蛛香對(duì)高脂血癥大鼠血脂及肝功能的影響

蛛香對(duì)高脂血癥大鼠血脂及肝功能的影響

2010年版《中國(guó)藥典》（第一卷）稱其“功能性理氣止痛、消食止痛、祛風(fēng)除濕、鎮(zhèn)靜安神、上腹部疼痛、飲食不足、腹瀉、濕熱、腰膝疼痛、失眠”。高脂血癥為臨床上常見(jiàn)病、多發(fā)病,隨著人們生活水平不斷提高,生活方式也隨之發(fā)生改變,其發(fā)病率逐年增加,嚴(yán)重威脅著人們的生命健康。本研究通過(guò)高脂飲食建立實(shí)驗(yàn)性高脂血癥大鼠模型,探討了蜘蛛香對(duì)高脂血癥大鼠血脂水平及肝功能的影響,從而為其防治高脂血癥及其相關(guān)疾病提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)。1材料表面1.1動(dòng)物SPF級(jí)SD大鼠,雌雄各半,體重(170±10)g,由成都達(dá)碩生物科技有限公司提供。合格證號(hào)SCXK(川)2008-24。1.2敗醬科草屬植物蛛蛛香材料蜘蛛香,購(gòu)于貴州遵義藥材市場(chǎng),經(jīng)由西南交通大學(xué)生命科學(xué)與工程學(xué)院宋良科副教授鑒定,確認(rèn)為敗醬科纈草屬植物蜘蛛香(ValerianajatamansiJones)藥材的根及根莖。洛伐他汀膠囊(20mg/粒),江蘇大洋制藥有限公司生產(chǎn),批號(hào)091201。1.3博星生物技術(shù)有限責(zé)任蛋黃粉(批號(hào)20110319),江蘇西美食品科技有限公司生產(chǎn);膽固醇(批號(hào)110204),安徽天啟化工有限有限公司生產(chǎn);牛膽鹽(批號(hào)20110318),北京奧博星生物技術(shù)有限責(zé)任公司生產(chǎn);羧甲基纖維素鈉(CMC-Na,批號(hào)20100813),成都市科龍化工試劑廠生產(chǎn);總膽固醇(TC,批號(hào)20110303)、甘油三酯(TG,批號(hào)20110302)、低密度脂蛋白膽固醇(LDL-C,批號(hào)0110312)和高密度脂蛋白膽固醇試劑盒(HDL-C,批號(hào)20110303),均為北京北化康泰臨床試劑有限公司生產(chǎn);丙氨酸轉(zhuǎn)氨酶(ALT,批號(hào)20110601)和天冬氨酸轉(zhuǎn)氨酶試劑盒(AST,批號(hào)20110530),均為南京建成生物工程研究所生產(chǎn)。1.4儀器、試劑與儀器RE52-86A旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀(上海亞榮生化儀器廠),BS224S1/萬(wàn)精密電子天平(北京賽多利斯儀器系統(tǒng)有限公司),DY89-Ⅱ電動(dòng)玻璃勻漿機(jī)(寧波新芝生物科技股份有限公司),TGL-16臺(tái)式高速冷凍離心機(jī)(長(zhǎng)沙湘儀離心機(jī)儀器有限公司),MultiskanSpectrum全波長(zhǎng)酶標(biāo)儀(賽默飛世爾科技有限公司)。2方法2.1生藥濃度、洛伐他汀溶液的配制蜘蛛香乙醇提取物:蜘蛛香藥材分別加10倍量80%乙醇、40KHz超聲90min提取兩次,合并兩次濾液,40℃旋蒸揮去乙醇,用0.5%CMC-Na溶液配成分別含生藥0.3,0.15,0.075g·mL-1的高、中、低3種濃度。洛伐他汀溶液:用0.5%CMC-Na將洛伐他汀配成0.2g·L-1的溶液。以上藥物密封,置4℃冰箱中冷藏備用。2.2b喂普通飼料普通飼料大鼠適應(yīng)實(shí)驗(yàn)環(huán)境3d后,隨機(jī)分出10只(雌雄各半)為空白對(duì)照組,喂飼普通飼料;其余大鼠喂飼高脂飼料(78.8%基礎(chǔ)飼料+10%豬油+10%蛋黃粉+1%膽固醇+0.2%膽鹽),進(jìn)行高脂血癥動(dòng)物模型造模。2.3給藥及ig的給藥情況造模25d后,將造模大鼠隨機(jī)分為5組(模型對(duì)照組、洛伐他汀組、蜘蛛香乙醇提取物高、中、低劑量組),每組10只,雌雄各半,加造模前分出的空白對(duì)照組共6組?？瞻捉M仍喂飼普通飼料,其他組仍喂飼高脂飼料,同時(shí)給藥,其中蜘蛛香乙醇提取物低、中、高3個(gè)劑量組分別按1.25,2.5,5g·kg-1每日ig給藥1次;洛伐他汀組按3mg·kg-1給予洛伐他汀每日ig給藥1次;模型對(duì)照組和空白對(duì)照組分別ig等體積的0.5%CMC-Na溶液,各組連續(xù)給藥14d。2.4指標(biāo)檢測(cè)2.4.1冷凍離心分析組最后1次ig后禁食12h,不禁水,股動(dòng)脈取血,高速冷凍離心機(jī)4000r·min-1離心10min,取上清液制得血清樣本。按檢測(cè)試劑盒說(shuō)明方法,用全波長(zhǎng)酶標(biāo)儀,測(cè)定血清TC,TG,HDL-C,LDL-C含量。2.4.2血清al，ast測(cè)定2.4.3組織勻漿的制備各組大鼠取血后,迅速取出肝,冰生理鹽水沖洗、濾紙吸濕后,稱取濕重0.3g左右,按質(zhì)量體積比1∶9加入預(yù)冷的生理鹽水,冰水中用電動(dòng)勻漿機(jī)制成10%肝勻漿,高速冷凍離心機(jī)4℃6000r·min-1離心5min,取上清制得肝組織勻漿。按檢測(cè)試劑盒說(shuō)明方法,測(cè)定肝組織TC,TG含量。2.5處理數(shù)據(jù)采用SPSS13.0對(duì)數(shù)據(jù)進(jìn)行單因素方差分析,進(jìn)行各組間比較,后采用t檢驗(yàn)。各組實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)用表示。P<0.05具有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。3結(jié)果3.1影響大鼠血清和肝組織的脂質(zhì)生化指標(biāo)3.1.1空白對(duì)照組p>0.05,p>0.05由表1可見(jiàn),模型對(duì)照組血清及肝組織TC含量明顯高于空白對(duì)照組(P<0.01),血清及肝組織TG也顯著高于空白對(duì)照組(P<0.05,P<0.01)。與模型對(duì)照組相比,洛伐他汀及蜘蛛香高、中、低劑量對(duì)血清TC含量的影響均無(wú)顯著性差異,蜘蛛香中、低劑量都具有降低肝組織TC的作用(P<0.01),蜘蛛香高、中劑量均能降低血清TG含量(P<0.01),而對(duì)于肝組織TG,蜘蛛香3個(gè)劑量組都具有明顯的降低作用(P<0.01)。3.1.2織物對(duì)血清ldl-c含量的影響由表2可見(jiàn),模型對(duì)照組血清LDL-C含量明顯高于空白對(duì)照組(P<0.01),與模型對(duì)照組比較,蜘蛛香3個(gè)劑量組血清LDL-C含量都沒(méi)有顯著變化;而對(duì)于血清HDL-C含量,模型對(duì)照組和空白對(duì)照組沒(méi)有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異,陽(yáng)性藥洛伐他汀組及蜘蛛香高、中劑量組卻明顯降低(P<0.01)。3.2對(duì)比兩組正常組和正常組一般組由表3可見(jiàn),模型對(duì)照組血清ALT,AST活性明顯高于正常組。與模型對(duì)照組比較,蜘蛛香高、中劑量能顯著降低血清ALT活性(P<0.01),中劑量能顯著降低血清AST活性(P<0.01)。4對(duì)慢性高血壓大鼠血脂的影響高脂血癥是導(dǎo)致動(dòng)脈粥樣硬化和冠心病等多種心腦血管疾病發(fā)生的重要因素。目前臨床常用西藥長(zhǎng)期服用均有一定的副作用,且停藥后血脂回升情況也較普遍。而中藥降血脂作用在中醫(yī)藥理論指導(dǎo)下,具有療效穩(wěn)定,副作用小的一些特點(diǎn)。本課題組前期在對(duì)蜘蛛香的研究中,發(fā)現(xiàn)蜘蛛香醇提物給藥組實(shí)驗(yàn)動(dòng)物飲食正常、精神良好,但較其他組動(dòng)物體重明顯減輕的現(xiàn)象,啟示了本實(shí)驗(yàn)研究。從現(xiàn)代醫(yī)學(xué)研究來(lái)講,高脂血癥為血脂異常或血脂紊亂的慣稱,是指人體內(nèi)血液中一種或多種脂質(zhì)成分異常升高,超出正常范圍。血脂是指血液中所含脂類的總稱,包括:甘油三酯(TG)、膽固醇(TC)及其酯、磷脂和游離脂肪酸等。血脂在與血漿中的蛋白質(zhì)結(jié)合,形成溶解度大的脂蛋白復(fù)合體而運(yùn)輸。各種脂蛋白可分為4類:乳糜微粒(CM)、極低密度脂蛋白(VLDL)、低密度脂蛋白(LDL)、高密度脂蛋白(HDL)。TC,TG為血管粥樣斑塊的構(gòu)成物質(zhì),LDL可進(jìn)入血管內(nèi)壁而促使TC沉積,增高的血漿膽固醇(TC)、甘油三酯(TG)可通過(guò)改變凝血系統(tǒng)和纖溶系統(tǒng)的功能,促進(jìn)血栓形成,加快動(dòng)脈粥樣硬化的形成和發(fā)展,從而導(dǎo)致心血管疾病的發(fā)生。從本實(shí)驗(yàn)結(jié)果可以看出,模型對(duì)照組血清TC,TG,LDL-C及肝組織中TC,TG含量較空白對(duì)照組明顯增高,說(shuō)明本實(shí)驗(yàn)中高脂血癥模型復(fù)制成功。蜘蛛香高、中劑量組能夠顯著降低實(shí)驗(yàn)性高脂血癥大鼠血清中的TG,高、中、低劑量均能顯著降低肝組織中TG,中、低劑量對(duì)肝組織TC也有明顯的降低作用,這表明中藥蜘蛛香具有一定的降低實(shí)驗(yàn)性高脂血癥大鼠血脂的作用,其中對(duì)肝組織、血清TG和血清TC的降低作用比較明顯。由于脂蛋白錯(cuò)綜復(fù)雜的網(wǎng)狀代謝過(guò)程,影響TC,TG代謝的因素較多,其機(jī)制有待進(jìn)一步研究。ALT主要存在于肝細(xì)胞漿中,而在肝細(xì)胞損害、壞死甚至在細(xì)胞變性時(shí)會(huì)釋放到血清中使血清ALT升高,為最敏感的肝功能檢測(cè)指標(biāo)之一。AST在心肌中含量最高,其次為肝臟,當(dāng)肝損傷時(shí),血清中AST可明顯升高。通