第七章 繁殖技術(shù)

第七章繁殖技術(shù)

第一節(jié)：人工授精技術(shù)

一、人工授精的意義

1、改變了家畜的交配過程（擔(dān)心會改變其性欲），提高了優(yōu)良種公畜（牛）的利用率，一頭種公?？膳淙f頭母牛以上。

2、減少了種公畜的飼養(yǎng)量，節(jié)約了大量的飼養(yǎng)管理費(fèi)。

3、是迅速增殖良種家畜的有效方法。4、克服公、母畜因體格相差太大不易交配或生殖道某些異常不易受胎的困難。5、可防止各種生殖道傳染病（傳染性顆粒陰道炎），前提是人工授精必須遵守操作規(guī)程（消毒器具），只有健康的公母畜才能用作人工授精。6、精液保質(zhì)、輸精適時，有助于消滅母畜的不孕和提高受胎率。二、人工授精（一）發(fā)情鑒定

1、詳細(xì)記錄：心中有數(shù)：哪些牛應(yīng)發(fā)情，哪些牛懷孕。注意對象：配種后18天；產(chǎn)后30天牛；16個月的育成牛

2、勤觀察

1）發(fā)情表現(xiàn)：奶牛在生殖激素的調(diào)節(jié)下，生殖器官和性行為等發(fā)生的一系列變化，以及與此有關(guān)的為精、卵子結(jié)合創(chuàng)造條件的各種生殖生理的周期性變化，如：不安、不食、走動、爬跨、鳴叫。

2）變化：內(nèi)部變化——生殖器官的變化：卵泡、激素——發(fā)情的本質(zhì)變化、子宮、陰道。

外部變化——看到的外部表現(xiàn)和行為變化——陰門腫脹、粘液，爬跨其它牛，食欲加量。為此，發(fā)情鑒定要進(jìn)行內(nèi)部和外部表現(xiàn)進(jìn)行綜合判斷、綜合分析，最后確定輸精時機(jī)，才能有較高的受胎率。發(fā)情母牛駕乘其他母牛具體方法如下：a.外部觀察法：是目前大家多采用的方法發(fā)情前期：哞叫、追爬其它牛，但不接受爬跨，外陰腫脹，潮紅，采食量異常，產(chǎn)奶量下降。發(fā)情中期：哞叫頻繁、接受爬跨并爬跨其它牛，外陰腫脹明顯，皺褶消失，流有粘液，對周圍或雄性動物反應(yīng)敏感。發(fā)情后期：拒絕爬跨，外陰部腫脹明顯消退，皺褶恢復(fù)，流出透明液體。有些學(xué)者認(rèn)為，發(fā)情檢出率與觀察次數(shù)成正相關(guān);每天觀察次數(shù)（次）1234發(fā)情檢出率（%）618091100

早6點(diǎn)——中午：20%牛有發(fā)情癥狀晚6點(diǎn)——午夜：25%牛有發(fā)情癥狀中午——晚6點(diǎn)：10%牛有發(fā)情癥狀午夜——早6點(diǎn)：43%牛有發(fā)情癥狀（因此，越早或越晚觀察越好?。゜.試情法：根據(jù)母牛在接近公牛時的親疏行為表現(xiàn)來判斷其發(fā)情程度：發(fā)情時通常表現(xiàn)愿意接近公牛，弓腰舉尾，后肢開張，頻頻排尿，有求配動作。c.電測法：陰道內(nèi)粘液電流值為82—94MA，電阻值為25—15KΩ時輸精最好，受胎率最高。有人試驗(yàn)：電測頭數(shù)輸精次數(shù)電流電阻妊娠頭受胎率153150頭92—9425—1513288%d.PH值測定法：發(fā)情周期中生殖道粘液的PH值呈現(xiàn)一定的變化，母牛子宮頸粘液PH值一般在6.0-7.8范圍之間，而發(fā)情時呈弱酸性（抵制細(xì)菌），有人試驗(yàn)PH在6.8-6.6時，輸精的受胎率最高。（但宮頸粘液比陰道粘液酸度大，取出時變小）e.宮頸粘液涂片法：粘液浮片——干燥——鏡檢發(fā)情盛期：鏡檢涂片呈羊齒狀花紋，結(jié)晶花紋曲型，排列長而整齊，持續(xù)時間長，雜物少發(fā)情末期：結(jié)晶結(jié)構(gòu)較短，保持時間較短，白細(xì)胞較多，少數(shù)牛宮頸涂片不呈結(jié)晶狀態(tài)，受胎率較低f.陰門粘膜色澤變化來判定適宜輸精時機(jī)：認(rèn)為母牛陰門粘膜呈干、澀、沾貼感、色澤由潮紅——粉紅（或近粉白時），為輸精適期。g.生殖激素測定法：應(yīng)用激素測定技術(shù)（放射免疫測定法，酶免疫測定法等）可精確測出孕酮的含量，判定是否發(fā)情。h.直腸檢查方法：此法是常用的方法，世界各國都在用，而且仍為最有效和最準(zhǔn)確的方法，當(dāng)觸摸到卵泡大而柔軟、波動感強(qiáng)，似成熟的葡萄狀，有一觸即潰的感覺時，即可考慮輸精。（二）輸精時機(jī)選擇最適宜的時間輸精，才能保證生活力強(qiáng)的精子和卵子在受精部位相遇，才能提高受胎率。1、一般建議在接受爬跨后6小時進(jìn)行第一次輸精，再過8小時進(jìn)行第二次輸精。2、發(fā)情后10-20小時（或排卵前10—20小時）輸精。3、早上發(fā)情的母牛占總發(fā)情母牛的3/4：

午前配種的受胎率為69.90%中午—晚上之間配種的為68.90%晚6時以后配種為68.9%到次日中午前配種的受胎率僅為62.7%

4、傍晚母牛發(fā)情

次日早6時配種妊娠率為62%次日上午到下午兩點(diǎn)配種，妊娠率為67.4%次日下午2時后到第三日配種妊娠率為63.8%

早上發(fā)情晚上配，晚上發(fā)情第二天早上配，但問題是：①個體牛可能發(fā)現(xiàn)發(fā)情早些。②牛場牛早晚兩次觀察發(fā)情，觀察到時已晚了。③并非所有的牛都是接受配種18小時后排卵，14小時排卵。④并非一定在理論時間授精，例如美國的專職人員每兩天去一次牛場，晚幾小時的事是經(jīng)常的，但不一定配種率低。5、壯年牛，拒爬后5-6小時，受精率達(dá)89.6%青年牛：拒爬后7-8小時，受胎率達(dá)85.5%

6、產(chǎn)后奶牛的最佳配種時期產(chǎn)后奶牛以76-85天配種受胎率最高，輸精時間在排卵前為好。許多報(bào)道認(rèn)為，夜間一次輸精可比常規(guī)配種受胎率高8.18%，因?yàn)榇蠖鄶?shù)母牛在夜間和凌晨排卵。夜間母牛處于安靜狀態(tài)，內(nèi)分泌功能相對穩(wěn)定，精卵結(jié)合可正常進(jìn)行。

7、發(fā)情鑒定和輸精口訣發(fā)情初期有特點(diǎn)，接近公牛又疏遠(yuǎn)，陰道流出水樣液，母?；仡^左右看，以上特點(diǎn)是“跑欄”，跟蹤觀察別怠慢；發(fā)情盛期不一般，精神緊張采食減，互相爬跨讓交配，陰道液體亮多粘，表現(xiàn)明顯是“穩(wěn)欄”，不是凍配好時間，發(fā)情末期細(xì)察看，不讓爬跨距離遠(yuǎn)，陰道液黃粘度大，末期正是配種前，再過八至十二時，準(zhǔn)確輸精莫遲延，觸摸卵巢細(xì)體會，濾泡壁薄波動顯，個體之間有差異，或前或后將排卵，優(yōu)質(zhì)精液準(zhǔn)備妥，深部輸精好經(jīng)驗(yàn)。（三）授精1、凍精質(zhì)量檢查：由于貯存、運(yùn)輸和磁場等都對精液品質(zhì)產(chǎn)生一定的影響，故一定時間內(nèi)應(yīng)對液氮罐中的精液進(jìn)行質(zhì)量檢查。

1）精子的活力（具有直線運(yùn)動能力的精子）不應(yīng)低于0.3，精子畸形率在20%以下，精子頂體異常率不超過5.9%，方可用于人工授精。2）微生物污染指標(biāo)：精液中不應(yīng)含有病原微生物，特別是某些傳染病的病原。按ISO標(biāo)準(zhǔn)，增減4小時，每ml精液中微生物不應(yīng)超過500個。3）防止液氮罐的污染，液氮罐中的細(xì)菌并非都能凍死，故一定時間內(nèi)應(yīng)清洗消毒液氮罐。4）使用器械的嚴(yán)格消毒，輸精槍放置中，灰塵污染，所致配種率低和流產(chǎn)。

5）輸精器械室內(nèi)要定期消毒，室內(nèi)不能存放有毒試劑和使用強(qiáng)烈刺激性氣味的消毒劑。個人衛(wèi)生：酒、煙2、精液解凍

關(guān)于解凍方法很多，報(bào)道中每種受胎率也不一樣。目前報(bào)道很雜，列舉以下幾種方法供參考。1）低溫解凍：解凍后需要運(yùn)輸?shù)捷^遠(yuǎn)的輸精點(diǎn)，輸精時，最好以冰水解凍為宜，即使高溫，水溫不應(yīng)超過10℃。解凍后運(yùn)輸應(yīng)盡量保持恒溫。

2）室溫下自然解凍：利用室溫環(huán)境，自然解凍，此法不可取，因?yàn)槭覝叵嗖钐珣沂狻?）手搓法解凍：用于細(xì)管凍精，手搓凍精5-7分鐘，60-90分鐘后輸精，受胎率為63.9%（黃牛）。4）不解凍：將細(xì)管取出后即裝入輸精槍內(nèi)，迅速直腸把握將精液緩慢輸入到子宮體分叉處，此法時間短，受胎率可達(dá)75%，而對照組用40℃水溫加熱解凍，受胎率僅為58.7%。5）32，34，35，37，38，40℃水溫解凍，發(fā)現(xiàn)37℃水溫時，精子活力最高，受胎率比40℃水溫平均提高10.2%（HSMS96.12.）；還有人用40℃水浴解凍4-5秒即輸精，受胎率為62%；而用35℃水浴解凍，受胎率僅有57.10%。6）高溫短時解凍法：①有人試驗(yàn)用70℃10秒；75℃8秒；40℃20秒解凍結(jié)果是70℃和75℃的解凍溫度，精子活力分別比對照組高0.25和0.276，受胎率分別達(dá)到81.4%和59.1%，比對照組高24.9個百分點(diǎn)。70℃（8-10秒）60℃（8-10秒）40℃活力：0.70.550.37受胎率：82.27%69.17%56.56%②顆粒凍精的解凍溫度提高溫度可提高活力，但耗能多，存活的時間短。總之，類似的報(bào)道很多，從報(bào)道的結(jié)果看，不同的解凍溫度確實(shí)有不同的受胎效果，各人應(yīng)根據(jù)具體情況，結(jié)合實(shí)際，建立自己的解凍方法以獲得較好的受胎率。

7）顆粒凍精用VB12解凍比檸檬酸鈉解凍效果好。例：提出精液的時間不應(yīng)超8秒，一般應(yīng)在3-5秒鐘內(nèi)，解凍后應(yīng)在15分鐘內(nèi)使用。例：最后的精液效果不良，因?yàn)榉磸?fù)提出放入會影響精液質(zhì)量。3、輸精方法及部位

1）輸精方法：a.開膣器輸精法（擴(kuò)大陰道，手電光找宮頸外口，子宮頸內(nèi)1-2cm），操作簡單容易愛精率低。b.直腸把握輸精：注意問題：

A、右手直檢，右手入：左手直檢，熟練后應(yīng)用雙手，以免一只手受傷。

B、一次性的長臂手套只能用一次，防止傳染疾病。

C、站在牛的左、右后側(cè)，全身放松并隨牛移動，手伸入直腸后，再插入輸精槍，更衛(wèi)生的做法是先插槍后伸手。

D、盡可能不用肥皂水或消毒液（水）（刺激直腸，殺死精子）防止手伸入伸出帶入空氣。

E、防止輸精槍頭接觸陰唇（后拉直腸，放面巾紙，扒開陰唇）。

2）母牛外陰部的消毒，清水洗凈、擦干，防止污染，輸精器具要徹底消毒，每輸一頭牛換一支輸精管，以防交叉感染。例：返情率高的原因多數(shù)是隱性流產(chǎn)所致，隱性流產(chǎn)的原因是仔畜的不潔環(huán)境。實(shí)驗(yàn)表明：100頭牛的發(fā)情鑒定率為100%，全部輸精，一次配種最多有55頭牛分娩，其余的45頭中有10-15未受精，15-20頭胚胎在配后13天內(nèi)死亡，10頭在14-42天內(nèi)死亡，5頭胚胎死于42天以后。原因是35%的胚胎在配種后40天死亡，原因是消毒不徹底的革蘭氏陰性菌進(jìn)入子宮——PGF2a——消黃——流產(chǎn)?？梢娦l(wèi)生及嚴(yán)格消毒的重要性。

3）輸精部位的選擇：可將精液輸?shù)阶訉m頸口1-2cm處，宮頸中部3-4cm處，宮頸深部5-8cm處，子宮角分叉部和子宮角內(nèi)。但據(jù)報(bào)道不同的輸精部位，受胎率不一樣。

沈文武：中國奶牛1988.4.26-27,關(guān)于最佳輸精部位的探討①子宮頸口稍內(nèi)輸精，受精率為36.36%②子宮角分叉處輸精受胎率為50%③2/3的精液輸?shù)桨l(fā)育卵泡側(cè)子宮角內(nèi)，1/3輸?shù)襟w分叉處，結(jié)果受胎率68.18%。④1/2輸?shù)脚怕褌?cè)子宮角內(nèi)，1/4到另一側(cè)角內(nèi)，1/4到子宮體分叉處，受胎率為77.7%。

有人認(rèn)為：精液應(yīng)輸?shù)阶訉m頸前端（即子宮體后，子宮角分叉前）。因?yàn)閍、因?yàn)槲丛凶訉m松軟，過子宮頸再向前很容易穿入子宮組織——透創(chuàng)+腹膜炎+不孕

b、如果輸精部位較淺，易造成精子外流

c、雌性動物生殖道局部粘膜有體液免疫和細(xì)胞免疫，例如，可產(chǎn)生IgG，IgA和某些白細(xì)胞，而子宮頸內(nèi)外粘膜處的抗體生成細(xì)胞的數(shù)量最多，提示，在輸精時可考慮越過子宮頸，以免發(fā)生免疫排斥現(xiàn)象，分叉部輸精克服了此缺點(diǎn)。母?？贵w的檢查方法：精液一滴+母牛血清一滴（或陰道分泌物），蓋玻璃片鏡檢，有凝集現(xiàn)象說明有抗精子抗體。試驗(yàn)：用小鼠的精子免疫小鼠，其妊娠率只有44%，對照組為100%，三、提高母牛受胎率的方法許多作者都試圖在母牛輸精前后采取措施，以提高其受胎率，有關(guān)報(bào)道很多，結(jié)果也各說不一，但歸納起來有兩大類，一類以清理子宮內(nèi)環(huán)境為主，另一類為應(yīng)用激素制劑調(diào)節(jié)，現(xiàn)就我所知道和資料中報(bào)道的介紹幾種。1、子宮內(nèi)注藥1）配種前注（8-12小時）注（80+100）青鏈毒素，受胎率達(dá)48.94%2）配種后注8-12小時，80+100萬單位，受胎率達(dá)58.62%當(dāng)然，這要根據(jù)具體情況具體對待，不能所有牛都子宮內(nèi)注藥，對不孕牛或?qū)遗洳辉姓呖墒┐朔椒?，對正常牛?dāng)然大可不必，消毒不嚴(yán)可引起感染。也可輸其它藥，如乳酸環(huán)丙沙星。2、其他3）促排2號（3號）或hCG，對排卵延遲或遲緩的奶牛在輸精前一次肌肉注射促排2-3號200Mg或hCG1000IU可增強(qiáng)排卵效果。

4）輸精當(dāng)天和第5-6天，肌肉注射VA57.5萬國際單位、VD310萬國際單位和維生素E50毫克。對產(chǎn)后120天以上，輸精超過一個情期又發(fā)情及屢配不孕母牛，輸精后肌注VE500毫克。5）新斯的明配種前15-20分鐘肌肉注射0.5%的新斯地明2ml可提高受胎率，道理不清楚，但認(rèn)為可能引起宮腔內(nèi)催產(chǎn)素的釋放有關(guān)，所以有人直接用催產(chǎn)素。6）輸精后5-7分鐘，肌肉注射催產(chǎn)素40IU，有利精卵結(jié)合7）孕酮：輸精前肌注40-60mg孕酮對延期排卵和卵泡發(fā)育不成熟有效，輸精后10天肌注孕酮60mg有助于維持妊娠8）促性腺激素釋放激素：輸精時1次肌注GnRH10-20Mg或GnRH類似物100微克或LRH-A3200-400微克綜上可見，提高奶牛受胎率的方法很多，并且都有較好的效果，并且公說公有理，誰說都有理，所以我想要具體情況具體對待，不能一概而論，上述方法只應(yīng)對難配準(zhǔn)的牛（是否是自己的配種技術(shù)不良造成的；是由于病態(tài)造成的——應(yīng)用上述方法）四、妊娠診斷及注意事項(xiàng)奶牛妊娠診斷具有重要作用，妊娠是人工授精成功與否的直接判定，也是奶牛繁殖和產(chǎn)奶的前提，及時進(jìn)行妊娠診斷是提高生產(chǎn)力，減少空懷率的重要手段，所以配種員應(yīng)把妊娠診斷當(dāng)做一項(xiàng)大事來對待。對配種后17-20天的牛注意觀察是否返情對配后60天的牛及時做妊娠檢查，以確認(rèn)其是否妊娠，未妊者再參加配種，妊娠者加強(qiáng)飼養(yǎng)管理，以防流產(chǎn)。

1、外部檢查：母畜被毛光亮，膘情良好，食欲好，不再發(fā)情，性情溫順、安祥、動作謹(jǐn)慎等可能懷孕。

2、陰道檢查：

1）陰道粘膜蒼白，有少許濃稠分泌物，子宮口關(guān)閉，有粘液塞。

2）取少量子宮陰道分泌物，加入比重1.0的CuSO4溶液中，出現(xiàn)塊狀沉淀者為妊娠，30天以上即可檢出。

3）附近取子宮液混于凈水中煮沸1-2分，凝固的為妊娠。

4）取子宮頸口粘液于載片上，粘著性很強(qiáng)的果胨狀為妊娠。

5）少量子宮分泌物，加入10%茍性鈉2-3滴，混合煮沸，全部溶解，呈現(xiàn)褐色或橙色的為妊娠。

3、直腸檢查法：

1）子宮頸拉長，位于骨盆腔中，頸細(xì)而堅(jiān)實(shí)。

2）子宮膨大而柔軟、波動感明顯。

3）排卵側(cè)卵巢有黃體存在，24天后檢查依舊。馬的直腸檢查4、激素法：授精后20天，肌肉注射10ml/頭乙烯雌酚孕牛第二天不表現(xiàn)發(fā)情為陽性。

5、測孕酮：配種后20天分別檢測血漿中或尿中孕酮含量，如達(dá)到10ng/ml和20ng/ml以上者為陽性。

6、血清學(xué)檢查：配后16天，取血清0.5ml于烘杯中，加入0.2NHCL7.5ml，混合1-2分鐘，用13%HNO3滴定到PH為0.68，室溫下靜止20分鐘，以黑色背景在透射光下觀察，呈觀乳色的為妊娠，此法準(zhǔn)確率達(dá)93-97%。

7、牛奶檢查：取0.5-1ml牛奶加3%CuSO41ml,凝固者為妊娠，也可取鮮牛奶5ml加95%酒精1ml，5分鐘凝固的為妊娠，30分鐘以后凝固的為未妊娠。

8、超聲波診斷超聲波診斷儀五、建立完備的授精繁殖記錄

1、授精記錄：牛號、授精時間、次數(shù)、精號，情后期表現(xiàn)，排卵側(cè)卵