豬精液稀釋液保存時間的測定

豬精液稀釋液保存時間的測定

在本研究中，我們收集了五個國外的稀釋粉配方，通過實驗比較了稀釋效果，并分析了經(jīng)濟效益，為農(nóng)場和公職的最佳稀釋效果提供了參考。1材料和方法1.1英系大白豬和法系皮特蘭來自北京浩邦豬人工授精服務中心公豬站的20頭種公豬,其中包括19頭英系大白豬,1頭法系皮特蘭,公豬按常規(guī)飼養(yǎng)方法進行飼養(yǎng)管理,生長發(fā)育正常。本研究中,除1頭英系大白豬采集2次鮮精外,其他公豬皆采集1次鮮精。實驗時間在2004年2月16日至3月4日。1.2稀釋液的準備收集KIEV,GUELPH,IVTMOD,ZORPVA,BTS等5種國際稀釋粉配方(見表1),按配方成分及相關(guān)試劑當前市場價格合算每份鮮精的稀釋液成本分別為2.37,2.38,1.38,0.80,1.58,15.80元。按配方準備所有化學藥品和生化制劑。嚴格控制實驗配方中的實驗藥品質(zhì)量、生產(chǎn)日期、廠家、藥品級別進行,稀釋粉配置通過精密天平稱量每一種化學試劑需求量,配好后的稀釋粉充分溶解穩(wěn)定后進行pH值、滲透壓等的測定,并進一步過濾加熱,使用前加入抗生素(慶大霉素350mg)以備用。以卡蘇BTS中長效稀釋粉作為對照組。按照公豬新鮮精液稀釋保存的GTC實驗要求稀釋精液。1.3精子活力測定按正常采精方法,采集1個公豬精液,將活力為0.75以上的鮮精經(jīng)過濾后,立即抽取6個樣(每個樣10mL),分別加40mLKIEV,IVTMOD,GUELPH,ZORPVA,BTS及卡蘇BTS稀釋液(相當于4倍稀釋)、攪拌、標記、密封、放入恒溫箱內(nèi),每12h測定記錄精子密度、活力、畸形率等3個指標,直到精子活力下降到0.6以下時停止,記錄保存時間。以上步驟重復21次。1.4測量數(shù)據(jù)指標1.4.1精子的百分率按照精液中做直線前進運動的精子占總精子的百分率。在顯微鏡下觀察,鮮精活力要求不低于0.7,檢查活力時要求載玻片和蓋玻片都應37℃下預熱。1.4.2精子畸形率精子畸形評定是通過肉眼600倍鏡下觀察200個精子中畸形精子占有比例。1.4.3溶液的ph值通過桑翌科技公司提供的pH6測定儀測定。1.4.4精髓密度通過法國卡蘇公司提供的精密密度測定儀測定。1.5不同稀釋液的酒精保存時間利用MicrosoftExcel○R軟件的TTEST對不同稀釋液處理的精液的保存時間、保存時間臨界點精子密度、精子畸形率進行成對比較,本文僅對不同稀釋液的精液保存時間進行分析。2結(jié)果與分析2.1不同來源血壓液的培養(yǎng)時間實驗中所有稀釋液的總體平均精液保存時間為28.2h,21頭份鮮精中最好的1/3的平均精液保存時間為45.6h,中間的1/3的平均精液保存時間為25.4h,最差的1/3的平均精液保存時間為13.7h。本實驗中,應用KIEV,GUELPH,IVTMOD,ZORPVA,BTS及卡蘇BTS稀釋液的精液平均保存時間(h)分別為28.3±4.58,22.0±3.27,13.7±3.47,24.9±4.69,44.3±6.05及36.3±6.23(表2),其中BTS稀釋液的精液平均保存時間最長,卡蘇BTS其次。成對t檢驗結(jié)果表明,KIEV稀釋液組精液平均保存時間與IVTMOD,GUELPH,ZORPVA,及卡蘇BTS組差異不顯著,但極顯著(P<0.01)低于BTS組;GUELPH稀釋液組精液平均平均保存時間與IVTOMD及ZORPVA組差異不顯著(P>0.05),但極顯著(P<0.01)低于BTS及卡蘇BTS稀釋液組;IVTOMD稀釋液組精液平均保存時間極顯著(P<0.01)低于ZORPVA,BTS及卡蘇BTS稀釋液組;ZORPVA稀釋液組精液平均保存時間極顯著(P<0.01)低于BTS及卡蘇BTS稀釋液組;BTS稀釋液組精液平均保存時間顯著(P<0.05)高于卡蘇BTS組(表2)。2.2稀釋液與鮮精的關(guān)系不同稀釋液的精液保存時間的相關(guān)系數(shù)可以反映稀釋液與鮮精樣本之間的互作效應。相關(guān)性高,表示稀釋液與鮮精樣本之間的互作效應小,該稀釋液的通用性就強;相關(guān)性低,表示稀釋液與鮮精樣本之間的互作效應高,該稀釋液的通用性就差,意味著不同鮮精的最佳稀釋液不同,容易導致人工授精生產(chǎn)管理復雜度的提高。表3列出不同稀釋液的精液保存時間的相關(guān)性。如果將1種稀釋液與其他5種稀釋液相關(guān)系數(shù)的平均值來表示本實驗中6種稀釋液的相對通用性,則KIEV,GUELPH,IVTOMD,ZORPVA,BTS及卡蘇BTS稀釋液的相對通用性分別為0.388,0.207,0.184,0.435,0.544及0.439。3稀釋液的總體保存時間本研究對當前國際上應用較多的6種稀釋液進行成對的比較,其中卡蘇BTS稀釋液以卡蘇BTS稀釋粉配制,其他皆按配方自行采購原料成分配制而成,成本顯著比卡蘇BTS中長效稀釋粉低。研究結(jié)果表明,BTS稀釋液的精液平均保存時間最長(44.3±6.05)h,顯著優(yōu)于卡蘇BTS中長效稀釋粉(36.3±6.23)h(P<0.05)。但從所有稀釋液的總體平均精液保存時間為僅28.2h以及卡蘇BTS中長效稀釋粉的平均精液保存時間僅為(36.3±6.23)h說明,本實驗中所使用的公豬精液質(zhì)量有待于進一步提高。人工授精的實踐表明,不同的品種、品系、個體甚至同一公豬在不同生理狀態(tài)下采集的精液可能與稀釋液存在互作效應,即不同的品種、品系個體甚至同一公豬在不同生理狀態(tài)下采集的精液的最佳稀釋液可能不同,這會導致人工授精站的操作管理難度增大。本研究首次將皮爾遜相關(guān)系數(shù)作為反映稀釋液通用性的指標,BTS稀釋液的精液保存時間高于卡蘇BTS中長效稀釋液(44.3和36.