生物藥學作業(yè)題

生物藥學作業(yè)題————————————————————————————————作者：————————————————————————————————日期: 改造鼠源性單克隆抗體的首要目的是

C.減少免疫源性能用于防治血栓的酶類藥品有(

）Ｄ．尿激酶下列可用于菌種純化的辦法有

（

)B.平板劃線下列屬于多肽激素類生物藥品的是

（

)D．降鈣素由于目的蛋白質(zhì)和雜蛋白分子量差別較大，擬根據(jù)分子量大小分離純化并獲得目的蛋白質(zhì)，可采用

(

)C.凝膠過濾

獲得目的基因最慣用的辦法是：B．PCR技術(shù)促紅細胞生長素（ＥPO)基因能在大腸桿菌中體現(xiàn),但卻不能用大腸桿菌的基因工程菌生產(chǎn)人的促紅細胞生長素，這是由于：

(）

D.大腸桿菌不能使人的促紅細胞生長素糖基化下列能用重組ＤNＡ技術(shù)生產(chǎn)的藥品為

(）

B.

生長素以大腸桿菌為目的基因的體現(xiàn)體系，下列對的的是：(）

Ｃ.容易培養(yǎng)，產(chǎn)物提純簡樸外源基因在動物細胞與大腸桿菌中體現(xiàn)產(chǎn)物的重要區(qū)別是()A.糖基化篩選雜交瘤細胞（脾-瘤融合細胞)選用的培養(yǎng)基是

:（）

Ｂ．HＡT鼠源性單克隆抗體改造后得到小分子抗體，慣用的是()

B.單鏈抗體能夠?qū)崿F(xiàn)微生物菌種定向改造的辦法是（

)Ｄ.基因工程現(xiàn)在分離的１000多個抗生素,約2/3產(chǎn)自（）B.放線菌

基因體現(xiàn)最慣用的宿主菌是:(）B.大腸桿菌分離純化早期,由于提取液中成分復雜，目的物濃度稀，因而易采用(

)A．分離量大分辨率低的辦法能夠用沙土管保存的菌種是(

）C.青霉菌人類第一種基因工程藥品是：

(）Ａ.人胰島素外源基因的高效體現(xiàn)會影響宿主細胞正常的生長代謝。A.√抗體中結(jié)合抗原的部位分布在恒定區(qū)B．×質(zhì)粒不含有自主復制能力。Ｂ．×單克隆抗體就是單鏈抗體B．×單克隆抗體只識別一種表位(抗原決定簇)的高純度抗體,普通來自單個B淋巴細胞的克隆或一種雜交瘤細胞的克隆。Ａ.√PCR是聚合酶鏈式反映法的縮寫A．√生物藥品指涉及生物制品在內(nèi)的生物體的初級和次極代謝產(chǎn)物或生物體的某一構(gòu)成部分,甚至整個生物體用作診療和治療疾病的醫(yī)藥品。A.√細胞因子:由細胞分泌的能調(diào)節(jié)生物有機體生理功效，參加細胞的增殖、分化和凋亡的小分子多肽物質(zhì)生物藥品:運用生物體、生物組織或其成分,綜合應用生物學、生物化學、微生物學、免疫學、物理化學、生物技術(shù)和當代藥學的原理和辦法，進行加工、制造而成的一大類用于防止、治療和診療疾病的制品發(fā)酵工程制藥：采用當代工程技術(shù)手段，運用微生物的某些特定功效，為人類生產(chǎn)有用的藥品，或直接把微生物應用于工業(yè)生產(chǎn)過程的一種新技術(shù)。誘變育種:誘變育種是指故意識地將生物體暴露于物理的、化學的或生物的一種或多個誘變因子下,促使生物體發(fā)生突變，進而從突變體中篩選含有優(yōu)良性狀的突變株的過程?；蝮w現(xiàn):基因體現(xiàn)是指構(gòu)造基因在生物體中的轉(zhuǎn)錄、翻譯以及全部加工過程?？贵w藥品:用于治療的單克隆抗體、抗體片段、基因工程改造的抗體、免疫偶聯(lián)物以及融合蛋白均可統(tǒng)稱為抗體藥品亞單位疫苗：不含病原體核酸,選用能誘發(fā)宿主產(chǎn)生中和抗體的微生物蛋白或表面抗原而制成的疫苗。人-鼠嵌合抗體:嵌合抗體是最早制備成功的基因工程抗體。它是由鼠源性抗體的V區(qū)基因與人抗體的C區(qū)基因拼接為嵌合基因,然后插入載體,轉(zhuǎn)染骨髓瘤組織體現(xiàn)的抗體分子。因其減少了鼠源成分，從而減少了鼠源性抗體引發(fā)的不良反映,并有助于提高療效?；蚬こ趟幤罚哼\用DNＡ重組技術(shù)生產(chǎn)出來的藥品被稱為基因工程藥品。疫苗:用于人工主動免疫的生物制品。多肽藥品:多肽和蛋白質(zhì)類藥品指用于防止、治療和診療的多肽和蛋白質(zhì)類物質(zhì)生物藥品生物技術(shù)制藥：生物技術(shù)制藥是指運用微生物學、生物學、醫(yī)學、生物化學等的研究成果,從生物體、生物組織、細胞、體液等,綜合運用微生物學、化學、生物化學、生物技術(shù)、藥學等科學的原理和辦法進行藥品制造的技術(shù)。原生質(zhì)體融合：用脫壁酶解決將微生物細胞壁去除,制成原生質(zhì)，再用聚乙二醇(PEG)增進原生質(zhì)體發(fā)生融合,從而獲得融合子的技術(shù)。治療性酶:傳統(tǒng)的藥品分子作為受體激動劑或克制劑也能起到酶治療的部分效果，但是它們沒有催化功效，不能介導級聯(lián)反映。酶的應用涉及溶解血栓以增進灌注水平和加強對癌細胞的毒性核酸藥品:含有藥理活性的天然構(gòu)造的核酸類物質(zhì)和人工合成合成的核酸類物質(zhì)雜交育種:雜交育種普通指將兩個基因型不同的菌株通過接合使遺傳物質(zhì)重新組合,再從中分離和篩選出含有新性狀的菌株。雜交后的雜種不僅能克服原有菌種活力衰退的趨勢，并且,雜交育種使得遺傳物質(zhì)重新組合,擴大了變異范疇,改善了產(chǎn)品的質(zhì)量和產(chǎn)量。單克隆抗體：運用雜交瘤技術(shù)制備的單克隆抗體及其衍生物,由一種識別一種抗原表位的B細胞克隆產(chǎn)生的同源抗體發(fā)酵工程產(chǎn)品開發(fā)的核心是篩選到高效菌株，普通優(yōu)良菌種的選育辦法重要有自然選育、誘變育種和原生質(zhì)體融合。自然選育、誘變育種、

原生質(zhì)體融合基因工程藥品制造的重要環(huán)節(jié)是：

；

；

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；

?；蚬こ趟幤分圃斓闹匾h(huán)節(jié)是:

目的基因的獲得;構(gòu)建DNA重組體；構(gòu)建工程菌；目的基因的體現(xiàn);產(chǎn)物的分離純化;產(chǎn)品的檢查。根據(jù)真核基因在原核細胞中體現(xiàn)的特點，體現(xiàn)載體必須含有那些條件?體現(xiàn)載體必須含有下列條件:(１）能夠獨立的復制;（2）含有靈活的克隆位點和方便的篩選標記,以利于外源基因的克隆、鑒定和篩選；(３)應含有很強的啟動子,能為大腸桿菌的RAＮ聚合酶所識別；(4)應含有阻遏子（5）應含有很強的終止子（6)所產(chǎn)生的mRNＡ必須含有翻譯的起始信號。列舉兩種亞單位疫苗白喉類毒素、破傷風類毒素;流感嗜血桿菌莢膜多糖、腦膜炎球菌莢膜多糖;流感病毒血凝素和神經(jīng)氨酸酶;乙型肝炎HBsＡｇ(基因工程疫苗）；人乳頭瘤病毒簡述生物藥品的藥理學特性答：1、活性強：體內(nèi)存在的天然活性物質(zhì)。2、治療針對性強,基于生理生化機制。3、毒副作用普通較少，營養(yǎng)價值高。4、可能具免疫原性或產(chǎn)生過敏反映。48．簡述發(fā)酵工程制藥的基本過程答：1．菌種的選育2.培養(yǎng)基的配備3滅菌4.擴大培養(yǎng)和接種５.發(fā)酵過程６.分離提純49基因工程制藥過程中陽性克隆的篩選辦法有哪些答:１．根據(jù)重組子遺傳重組表型變化的篩選法,涉及運用抗生素抗性基因進行篩選通過α互補使菌產(chǎn)生顏色來篩選,運用報告基因篩選克隆子；2.根據(jù)重組子構(gòu)造特性的篩選法，涉及瓊脂糖凝膠電泳比較重組DNA的大小，限制性內(nèi)切酶分析,印跡雜交辦法,PＣＲ法和DNＡ的序列分析;根據(jù)體現(xiàn)產(chǎn)物采用免疫化學辦法篩選50.簡述抗體藥品的研發(fā)歷史答；第一階段以18９0年Behriｎg發(fā)現(xiàn)白喉抗毒素為代表,其特點是用抗原免疫動物來獲得多克隆抗體。第二階段以１975年Ｋohler創(chuàng)立雜交瘤技術(shù)制備單克隆抗體為代表。1９8６年,美國FDA同意了世界上第一種單抗治療性藥品——抗CＤ3單抗OKT3進入市場，用于器官移植時的抗排斥反映,此時單克隆抗體的研制和應用達成了頂點第三階段以１994年Ｗｉnter以基因工程辦法制備人源化抗體為代表51簡述基因工程藥品的質(zhì)量控制要點答：1蛋白質(zhì)含量的測定。2蛋白質(zhì)純度檢測。３蛋白質(zhì)Mr測定。4蛋白質(zhì)等電點測定。5蛋白質(zhì)序列分析。6內(nèi)毒素分析，宿主蛋白液和酸殘留分析５２簡述生物藥品的用途答：1）作為治療藥品2)作為防止藥品3）作為診療藥品4)用作其它生物醫(yī)藥用品簡述單克隆抗體經(jīng)篩選和克隆化的雜交瘤細胞僅能合成及分泌單一抗原表位的特異性抗體，是單克隆抗體。單抗的制作過程大致分為抗原的制備,動物的免疫,b細胞與骨髓瘤細胞融合形成雜交瘤細胞,篩選雜交瘤細胞,篩選能產(chǎn)生某種特異性單抗的雜交瘤細胞，雜交瘤細胞的克隆化,體外大規(guī)模培養(yǎng)或動物腹腔培養(yǎng)特異性雜交瘤細胞克隆,單抗的純化及鑒定。簡述基因工程制藥的重要環(huán)節(jié)

;

；

;

;

?；蚬こ趟幤分圃斓闹匾h(huán)節(jié)是：

目的基因的獲得；構(gòu)建DＮA重組體;構(gòu)建工程菌；目的基因的體現(xiàn);產(chǎn)物的分離純化；產(chǎn)品的檢查。比較蛋白和多肽藥品的差別，并分別列舉三個多肽和蛋白質(zhì)藥品的名稱和功效相對大分子蛋白或抗體類，多肽在常溫下卻更穩(wěn)定,用量更少,單位活性也更高;與大分子蛋白相比,多肽化學合成技術(shù)成熟,多肽容易與雜質(zhì)或副產(chǎn)品分離;重組蛋白的質(zhì)量、純度和產(chǎn)量都難以確保。重組蛋白也不能引人非天然氨基酸,不能在末端酰胺化,同時生產(chǎn)周期長,成本高；多肽普通比蛋白抗體類藥品成本低,但比諸多小分子藥物的合成成本高。多肽藥品：格拉替雷，用于治療多發(fā)性硬化癥；蘭瑞肽、伐普肽、巾白瑞肽、somatoprim和司格列肽等,用于治療胃腸胰內(nèi)分泌腫瘤、肢端肥大癥等多個有關(guān)疾病。蛋白藥品：重組人胰島素,用于治療糖尿病;重組人促紅細胞生成素，用于治療貧血；重組人甲狀旁腺激素，用于治療骨質(zhì)疏松癥。如何控制基因工程藥品質(zhì)量？

基因工程藥品的質(zhì)量控制要點以下。1蛋白質(zhì)含量的測定。2蛋白質(zhì)純度檢測。3蛋白質(zhì)Mr測定。4蛋白質(zhì)等電點測定。5蛋白質(zhì)序列分析。６內(nèi)毒素分析,宿主蛋白液和酸殘留分析什么是單克隆抗體？簡述制備過程。答：經(jīng)篩選和克隆化的雜交瘤細胞僅能合成及分泌單一抗原表位的特異性抗體,是單克隆抗體。單抗的制作過程大致分為抗原的制備,動物的免疫,b細胞與骨髓瘤細胞融合形成雜交瘤細胞,篩選雜交瘤細胞,篩選能產(chǎn)生某種特異性單抗的雜交瘤細胞，雜交瘤細胞的克隆化,體外大規(guī)模培養(yǎng)或動物腹腔培養(yǎng)特異性雜交瘤細胞克隆，單抗的純化及鑒定。比較基因工程疫苗和傳統(tǒng)疫苗。答：基因工程疫苗：1、免疫原性良好、效果持久及交叉免疫防護

2、可精細設計、便于操作、制備簡便

3、能制備聯(lián)合疫苗

4、能重復運用

5、可用于免疫治療。

即使基因工程疫苗擁有傳統(tǒng)疫苗所沒有的優(yōu)越性,但是現(xiàn)在還存在一下局限性與缺點:１、安全性尚不穩(wěn)定

２、免疫效果有待提高

3、抗核酸免疫反映。59.基因工程制藥過程中陽性克隆的篩選辦法有哪些?1．根據(jù)重組子遺傳重組表型變化的篩選法,涉及運用抗生素抗性基因進行篩選通過α互補使菌產(chǎn)生顏色來篩選,運用報告基因篩選克隆子；2．根據(jù)重組子構(gòu)造特性的篩選法,涉及瓊脂糖凝膠電泳比較重組DNA的大小，限制性內(nèi)切酶分析，印跡雜交辦法,PCＲ法和DNＡ的序列分析;根據(jù)體現(xiàn)產(chǎn)物采用免疫化學辦法篩選60.何謂治療性疫苗。比較治療性疫苗和防止性疫苗的區(qū)別。治療性疫苗是指在已感染病原微生物或已患有某些疾病的機體中,通過誘導特異性的免疫應答,達成治療或避免疾病惡化的天然，人工合成或用基因重組技術(shù)體現(xiàn)的產(chǎn)品或制品。治療性疫苗與防止性疫苗的重要區(qū)別是,一、防止性疫苗重要作用于未感染機體。而治療性疫苗的作用對象作為曾經(jīng)感染的病原體。二、治療性疫苗能打破機體的免疫耐受狀態(tài)，防止性疫苗可通過實驗室進行監(jiān)測,成果可靠,而防止性疫苗可能有一定的不良反映伴有不同程度免疫損傷較為復雜且其精確性尚有爭議激發(fā)免疫應答的類型不同。61.綜合分析生物藥品和化學藥品的差別,以及這些差別對藥品的治療領(lǐng)域和給藥類型的影響小分子化學藥普通是化學合成的,而大分子生物藥則普通是生物合成的。源頭的不同就直接造成兩者在構(gòu)造、成分、生產(chǎn)辦法和設備、知識產(chǎn)權(quán)、配方、保存辦法、劑量、監(jiān)管方式以及銷售方式都有不同。與合成的小分子化學藥相比,生物藥在分子大小上要大一百至上千倍。例如抗體藥分子量高達15萬道爾頓,而化學藥普通不到1000道爾頓。有報道將小分子化學藥的大小比作一輛自行車,而生物藥的個頭則相稱于一架飛機，其實兩者的區(qū)別不僅僅是分子大小的差別。更重要的是,生物藥的分子構(gòu)造要遠比化學藥復雜。相似還是仿制？由于生物藥含有更大的分子量和復雜的構(gòu)造,生物藥的表征面臨很大挑戰(zhàn)。但由于上述特點,即使現(xiàn)在全世界最先進的儀器設備全用上,也不可能將生物藥的構(gòu)造等特性完全表征清晰。這些特點也注定生物仿制藥不可能完全和原研藥一模同樣，即使是同一家公司生產(chǎn)的同一種生物藥,不同批次也會有差別。即使是同一批次,在儲存、流通的過程中,生物藥(特別是蛋白類藥品)的構(gòu)造和活性也不可避免地會有所變化。對于生物仿制藥生產(chǎn)商而言,由于知識產(chǎn)權(quán)保護等多個因素，原研藥公司所采用的生產(chǎn)工藝甚至是所采用的細胞系都會不清晰，這就更造成生物仿制藥與原研藥不會同樣。另外，對于生物藥而言，其生產(chǎn)及流通過程更加復雜,規(guī)定也更高，有許多環(huán)節(jié),細胞培養(yǎng)的條件（溫度和營養(yǎng)）、產(chǎn)品的加工、純化、儲存和包裝等各個環(huán)節(jié)都會影響產(chǎn)品的生產(chǎn)，整個過程中的微小差別都可能會對最后產(chǎn)品的質(zhì)量、純度、生物特性以及臨床效果產(chǎn)生較大影響。正由于上述種種因素,即使化學仿制藥的英文是genｅricｄrug,但是生物仿制藥并非是ｂioｇeneric，而是ｂiosiｍiｌaｒ，由于生物仿制藥只可能與原研藥“相似”(ｓimilar），絕不可能同樣。正是由于這個因素，中國有業(yè)內(nèi)人士認為ｂioｓiｍｉlar應當被譯為生物相似藥，而非生物仿制藥。而對于傳統(tǒng)的小分子化學藥而言,普通都有非常擬定并且穩(wěn)定的化學構(gòu)造，現(xiàn)有的分析辦法(例如紅外、核磁共振、X-射線衍射、質(zhì)譜等）足以將其化學構(gòu)造完全搞清晰。總的來說,生物藥的生產(chǎn)對于其生產(chǎn)條件的規(guī)定遠比化學藥苛刻，固然生產(chǎn)成本也更高，并且生物藥的臨床前和臨床階段的研發(fā)成本也更高。監(jiān)管差別基于此，監(jiān)管機構(gòu)（特別在歐美）規(guī)定生物仿制藥生產(chǎn)商提供足夠的臨床數(shù)據(jù)，這也造成生物仿制藥在獲批上市前的仿制成本往往比化學藥高上百倍。也正是由于生物仿制藥高昂的仿制成本和生產(chǎn)成本,普通生物仿制藥和原研藥相比,只能降價1０%~3０%,而化學仿制藥則可高達80%甚至更高。因此，化學原研藥一旦專利過期,就會受到仿制藥的激烈沖擊,而化學仿制藥也會很快搶占市場；生物原研藥則在專利過期后，其銷量受仿制藥的影響較小。生物藥和化學藥的另外一種重要區(qū)別是它們的免疫原性，幾乎全部的治療性蛋白都會在人體內(nèi)產(chǎn)生抗體。它們會通過中和內(nèi)源性因子而減少活力甚至誘發(fā)嚴重的副作用。上市后的監(jiān)管同樣有區(qū)別?；瘜W仿制藥由于和原研藥構(gòu)造相似,且構(gòu)造簡樸,歐美監(jiān)管機構(gòu)允許自動替代政策(即藥劑師能夠自主用化學仿制藥替代原研藥）,不必告知開處方的醫(yī)生。而對于生物仿制藥,歐盟法規(guī)明確規(guī)定不允許自動替代。盡管美國現(xiàn)在還沒有明確規(guī)定,但是現(xiàn)在看,后來的政策有可能向歐盟靠近。這對于有志于進軍生物仿制藥的公司而言,也是一種潛在的風險。因此,相較于化學藥，更加復雜并且普通也更加昂貴的生物藥推向市場也面臨更大的挑戰(zhàn)，特別是對于低收入水平的發(fā)展中國家而言。盡管現(xiàn)在在我國，本土生物藥(如干擾素、生長因子等）在總的藥品市場合占比例較小，而在歐美獲批的創(chuàng)新生物藥數(shù)量近幾年基本占獲批新藥總量的三成以上,由于生物藥價格普通更高，生物藥的市場份額在全球不?？焖偕仙?約占16％）。62敘述鼠源性單克隆抗體改造后的小分子抗體類型和應用人－鼠嵌合抗體

將鼠MAb的可變區(qū)和人抗體的恒定區(qū)構(gòu)成嵌合抗體由于這兩部分在空間構(gòu)造上相對獨

立,其獨特的抗體親和力保持得較好，但因鼠單抗可變區(qū)的存在,應用時仍有較強的排斥反映。

（２）改形抗體

在嵌合抗體的基礎(chǔ)上進一步將鼠ＭAb可變區(qū)中相對保守的FR替代成人的FR,保存與抗原結(jié)合的CDR部位

(3)Ｆab抗體

Fab段由重鏈V區(qū)及ＣＨ1功效區(qū)與整個輕鏈以二硫鍵形式連接而成，重要發(fā)揮抗體的抗原結(jié)合功效。Fａｂ抗體只有完整IgG的１/3。(4)單鏈抗體

單鏈抗體(SingｌｅchａｉｎFv,scFv）是由一段彈性連接肽(Ｌｉnker)把抗體可變區(qū)重鏈(VH)與輕鏈(ＶL)相連而成，是含有親代抗體全部抗原結(jié)合特異性的最小功效構(gòu)造單位。

（5)單域抗體

只含V區(qū)基因片段的小分子抗體,即只有VH或VL一種功效構(gòu)造域，也能保持原單克隆抗體的特異性。這種小分子的抗體片段就稱為單域或單區(qū)抗體,其分子量僅為整個Ig分子的1／1２。

（６）分子識別單位

只含有一種CDＲ多肽的抗體。６3、治療性酶的臨床使用范疇(1)助消化的治療酶類消化酶能夠用于補充內(nèi)源消化酶的局限性,增進食物中蛋白質(zhì)、脂肪、糖類的消化吸取,治療消化器官疾病和由其它多個因素所致的食欲不振、消化不良。（2）心血管疾病治療酶類心血管疾病治療酶類是能夠作用于血液循環(huán)系統(tǒng)的酶，臨床上含有獨特的抗凝、止血、擴展血管等功效。彈性蛋白酶能夠減少血脂，用于防治動脈粥樣硬化。（３）抗腫痛治療酶類抗腫瘤的治療酶類,如Ｌ-門冬酰胺酶，是從大腸桿菌發(fā)酵液中提取的，是世界上第一種治療癌癥的酶，是令人矚目的抗白血病藥品，臨床上用于治療淋巴白血病和急性粒細胞白血病。(4）其它治療酶類超氧化物歧化酶（SＯD)用于治療類風濕性關(guān)節(jié)炎和放射病。PEG-腺苷脫氨酶(ＰEG－AｄｅnaseＢovine)用于治療嚴重的聯(lián)合免疫缺點癥。DNＡ酶和RNA酶能夠減少痰液的黏度,用于治療慢性支氣管炎。細胞色素C用于組織缺氧急救,透明質(zhì)酸酶用于藥品擴散劑。青霉素酶能夠用于治療青霉素過敏。６4、簡述生物技術(shù)藥品質(zhì)量控制特點

(1）構(gòu)造確認的不完全性生物技術(shù)藥品多數(shù)為蛋白質(zhì)或多肽及其修飾物，含有分子量相對較大，構(gòu)造復雜多樣性和可變性等特點，通過現(xiàn)有的理化辦法和手段不能完全確認其化學構(gòu)造特性，如產(chǎn)品的空間構(gòu)象等。(2）質(zhì)量控制的過程性生物技術(shù)藥品的構(gòu)造特性容易受到多個理化因素的影響，且分離提純工藝復雜,因此其質(zhì)量控制體系是針對生產(chǎn)全過程,采用化學、物理和生物學等手段而進行的全程、實時的質(zhì)量控制。生產(chǎn)過程中每一環(huán)節(jié)或制備條件的變化均可能影響其非臨床安全性評價的合理性。(3）生物活性檢測的重要性生物技術(shù)藥品的生物活性與其藥效和毒性有一定或較好的有關(guān)性，因此藥效學和安全性研究應關(guān)注生物活性的測定。鑒于生物技術(shù)藥品構(gòu)造確認的不完全性，生物活性檢測成為反映生物技術(shù)藥品天然構(gòu)造與否遭受破壞、生產(chǎn)各階段工藝合理性和評價終產(chǎn)品質(zhì)量控制的重要內(nèi)容，也成為非臨床藥理毒理、藥代等實驗方案中劑量擬定的根據(jù)。65、基因工程中的載體應滿足什么條件１).能自我復制并能帶動插入的外源基因一起復制；（２）．載體分子的適宜位置上必須有外源DNＡ插入的位點，即克隆位點，這些位點也就是限制性內(nèi)切酶的切點，在載體上單一的限制性內(nèi)切酶位點越多越好,這樣能夠?qū)⒉煌拗菩詢?nèi)切酶切割后的外源DNA方便的插入載體。（3）．含有適宜的篩選標記,如抗藥性基因等,方便進行重組體篩選和鑒定。(4).在細胞內(nèi)穩(wěn)定性高且多拷貝,這樣能夠確保重組體穩(wěn)定且高效傳代而不易丟失。66、單克隆抗體的優(yōu)點與常規(guī)抗體相比，單克隆抗體含有下列優(yōu)點：①McAb為高純度單一抗體,在氨基酸序列以及特異性方面均為一致,檢測敏捷度極高；②能夠通過雜交瘤細胞的大規(guī)模培養(yǎng)進行生產(chǎn)；③雜交瘤細胞能夠用液氮深凍法進行長久保存;④可在分子水平上解析存在于病毒表面的抗原或受體;⑤能夠用不純的抗原制備純的ＭｃAb。但ＭｃAb也存在某些缺點:①ＭｃAb特異性太強,有時不能檢出微生物突變株；②有時不能產(chǎn)生與抗原交聯(lián)的功效；③易受pH、溫度及鹽濃度的影響，或親和力較低、半衰期短；④McAb制備程序復雜、工作量大。因此，能夠采用常規(guī)抗體解決的問題就不必制備ＭｃAb。67臨床前安全性評價的普通原則（1)常規(guī)研究的合用性鑒于生物技術(shù)藥品構(gòu)造和生物學性質(zhì)的專一性和多樣性，涉及種屬特異性、免疫原性和無法預料的多個組織親和性等,常規(guī)的藥品毒性實驗的研究思路,涉及研究環(huán)節(jié)、考察項目等，可能不一定完全適合生物技術(shù)藥品。（2)具體品種具體分析應根據(jù)具體生物技術(shù)藥品的立題設計(涉及藥品設計思路、作用機制、分子構(gòu)造特點、創(chuàng)新性程度和特點等)、質(zhì)量控制、非臨床安全性和臨床特點(臨床適應癥的性質(zhì)和用藥人群、臨床擬用藥劑量、與否已有較多人用經(jīng)驗、預期重要臨床不良反映等）和注冊法規(guī)中治療用生物技術(shù)藥品注冊分類及申報資料項目規(guī)定、其它有關(guān)技術(shù)指導原則等來對上述內(nèi)容進行具體問題具體分析。對于那些在構(gòu)造和藥理作用上與已有大量臨床經(jīng)驗的產(chǎn)品類似的生物技術(shù)藥品，可酌情減少毒性實驗。(３)良好的實驗管理規(guī)范（GLP）毒性實驗條件應符合GLP規(guī)定。若不符合ＧＬＰ條件,應闡明其對于總體安全性評價的影響。68、多肽蛋白藥品的優(yōu)勢和缺點肽類藥品多數(shù)源于內(nèi)源性肽或其它天然肽，因此,其構(gòu)造清晰,作用機制明確;與多數(shù)普通有機小分子藥品相比，肽類藥品含有活性高、用藥劑量小、毒副作用低、代謝終產(chǎn)物為氨基酸等突出特點;與蛋白類相比，較小的肽幾乎沒有免疫原性；可化學合成，產(chǎn)品純度高,質(zhì)量可控。其缺點在于：易降解、半衰期較短；生物運用度差;大多不能口服，普通為注射劑，需要研發(fā)適宜的給藥方式;大規(guī)模合成、分離純化難度大;大肽含有免疫原性。6９、生物技術(shù)藥品質(zhì)量原則的研究內(nèi)容重要涉及（1）碩士物技術(shù)藥品產(chǎn)品的均一性。(２）研究建立生物技術(shù)藥品產(chǎn)品生物學活性或者免疫學活性測定辦法。（3）研究建立生物技術(shù)藥品產(chǎn)品的國標品或參考品。(4）建立生物技術(shù)藥品目的產(chǎn)品生產(chǎn)有關(guān)雜質(zhì)限量分析辦法和原則。（５）在以上研究的基礎(chǔ)上制訂出確保上述生物技術(shù)藥品產(chǎn)品安全有效并與WHO原則相一致的質(zhì)量控制原則和藥品分析辦法。70、單克隆抗體原理體內(nèi)不同克隆的B淋巴細胞可合成不同特異性的免疫球蛋白。當機體受到抗原剌激后,抗原表面的抗原決定簇被攜帶有對應BCＲ的B細胞克隆識別，在Tｈ細胞的輔助下，該B細胞活化、增殖、分化為漿細胞,分泌針對同一抗原決定族的抗體。由于這一抗體是由來源于同一B細胞克隆產(chǎn)生的，只能識別單一抗原決定簇，因此稱為單克隆抗體。兩個或兩個以上不同特性的細胞借助物理或化學手段融合在一起，形成雜交細胞,雜交細胞同時含有兩種親本細胞的基因和特性。經(jīng)抗原免疫的小鼠脾細胞(含有大量B細胞)能分泌特定抗體，但在體外不能長久存活;而小鼠骨髓瘤細胞在體外可無限增殖，但不能分泌抗體。用一種骨髓瘤細胞和一種含有分泌抗體能力的B淋巴細胞融合形成雜交瘤細胞。這種雜交瘤細胞既含有骨髓瘤細胞無限增殖的特性,又含有免疫Ｂ細胞合成和分泌抗體的能力。由雜交瘤細胞無性繁殖形成的細胞系分泌的單克隆抗體分子在構(gòu)造、活性、親和力等方面均相似,含有高度的均一性。71、基因工程小鼠制備人全抗體的優(yōu)缺點轉(zhuǎn)基因小鼠：將人抗體生產(chǎn)基因轉(zhuǎn)入小鼠，以替代小鼠的抗體生成基因。轉(zhuǎn)基因小鼠制備人抗體的優(yōu)點是,其功效優(yōu)于其它生產(chǎn)抗人體蛋白單抗技術(shù)。局限性之處：(1)轉(zhuǎn)基因普通有體細胞突變和其它獨特的序列，造成不十分完全的人序列；(2）由于抗體是在小鼠體內(nèi)裝配,因而產(chǎn)生的單抗含有鼠糖基化模式,因此這些單抗最后并不是全人的;(3)轉(zhuǎn)基因小鼠體現(xiàn)的人Ｉg多樣性較少，并且在同一小鼠中不能夠產(chǎn)生IgＧ各亞類。72、簡述發(fā)酵工程中的菌種選育菌種選育是按照生產(chǎn)的規(guī)定，以微生物遺傳變異理論為根據(jù),采用人工辦法使菌種發(fā)生變異,再用多個篩選辦法篩選出符合規(guī)定的目的菌種。菌種選育的目的涉及改善菌種的基本特性,以提高產(chǎn)量，改善質(zhì)量,減少成本，改善工藝等。選育菌種的基本辦法涉及自然選育，誘變選育,代謝工程育種,基因定向育種，基因組改組等一系列辦法。73、生物藥品質(zhì)量控制中的安全性檢測項目涉及（1）無菌實驗按照中國藥典進行。注射用制品無菌實驗有平皿法和濾膜法?？诜屯庥弥苿z查項目還涉及需氧菌、厭氧菌、霉菌和支原體。（２)熱原實驗熱原實驗普通采用家兔法。每只家兔耳沿靜脈注射人用最大量的３倍量藥品，判斷原則為每只家兔體溫升高不得超出０.６℃,3只總和不超出１.6℃。對生物活性比較高的細胞因子產(chǎn)品能夠考慮用內(nèi)毒素檢測替代家兔熱原實驗。（3)異常毒性實驗重要檢查生產(chǎn)工藝中與否含有目的產(chǎn)品以外的有毒物質(zhì)。具體辦法參考中國藥典。慣用動物為小鼠和豚鼠,注射劑量分別是小鼠1ｍl和豚鼠5ml。由于大多數(shù)重組產(chǎn)品本身有很強的生物活性,注射量過大會造成藥品本身的生物活性引發(fā)毒性反映。因此不同重組產(chǎn)品，劑量選擇和注射途徑要根據(jù)各自的生物學活性來擬定。（1)無菌實驗按照中國藥典進行。注射用制品無菌實驗有平皿法和濾膜法?？诜屯庥弥苿z查項目還涉及需氧菌、厭氧菌、霉菌和支原體。（2)熱原實驗熱原實驗普通采用家兔法。每只家兔耳沿靜脈注射人用最大量的3倍量藥品,判斷原則為每只家兔體溫升高不得超出0.6℃，3只總和不超出1.6℃。對生物活性比較高的細胞因子產(chǎn)品能夠考慮用內(nèi)毒素檢測替代家兔熱原實驗。（3)異常毒性實驗重要檢查生產(chǎn)工藝中與否含有目的產(chǎn)品以外的有毒物質(zhì)。具體辦法參考中國藥典。慣用動物為小鼠和豚鼠，注射劑量分別是小鼠１ｍl和豚鼠5ml。由于大多數(shù)重組產(chǎn)品本身有很強的生物活性,注射量過大會造成藥品本身的生物活性引發(fā)毒性反映。因此不同重組產(chǎn)品,劑量選擇和注射途徑要根據(jù)各自的生物學活性來擬定。7４、現(xiàn)在重要用來制備人源單克隆抗體的兩種辦法(一)噬菌體抗體庫噬菌體抗體庫技術(shù)是噬菌體表面展示技術(shù)在基因工程抗體應用上的一種成功范例，它能夠模擬體內(nèi)B淋巴細胞受到刺激后分化、成熟直至分泌抗體的過程。通過噬菌體表面展示技術(shù),可將目的蛋白或多肽的編碼基因與編碼M13噬菌體顆粒末端蛋白的基因Ⅲ構(gòu)建成融合基因，將含有融合基因的重組Ｍ１3噬菌體轉(zhuǎn)染大腸桿菌,能夠在噬菌體顆粒表面展示目的蛋白。通過基因重組技術(shù),將全套人抗體重鏈和輕鏈的V區(qū)基因與Ｍ13噬菌休基因Ⅲ構(gòu)建成融合基因，在噬菌體表面以抗體Fv片段-末端蛋白融合蛋白的形式體現(xiàn)，體現(xiàn)這些融合蛋內(nèi)的噬菌體群體就構(gòu)成了噬菌體抗體庫（phaｇeantiboｄyliｂraｒy)。通過免疫法篩選,可從中得到針對某一抗原的人抗體Fv編碼基因。運用噬菌休抗體庫，不需要雜交瘤細胞就可得到目的單克降抗休的編碼基因，并且是人源性的。從理論上講,噬菌體抗體庫含有B細胞所編碼的全部抗體信息，從抗體庫中可篩選到任何一種抗體。出于該抗體庫中重、輕鏈是隨機組合的，又稱組合文庫。迄今已成功制備出多個人源單克隆抗體。(二)人源性抗體轉(zhuǎn)基因小鼠通過構(gòu)建轉(zhuǎn)基因小鼠,可使小鼠產(chǎn)生人源性單克隆抗體。用人的抗體基因轉(zhuǎn)入小鼠替代小鼠對應