中藥湯劑煎煮質(zhì)量控制的多因素分析

中藥湯劑煎煮質(zhì)量控制的多因素分析

湯劑是中醫(yī)臨床應(yīng)用的最重要的藥物類(lèi)型。其療效準(zhǔn)確，覆蓋范圍廣泛，最能體現(xiàn)中醫(yī)的一般概念和辯證法。而湯劑煎煮作為中藥應(yīng)用于臨床的最終環(huán)節(jié),其正確與否,直接關(guān)乎中藥的療效與用藥安全。明代醫(yī)家李時(shí)珍認(rèn)為:“凡服湯藥,雖品物專(zhuān)精,修治如法,而煎藥者魯莽造次,水火不良,火候失度,則藥亦無(wú)功”;清代醫(yī)家徐靈胎亦講:“煎藥之法最宜深講,藥之效與不效,全在乎此”?？梢?jiàn)湯劑煎煮自古以來(lái)就很受重視。1中藥湯劑制備工藝目前,中藥從種植,藥品的非臨床研究和臨床試驗(yàn)研究,生產(chǎn)加工再到調(diào)配都有著各自一整套完整的質(zhì)量控制體系進(jìn)行監(jiān)管,唯有湯劑煎煮環(huán)節(jié)缺少相應(yīng)完備的標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)程,導(dǎo)致患者用藥和實(shí)驗(yàn)研究都有很大的隨意性。針對(duì)湯劑煎煮過(guò)程影響因素的多樣性,采用多因素、多水平優(yōu)選工藝參數(shù),確立最優(yōu)化的湯劑煎煮工藝,進(jìn)行多層次、多指標(biāo)、綜合性地評(píng)價(jià)中藥湯劑煎煮質(zhì)量;針對(duì)先煎、后下、另煎等特殊要求的中藥飲片,結(jié)合所在方劑,研究制定出各自規(guī)范化操作規(guī)程,最終制定出臨床安全、有效、可控、質(zhì)量穩(wěn)定且科學(xué)合理的標(biāo)準(zhǔn)湯劑。標(biāo)準(zhǔn)湯劑的建立在臨床實(shí)踐與研究,中藥復(fù)方研究的規(guī)范化和標(biāo)準(zhǔn)化,中藥復(fù)方各學(xué)科間的相互聯(lián)系,以及中藥新藥評(píng)價(jià)等方面都將有著重要的地位和作用。2湯劑的現(xiàn)狀及存在的問(wèn)題2.1第二u單次論治傳統(tǒng)的煎煮器具以砂鍋,陶器為主,藥材煎煮之前先浸泡半小時(shí)左右,夏天稍短冬天稍長(zhǎng),加水量以第一煎加水超過(guò)藥面3~5cm為度,第二煎超過(guò)藥面1~2cm。一般煎煮兩次,滋補(bǔ)藥煎煮三次。煎煮時(shí)間沒(méi)有精確要求,一般根據(jù)所加溶媒量和煎取量來(lái)控制時(shí)間,多數(shù)湯劑煎至原體積的1/3~1/2,部分藥物還根據(jù)方中藥物的煎煮程度來(lái)控制時(shí)間,如白虎湯,竹葉石膏湯以“煮米熟”為度。需要特殊煎煮的藥材,骨貝石類(lèi)等質(zhì)地堅(jiān)硬和有毒中藥要先煎,芳香和清解類(lèi)藥后下,貴重藥材另煎兌服或沖服,質(zhì)地輕浮或黏性強(qiáng)或帶有刺激咽喉的毛絨的中藥要包煎。2.2制備合適的制備工藝衛(wèi)生部、國(guó)家中醫(yī)藥管理局下發(fā)的關(guān)于醫(yī)療機(jī)構(gòu)中藥煎藥室管理規(guī)范中對(duì)煎藥的操作方法做了較為詳細(xì)的規(guī)定。浸泡時(shí)間一般不少于30min。煎煮開(kāi)始時(shí)的用水高度一般以浸過(guò)藥面2~5cm為宜,花、草類(lèi)藥物或煎煮時(shí)間較長(zhǎng)的應(yīng)當(dāng)酌量加水。每劑藥一般煎煮兩次,將兩煎藥汁混合后再分裝。煎煮時(shí)間應(yīng)當(dāng)根據(jù)方劑的功能主治和藥物的功效確定。一般藥物煮沸后再煎煮20~30min;解表類(lèi)、清熱類(lèi)、芳香類(lèi)藥物不宜久煎,煮沸后再煎煮15~20min;滋補(bǔ)藥物先用武火煮沸后,改用文火慢煎約40~60min。藥劑第二煎的煎煮時(shí)間應(yīng)當(dāng)比第一煎的時(shí)間略縮短。煎藥過(guò)程中要攪拌藥料2~3次。攪拌藥料的用具應(yīng)當(dāng)以陶瓷、不銹鋼、銅等材料制作的棍棒為宜,攪拌完一藥料后應(yīng)當(dāng)清洗再攪拌下一藥料。凡注明有先煎、后下、另煎、烊化、包煎、煎湯代水等特殊要求的中藥飲片,應(yīng)當(dāng)按照要求或醫(yī)囑操作。2.3標(biāo)準(zhǔn)湯劑制備法日本標(biāo)準(zhǔn)湯劑的煎煮方法,根據(jù)日本藥審2第120號(hào)通知:有關(guān)醫(yī)療用漢方制劑的管理,原則上是要以各處方單位為基礎(chǔ)進(jìn)行設(shè)定,概括為取處方1日量的生藥材,加20倍藥材質(zhì)量的水,加熱煎煮30min以上,過(guò)濾,所得濾液為加水質(zhì)量的一半,以此方法煎煮得到標(biāo)準(zhǔn)湯劑。馬躍平和ChiangHM等均采用了此種煎煮方法。三種方法相互比較,我們可以看出:傳統(tǒng)經(jīng)驗(yàn)和醫(yī)療機(jī)構(gòu)煎煮方法相似,醫(yī)療機(jī)構(gòu)煎煮方法是在傳統(tǒng)經(jīng)驗(yàn)基礎(chǔ)上對(duì)部分工藝進(jìn)行了規(guī)范化,操作方法相對(duì)來(lái)講比較詳細(xì),但其工藝不夠穩(wěn)定,工藝參數(shù)只有一個(gè)范圍,各項(xiàng)工藝沒(méi)有說(shuō)明必要性及相對(duì)重要性,沒(méi)有質(zhì)量控制的項(xiàng)目。而日本標(biāo)準(zhǔn)湯劑的煎煮方法比較程式化,所有復(fù)方都按照同樣的煎煮工藝,不符合中醫(yī)用藥整體觀和辨證論治的特點(diǎn),最終將影響復(fù)方療效,優(yōu)點(diǎn)是工藝參數(shù)穩(wěn)定精確,加水質(zhì)量大可保證有效成分煎出,最后將藥液定容到一定體積便于進(jìn)行質(zhì)量控制。因此我們提出建立一種標(biāo)準(zhǔn)湯劑,該標(biāo)準(zhǔn)湯劑既要體現(xiàn)中醫(yī)用藥的特點(diǎn),又可以對(duì)各項(xiàng)煎煮工藝進(jìn)行精確控制,并能通過(guò)相應(yīng)的指標(biāo)進(jìn)行質(zhì)量評(píng)價(jià)。3湯劑的制備方法3.1經(jīng)方用藥劑量首先,應(yīng)進(jìn)行古文獻(xiàn)研究,對(duì)古方中藥材的品種和炮制規(guī)格進(jìn)行考證,確定道地藥材和炮制規(guī)格并規(guī)范化。對(duì)于古方中藥材的用量,應(yīng)根據(jù)最新的考證,將古方用量換算成現(xiàn)代用量,如《傷寒論》中方藥劑量的折算,關(guān)于度、量制單位折算考證的結(jié)果基本一致,即每升約合200mL,1尺約合23cm,丘光明等根據(jù)考證將東漢時(shí)期一斤暫定為222g,一兩合13.75g。仝小林等對(duì)《傷寒論》方劑中非計(jì)量單位的藥物質(zhì)量進(jìn)行現(xiàn)代實(shí)測(cè)研究,發(fā)現(xiàn)經(jīng)方用藥劑量都很大。古代煎煮的判斷標(biāo)準(zhǔn)很多都是根據(jù)經(jīng)驗(yàn)而來(lái),如對(duì)于煎煮時(shí)間的判定,有以步行的速度與路程來(lái)估計(jì)時(shí)間的,如“如人行五、六里”,有以“一食頃”、“一炊久”等,應(yīng)對(duì)這些原始,模糊的判斷標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行規(guī)范化。對(duì)于煎煮用水,能保證所用水的流動(dòng),新鮮和潔凈要求即可,而古方中對(duì)有些煎煮用水的要求不盡合理,如仲景所載甘瀾水做法為:“取水二斗,置大盆內(nèi),以杓揚(yáng)之,水上有珠子五六千顆相逐,取用之”。條件苛刻,操作繁瑣難以實(shí)現(xiàn)。3.2工藝的選擇3.2.1中藥湯劑與金屬元素和理化性質(zhì)成歷代醫(yī)家對(duì)煎煮器具的選用均很重視,如陶弘景說(shuō)“溫湯忌用鐵器”,李時(shí)珍講“煎藥并忌用銅鐵器,宜銀器,瓦罐”。現(xiàn)代也認(rèn)為煎煮器具首選砂鍋,其次可用搪瓷鍋、不銹鋼鍋,不能用鐵鍋、鋁鍋和銅鍋。砂鍋類(lèi)器具多由白泥(或黃泥)等硅酸鹽類(lèi)物質(zhì)經(jīng)塑形后,高溫?zé)贫?主要含二氧化硅,性質(zhì)穩(wěn)定且導(dǎo)熱均勻,能較好滿足中藥湯劑的煎煮要求。若選用搪瓷鍋或不銹鋼鍋,孔偉認(rèn)為其含有的金屬元素,在長(zhǎng)時(shí)間煎煮過(guò)程中可能與藥物中的某些成分發(fā)生化學(xué)反應(yīng),降低有效成分的含量甚至產(chǎn)生有毒成分,從而降低藥效并產(chǎn)生毒副作用。關(guān)于釉層或不銹鋼表層會(huì)不會(huì)與湯劑發(fā)生反應(yīng),以及若發(fā)生反應(yīng)什么成分參與的反應(yīng),應(yīng)通過(guò)實(shí)驗(yàn)研究進(jìn)行說(shuō)明。銅鐵鋁鍋,因其材料金屬活性較強(qiáng),會(huì)與中藥中的成分發(fā)生化學(xué)反應(yīng)并引起色澤和氣味的改變,輕則降低藥物效能,重則產(chǎn)生有害人體的新物質(zhì)。蔣忠妙等通過(guò)對(duì)常用中藥100種進(jìn)行實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn),100種中藥煎劑能與FeCl3試液產(chǎn)生沉淀的有69種,占69%。含大量鞣質(zhì)的中藥煎劑產(chǎn)生的沉淀多為黑色,且色澤混濁;含生物堿、苷類(lèi)、揮發(fā)油、有機(jī)酸為主的藥材也會(huì)不同性狀的沉淀。礦物藥、動(dòng)物藥因其成分相對(duì)單一,幾乎不見(jiàn)與FeCl3試液反應(yīng)。3.2.2浸泡對(duì)患者有效成分的影響大多數(shù)中藥飲片為干品,有一定的體積和厚度,在煎煮前需放置容器內(nèi)進(jìn)行冷水浸泡,以使藥物的表面濕潤(rùn)、變軟、植物細(xì)胞膨脹,使藥物有效成分部分溶出,在組織內(nèi)產(chǎn)生滲透壓而擴(kuò)散到組織細(xì)胞外部水中,同時(shí)可避免在加熱煎煮時(shí)藥材組織內(nèi)所含蛋白質(zhì)固化、淀粉糊化而影響藥物有效成分的煎出,從而對(duì)臨床效果產(chǎn)生影響。汪鳴鳳等以藥液顏色,滋味和浸膏得率為指標(biāo),對(duì)瀉白散的不同浸泡時(shí)間進(jìn)行研究,發(fā)現(xiàn)未浸泡而直接加冷水煎煮的瀉白散煎出率為9.4684%;經(jīng)過(guò)不同時(shí)間浸泡處理的瀉白散煎出率均比未浸泡的高,最大的煎出率為13.5516%。表明浸泡對(duì)提高湯劑的煎煮效果有很大影響。對(duì)于浸泡時(shí)間未見(jiàn)詳細(xì)表述,5~10min至1h均有論述。因此應(yīng)以中藥飲片的質(zhì)地和性味功效為參考,對(duì)浸泡時(shí)間進(jìn)行實(shí)驗(yàn)研究,給出一個(gè)明確的表述。3.2.3第二u3000第二各加藥的加壓算法及質(zhì)量計(jì)算加水體積的多少,對(duì)湯劑的質(zhì)量有著舉足輕重的影響。加水體積過(guò)少會(huì)造成藥物的有效成分溶出不完全,無(wú)法起到治療效果,甚至有效成分可因局部高熱而被破壞;加水體積過(guò)多,雖可增加有效成分的溶出體積,但湯液過(guò)多不宜病人服用。目前關(guān)于湯劑加水體積的說(shuō)法,王竹蘭總結(jié)有以下幾種方法:(1)傳統(tǒng)經(jīng)驗(yàn)加水法,第一煎加水高度以高出藥面3~5cm為度,第二煎加水高度可超過(guò)藥渣表面1~2cm。(2)以每克中藥加水約10mL計(jì)算,總水體積的70%加到第一煎中,30%加到第二煎中。(3)量器加水法,解表劑、一般藥劑、滋補(bǔ)劑第一煎的加水體積分別為400~600、500~700、700~900mL;第二煎加水體積分別為280~300、300~350、400~500mL。(4)按公式計(jì)算加水法,根據(jù)藥材的吸水性、煎煮時(shí)間、每分鐘的蒸發(fā)質(zhì)量及預(yù)煎取質(zhì)量計(jì)算加水質(zhì)量,根據(jù)實(shí)驗(yàn)結(jié)果擬定的加水質(zhì)量公式為:第一煎加水質(zhì)量=藥材質(zhì)質(zhì)量×吸水系數(shù)+煎煮時(shí)間×每分鐘蒸發(fā)質(zhì)量+藥液得質(zhì)量;第二煎加水質(zhì)量=煎煮時(shí)間×蒸發(fā)質(zhì)量+得質(zhì)量。王竹蘭等又對(duì)《傷寒論》中采用標(biāo)準(zhǔn)度量衡單位的藥物劑量進(jìn)行折算,對(duì)非標(biāo)準(zhǔn)度量衡單位用量的藥物則結(jié)合相關(guān)實(shí)物測(cè)量值確定其用量,初步探討了《傷寒論》中88首湯劑的加水體積與劑量的關(guān)系,結(jié)果顯示,有63首方加水體積(mL)/劑量(g)的比值在5~10,約占71.6%;結(jié)合現(xiàn)代煎藥特點(diǎn),認(rèn)為《傷寒論》中煎藥方法在現(xiàn)今條件下具有實(shí)際可操作性。筆者認(rèn)為,在標(biāo)準(zhǔn)制定時(shí),可以參考公式法和王竹蘭的研究成果進(jìn)行實(shí)驗(yàn)研究,確定最佳加水體積。3.2.4浸提類(lèi)藥,多以養(yǎng)肝各類(lèi)復(fù)方煎煮時(shí)間應(yīng)有所不同,以保證煎出適量的有效成分和保留有效成分。李時(shí)珍《本草綱目》講:“若發(fā)汗藥,必用緊火,溫服。攻下藥,亦用緊火煎熟,下硝黃再煎,溫服。補(bǔ)中藥,宜慢火,溫服,陰寒急病,亦宜緊火急煎服之”。現(xiàn)代研究也認(rèn)為,芳香化濕、行氣、解表類(lèi)藥多含揮發(fā)油,宜用武火快煎,使揮發(fā)性成分溶出;滋補(bǔ)類(lèi)藥,多含蛋白質(zhì),多肽,黏液質(zhì)類(lèi)大分子成分,不易溶出,升溫過(guò)快又容易產(chǎn)生“糊化”現(xiàn)象,不利于有效成分溶出,應(yīng)文火慢煎。有學(xué)者認(rèn)為:滋補(bǔ)類(lèi)藥,第一煎為40~50min,二煎、三煎均可用時(shí)30~40min;芳香化濕、行氣、解表類(lèi)藥第一煎10~15min,二煎5~10min;一般藥物,第一煎應(yīng)為15~20min,第二煎10~15min。煎煮時(shí)間不同,復(fù)方中有效成分的提取率及功效也會(huì)有所差別。劉亞嫻等通過(guò)考察銀翹散在不同煎煮時(shí)間下對(duì)致熱大鼠體溫及下丘腦cAMP含量的影響,發(fā)現(xiàn)銀翹散的解熱效果以煮沸后3、6min為優(yōu);且可降低發(fā)熱大鼠下丘腦組織中cAMP的含量,效果也以煮沸后3、6min為優(yōu);王穎等以揮發(fā)油、浸出物和黃芩苷為指標(biāo),考察九味羌活湯在一煎、二煎中的煎煮時(shí)間,發(fā)現(xiàn)一煎中,煎煮20~30min時(shí),含揮發(fā)油量相對(duì)較高,浸出物和黃芩苷的含有量隨著煎煮時(shí)間的延長(zhǎng)呈上升趨勢(shì)。在二煎中,30min時(shí)含揮發(fā)油量最高,同時(shí)浸出物和黃芩苷的含有量相對(duì)較高。3.2.5中藥湯劑的制備工藝先煎:礦石、貝殼、角甲類(lèi)、有毒藥均需先煎,以增加藥物有效成分的溶出或降低藥物的毒性,增加安全性和有效性。一般礦石、貝殼、角甲類(lèi)要打碎成顆?；虼址巯燃逯辽?0min,有毒藥材必須先煎1~2h;但是藥物有溶于水與不溶于水之分,對(duì)于不溶于水的藥物應(yīng)先碾成碎末。有研究表明,附子先煎可以降低復(fù)方中的烏頭堿的含量;但對(duì)于礦物藥是否需要先煎,有學(xué)者認(rèn)為礦物藥不需要先煎,對(duì)于礦物藥是否需要先煎以及先煎時(shí)間還需要通過(guò)實(shí)驗(yàn)進(jìn)行研究。后下:氣味芳香含揮發(fā)性成分的藥物或久煎易破壞有效成分的中藥飲片需后下。在頭煎煎好前5~10min內(nèi)加入煎煮。如大黃中瀉下的蒽醌類(lèi)成分對(duì)熱不穩(wěn)定,久煎生成鞣質(zhì)類(lèi)成分,所以宜于湯劑煎好前10min后下。因此,對(duì)于藥物是否需要后下及后下時(shí)間點(diǎn)也需要考察。包煎:花粉類(lèi)、細(xì)小種子類(lèi)、中藥粉散劑等質(zhì)地輕浮而易漂浮于水面,需包煎;含淀粉、黏液質(zhì)較多的種子類(lèi)藥物,易使鍋底糊化亦要包煎;附生絨毛的藥劑,為避免絨毛脫落混入藥液刺激咽喉也要包煎。耿花娥等對(duì)中藥湯劑中需要包煎的藥物,以煎出物干質(zhì)量為指標(biāo),采用不同裝量的方法進(jìn)行系統(tǒng)實(shí)驗(yàn),發(fā)現(xiàn)裝量不同,煎出效果也不同,并對(duì)包煎的必要性提出了新的看法。烊化和沖服:烊化是指某些膠類(lèi)藥物及黏性大而易溶的藥物,為避免入煎粘鍋或黏附其他藥物影響煎煮,將飲片置鍋內(nèi)加水適量,加熱融化或隔水燉化后,再兌入群藥煎液中同服。某些貴重藥,用量較輕,為防止散失,可研成細(xì)粉,用溫開(kāi)水或復(fù)方煎液沖服。王祥領(lǐng)提出了對(duì)沖服、烊化類(lèi)中藥的炮制改進(jìn)建議,以充分保證湯劑的質(zhì)量。另煎兌服:為了防止羚羊角、人參等一些藥物的有效成分煎出不完全,需將飲片單獨(dú)煎煮30~40min后,藥渣入群藥同煎,藥液兌入群藥液中同服,減少不必要的損失。3.3化合物和低分子化合物湯劑所含成分多而復(fù)雜,無(wú)機(jī)物和有機(jī)物,高分子化合物和低分子化合物,強(qiáng)極性、弱極性和非極性物質(zhì)等構(gòu)成一個(gè)復(fù)雜的系統(tǒng)。因此其質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)的建立應(yīng)依托先進(jìn)技術(shù),采用多種指標(biāo)和手段對(duì)湯劑進(jìn)行質(zhì)量控制。3.3.1采用多種方法來(lái)制備湯劑的量化測(cè)定湯劑成分復(fù)雜,采用其中的某一有效成分或指標(biāo)成分,進(jìn)行質(zhì)量控制難以保證復(fù)方煎煮的質(zhì)量,應(yīng)建立多種有效成分或指標(biāo)成分的同時(shí)測(cè)定方法,提高對(duì)湯劑質(zhì)量的控制水平。有效成分或指標(biāo)成分選擇時(shí),要符合中藥復(fù)方用藥特點(diǎn),重點(diǎn)選擇君藥和臣藥的成分;復(fù)方中含有的有毒成分則必須列入定量測(cè)定的范圍之內(nèi),保證用藥的安全性;結(jié)合湯劑煎煮以水為溶媒的特點(diǎn),適當(dāng)選擇水溶性成分為指標(biāo)。通過(guò)建立多種成分定量測(cè)定的方法,構(gòu)建多指標(biāo)測(cè)定體系,實(shí)現(xiàn)對(duì)湯劑煎煮的質(zhì)量控制。多種成分同時(shí)測(cè)定在中藥飲片和復(fù)方制劑方面已應(yīng)用成熟,可借鑒。3.3.2整體性和模糊性中藥色譜指紋圖譜是一種綜合的,可量化的色譜鑒定手段。借以鑒別真?zhèn)?評(píng)價(jià)原料藥材,半成品和成品質(zhì)量均一性和穩(wěn)定性。其基本屬性是“整體性”和“模糊性”。中藥指紋圖譜應(yīng)用于中藥物質(zhì)群的質(zhì)量控制已成共識(shí),日本漢方藥主要生產(chǎn)企業(yè)在20世紀(jì)80年代就已經(jīng)在企業(yè)內(nèi)部采用高效液相色譜控制質(zhì)量。他們把傳統(tǒng)方劑采用地道藥材,按飲片配方煎煮得到的煎汁作為標(biāo)準(zhǔn)指紋圖譜,國(guó)家藥品監(jiān)督管理局也已對(duì)中藥注射液提出了建立指紋圖譜的要求,已在一些產(chǎn)品上面得到應(yīng)用。因此,采用指紋圖譜技術(shù)也可以對(duì)湯劑煎煮很好的進(jìn)行質(zhì)量控制。3.3.3實(shí)驗(yàn)用浸出物的司法實(shí)踐浸膏得率可以反映湯劑在煎煮過(guò)程中成分的煎出量,可參照2010版藥典浸出物測(cè)定法項(xiàng)下的熱浸法進(jìn)行操作附錄62,通過(guò)實(shí)驗(yàn)制定一個(gè)合理的浸出物參考范圍,用以對(duì)湯劑煎煮進(jìn)行質(zhì)量控制。3.3.4水煎液的相對(duì)密度湯劑在煎煮過(guò)程中,在滲透壓的作用下,藥材中的成分不斷從細(xì)胞中轉(zhuǎn)移到水液中,不同的煎煮工藝,水煎液中的成分含量和種類(lèi)會(huì)有差異,會(huì)在水煎液的相對(duì)密度