蛛香對高脂血癥大鼠血脂及肝功能的影響

蛛香對高脂血癥大鼠血脂及肝功能的影響

2010年版《中國藥典》（第一卷）稱其“功能性理氣止痛、消食止痛、祛風除濕、鎮(zhèn)靜安神、上腹部疼痛、飲食不足、腹瀉、濕熱、腰膝疼痛、失眠”。高脂血癥為臨床上常見病、多發(fā)病,隨著人們生活水平不斷提高,生活方式也隨之發(fā)生改變,其發(fā)病率逐年增加,嚴重威脅著人們的生命健康。本研究通過高脂飲食建立實驗性高脂血癥大鼠模型,探討了蜘蛛香對高脂血癥大鼠血脂水平及肝功能的影響,從而為其防治高脂血癥及其相關疾病提供實驗依據。1材料表面1.1動物SPF級SD大鼠,雌雄各半,體重(170±10)g,由成都達碩生物科技有限公司提供。合格證號SCXK(川)2008-24。1.2敗醬科草屬植物蛛蛛香材料蜘蛛香,購于貴州遵義藥材市場,經由西南交通大學生命科學與工程學院宋良科副教授鑒定,確認為敗醬科纈草屬植物蜘蛛香(ValerianajatamansiJones)藥材的根及根莖。洛伐他汀膠囊(20mg/粒),江蘇大洋制藥有限公司生產,批號091201。1.3博星生物技術有限責任蛋黃粉(批號20110319),江蘇西美食品科技有限公司生產;膽固醇(批號110204),安徽天啟化工有限有限公司生產;牛膽鹽(批號20110318),北京奧博星生物技術有限責任公司生產;羧甲基纖維素鈉(CMC-Na,批號20100813),成都市科龍化工試劑廠生產;總膽固醇(TC,批號20110303)、甘油三酯(TG,批號20110302)、低密度脂蛋白膽固醇(LDL-C,批號0110312)和高密度脂蛋白膽固醇試劑盒(HDL-C,批號20110303),均為北京北化康泰臨床試劑有限公司生產;丙氨酸轉氨酶(ALT,批號20110601)和天冬氨酸轉氨酶試劑盒(AST,批號20110530),均為南京建成生物工程研究所生產。1.4儀器、試劑與儀器RE52-86A旋轉蒸發(fā)儀(上海亞榮生化儀器廠),BS224S1/萬精密電子天平(北京賽多利斯儀器系統有限公司),DY89-Ⅱ電動玻璃勻漿機(寧波新芝生物科技股份有限公司),TGL-16臺式高速冷凍離心機(長沙湘儀離心機儀器有限公司),MultiskanSpectrum全波長酶標儀(賽默飛世爾科技有限公司)。2方法2.1生藥濃度、洛伐他汀溶液的配制蜘蛛香乙醇提取物:蜘蛛香藥材分別加10倍量80%乙醇、40KHz超聲90min提取兩次,合并兩次濾液,40℃旋蒸揮去乙醇,用0.5%CMC-Na溶液配成分別含生藥0.3,0.15,0.075g·mL-1的高、中、低3種濃度。洛伐他汀溶液:用0.5%CMC-Na將洛伐他汀配成0.2g·L-1的溶液。以上藥物密封,置4℃冰箱中冷藏備用。2.2b喂普通飼料普通飼料大鼠適應實驗環(huán)境3d后,隨機分出10只(雌雄各半)為空白對照組,喂飼普通飼料;其余大鼠喂飼高脂飼料(78.8%基礎飼料+10%豬油+10%蛋黃粉+1%膽固醇+0.2%膽鹽),進行高脂血癥動物模型造模。2.3給藥及ig的給藥情況造模25d后,將造模大鼠隨機分為5組(模型對照組、洛伐他汀組、蜘蛛香乙醇提取物高、中、低劑量組),每組10只,雌雄各半,加造模前分出的空白對照組共6組?？瞻捉M仍喂飼普通飼料,其他組仍喂飼高脂飼料,同時給藥,其中蜘蛛香乙醇提取物低、中、高3個劑量組分別按1.25,2.5,5g·kg-1每日ig給藥1次;洛伐他汀組按3mg·kg-1給予洛伐他汀每日ig給藥1次;模型對照組和空白對照組分別ig等體積的0.5%CMC-Na溶液,各組連續(xù)給藥14d。2.4指標檢測2.4.1冷凍離心分析組最后1次ig后禁食12h,不禁水,股動脈取血,高速冷凍離心機4000r·min-1離心10min,取上清液制得血清樣本。按檢測試劑盒說明方法,用全波長酶標儀,測定血清TC,TG,HDL-C,LDL-C含量。2.4.2血清al，ast測定2.4.3組織勻漿的制備各組大鼠取血后,迅速取出肝,冰生理鹽水沖洗、濾紙吸濕后,稱取濕重0.3g左右,按質量體積比1∶9加入預冷的生理鹽水,冰水中用電動勻漿機制成10%肝勻漿,高速冷凍離心機4℃6000r·min-1離心5min,取上清制得肝組織勻漿。按檢測試劑盒說明方法,測定肝組織TC,TG含量。2.5處理數據采用SPSS13.0對數據進行單因素方差分析,進行各組間比較,后采用t檢驗。各組實驗數據用表示。P<0.05具有統計學差異。3結果3.1影響大鼠血清和肝組織的脂質生化指標3.1.1空白對照組p>0.05,p>0.05由表1可見,模型對照組血清及肝組織TC含量明顯高于空白對照組(P<0.01),血清及肝組織TG也顯著高于空白對照組(P<0.05,P<0.01)。與模型對照組相比,洛伐他汀及蜘蛛香高、中、低劑量對血清TC含量的影響均無顯著性差異,蜘蛛香中、低劑量都具有降低肝組織TC的作用(P<0.01),蜘蛛香高、中劑量均能降低血清TG含量(P<0.01),而對于肝組織TG,蜘蛛香3個劑量組都具有明顯的降低作用(P<0.01)。3.1.2織物對血清ldl-c含量的影響由表2可見,模型對照組血清LDL-C含量明顯高于空白對照組(P<0.01),與模型對照組比較,蜘蛛香3個劑量組血清LDL-C含量都沒有顯著變化;而對于血清HDL-C含量,模型對照組和空白對照組沒有統計學差異,陽性藥洛伐他汀組及蜘蛛香高、中劑量組卻明顯降低(P<0.01)。3.2對比兩組正常組和正常組一般組由表3可見,模型對照組血清ALT,AST活性明顯高于正常組。與模型對照組比較,蜘蛛香高、中劑量能顯著降低血清ALT活性(P<0.01),中劑量能顯著降低血清AST活性(P<0.01)。4對慢性高血壓大鼠血脂的影響高脂血癥是導致動脈粥樣硬化和冠心病等多種心腦血管疾病發(fā)生的重要因素。目前臨床常用西藥長期服用均有一定的副作用,且停藥后血脂回升情況也較普遍。而中藥降血脂作用在中醫(yī)藥理論指導下,具有療效穩(wěn)定,副作用小的一些特點。本課題組前期在對蜘蛛香的研究中,發(fā)現蜘蛛香醇提物給藥組實驗動物飲食正常、精神良好,但較其他組動物體重明顯減輕的現象,啟示了本實驗研究。從現代醫(yī)學研究來講,高脂血癥為血脂異?；蜓蓙y的慣稱,是指人體內血液中一種或多種脂質成分異常升高,超出正常范圍。血脂是指血液中所含脂類的總稱,包括:甘油三酯(TG)、膽固醇(TC)及其酯、磷脂和游離脂肪酸等。血脂在與血漿中的蛋白質結合,形成溶解度大的脂蛋白復合體而運輸。各種脂蛋白可分為4類:乳糜微粒(CM)、極低密度脂蛋白(VLDL)、低密度脂蛋白(LDL)、高密度脂蛋白(HDL)。TC,TG為血管粥樣斑塊的構成物質,LDL可進入血管內壁而促使TC沉積,增高的血漿膽固醇(TC)、甘油三酯(TG)可通過改變凝血系統和纖溶系統的功能,促進血栓形成,加快動脈粥樣硬化的形成和發(fā)展,從而導致心血管疾病的發(fā)生。從本實驗結果可以看出,模型對照組血清TC,TG,LDL-C及肝組織中TC,TG含量較空白對照組明顯增高,說明本實驗中高脂血癥模型復制成功。蜘蛛香高、中劑量組能夠顯著降低實驗性高脂血癥大鼠血清中的TG,高、中、低劑量均能顯著降低肝組織中TG,中、低劑量對肝組織TC也有明顯的降低作用,這表明中藥蜘蛛香具有一定的降低實驗性高脂血癥大鼠血脂的作用,其中對肝組織、血清TG和血清TC的降低作用比較明顯。由于脂蛋白錯綜復雜的網狀代謝過程,影響TC,TG代謝的因素較多,其機制有待進一步研究。ALT主要存在于肝細胞漿中,而在肝細胞損害、壞死甚至在細胞變性時會釋放到血清中使血清ALT升高,為最敏感的肝功能檢測指標之一。AST在心肌中含量最高,其次為肝臟,當肝損傷時,血清中AST可明顯升高。通