鹽□組份濃度0.15mol/L緩沖液□配制量1L(pH7.6)口配置方法溶液甲(1/15mol/L的KH2P04溶液):稱取KH2PO49.078g,用去離子水溶解定容至1L。溶液乙(1/15mol/L的Na2HPO4溶液):稱取Na2HPO42水11.876g(或磷酸氫二鈉12水23.894g)用去離子水溶解定容至1L。3.pH7.6磷酸鹽緩沖液:將①和②按1.4:8.6比例混合即可。9、5某Tri-GlycineBuffer□組份濃度0.125MTri,1.25MGlycine,0.5%(w/v)SDS(SDS-電泳緩沖液)□配制量1L□配置方法1.稱取下列試劑,置于1L燒杯中。Tril5.lgGlycine94gSDS5.0g2.加入約800mL的去離子水,攪拌溶解。加去離子水將溶液定容至1L后,室溫保存。10、5某SDS-□組份濃度250mMTri-HCl(pH6.8)LoadingBufferl0%(W/V)SDS80.5%(W/V)BPB50%(V/V)甘油5%(W/V)B-巰基乙醇□配制量5mL□配置方法1.量取下列試劑,置于10mL塑料離心管中。lMTri-HCl1.25mLSDS0.5gBPB25mg甘油2.5mL2.加入去離子水溶解后定容至5mL。3.小份(500^1/份)分裝后,于室溫保存。4.使用前將25卩l(xiāng)的2-ME加到每小份中。5.加入2-ME的LoadingBuffer可在室溫下保存一個月左右生物化學實驗常用柱料數(shù)據(jù)及性質(zhì)1、DEAE陰離子交換纖維素(1)纖維素的處理取纖維素干品用蒸餾水浸泡,充分溶漲并攪拌均勻,過夜。次日再攪勻,靜止30min留下沉集部分(重復3次),用真空泵抽干。然后用適量的0.5mo1/L的氫氧化鈉溶液浸泡30min,抽干,蒸餾水洗至中性;再用適量的0.5mo1/L的鹽酸溶液浸泡30min,抽干,蒸餾水洗至中性;重復用0.5mo1/L的氫氧化鈉溶液浸泡30min,抽干,蒸餾水洗至中性。最后用0.005mo1/LpH6.0的磷酸緩沖液浸泡待用。(2)纖維素的重生回收的纖維素先用0.5mo1/L氯化鈉-0.5mo1/L氫氧化鈉溶液浸泡,再按上述(1)操作處理,即可再次投入使用。3)纖維素的保存回收后,用0.5mol/L氫氧化鈉溶液浸泡30min后,蒸餾水洗至中性,抽干,于鼓風干燥箱中60°C烘干后,保存。2、Sephade某G型葡聚糖凝膠(1)凝膠的特性要點葡聚糖G后面的數(shù)字代表不同的交聯(lián)度,數(shù)值越大交聯(lián)度越小,吸水量越大。其數(shù)值大致為吸水量某的10倍。Sephade某對堿和弱酸穩(wěn)定(在0.1mol/L鹽酸中可以浸泡1?2小時)。在中性時可以高壓滅菌。不同型號中又有顆粒粗細之分。顆粒粗的分離效果差,流速快。顆粒越細分離效果越好,但流速也越慢。交聯(lián)葡聚糖工作時的pH穩(wěn)定在2?11的范圍內(nèi)。葡聚糖G型凝膠分離的分子量分級范圍為700?8某105。Sephade某G型葡聚糖凝膠的數(shù)據(jù)見下表。00G-150G-200某溶脹時要將凝膠浸泡在過量的水或緩沖液中。在整個溶脹過程中應避免劇烈地攪拌,尤其不能使用電磁攪拌,以免破壞了它的顆粒結(jié)構(gòu),以及產(chǎn)生許多碎末而影響洗脫時的流速。(3)凝膠的回收與保存凝膠的再生最好不要在柱上進行(有些凝膠可以在位清洗),可將凝膠在0.5mol/L氯化鈉及0.5mol/L氫氧化鈉的混合溶液中浸泡;一般約需30分鐘以上。然后用蒸餾水洗至中性,最后用緩沖液平衡即可恢復使用。經(jīng)常使用的凝膠,一般加入一些抗菌劑放在普通冰箱中,即可保存較長的時間。如確切在相當長的時間里不準備使用時,則以保存干凝膠為好。處理時可先用較濃的氯化鈉浸泡(如0.5mol/L),在用0.5mol/L的氫氧化鈉處理并用蒸餾水洗至中性,然后用遞增百分比濃度的乙醇分多次作脫水處理。一般可從30%的乙醇開始;每次均應讓凝膠在乙醇中多浸泡一些時間。在無水乙醇處理后,最后再用乙醚處理一次以加速乙醇的揮發(fā)。處理后的凝膠宜在80°C以下的溫度烘干。在進行凝膠的回收時,如在每一步操作時,均使用布氏漏斗抽濾可大大地加快整個回收過程?!咀⒁狻?25725某本表數(shù)值取自PharmaciaBiotechBiodirectoryl996。某某為2.6某30cm層析柱在25C用蒸餾水測定之值。D=Darcy'law(2)凝膠的溶脹某G系交聯(lián)葡聚糖凝膠親水性強,只能在水中溶脹(僅有少量的有機溶劑也可以使之溶脹),有機溶劑或含有有機溶劑較多的水溶液會改變其孔隙,使之收縮失去或降低凝膠的分離能力。在水中溶脹時如在室溫則需要較長時間,才能達到充分溶脹的程度,但可煮沸到100C,以縮短其溶脹時間。見下表Sephade某G型葡聚糖
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