高效液相色譜法-高效液相色譜法概念（儀器分析課件）

Contents目1高效液相色譜法簡介2高效液相色譜法的特點(diǎn)3高效液相色譜法與氣相色譜法的對(duì)比錄儀器分析高效液相色譜法的特點(diǎn)高效液相色譜法的特點(diǎn)儀器分析高效液相色譜法是一種色譜分離方法。高效液相色譜法是以液體為流動(dòng)相，采用高壓輸液系統(tǒng)，將具有不同極性的單一溶劑或不同比例的混合溶劑、緩沖液等流動(dòng)相泵入裝有固定相的色譜柱，經(jīng)進(jìn)樣閥注入待測(cè)樣品，由流動(dòng)相帶入柱內(nèi)，在柱內(nèi)各成分被分離后，依次進(jìn)入檢測(cè)器進(jìn)行檢測(cè)，從而實(shí)現(xiàn)對(duì)試樣的定性分析或定量分析。高效液相色譜法的特點(diǎn)儀器分析高效液相色譜法已成為化學(xué)、生化、醫(yī)學(xué)、工業(yè)、農(nóng)業(yè)、環(huán)保、商檢和法檢等學(xué)科領(lǐng)域中重要的分離分析技術(shù)，是分析化學(xué)、生物化學(xué)和環(huán)境化學(xué)工作者手中必不可少的工具。同樣能夠?qū)崿F(xiàn)多組分分離、檢測(cè)分析手段，高效液相色譜法與氣相色譜法的異同點(diǎn)各是什么？高效液相色譜法的特點(diǎn)儀器分析高效液相色譜法與氣相色譜法的異同對(duì)比項(xiàng)目相同點(diǎn)不同點(diǎn)內(nèi)容理論基礎(chǔ)分析對(duì)象流動(dòng)相操作條件塔板理論；速率理論種類、數(shù)量相態(tài)不同壓力、柱溫度不同高效液相色譜法的特點(diǎn)儀器分析分析對(duì)象氣相色譜法適于能氣化、熱穩(wěn)定性好、且沸點(diǎn)較低的樣品；但對(duì)高沸點(diǎn)、揮發(fā)性差、熱穩(wěn)定性差的樣品和離子型及高聚物的樣品，及大多數(shù)生化樣品不可檢測(cè)。高效液相色譜法適于溶解后能制成溶液的樣品(包括有機(jī)介質(zhì)溶液)，不受樣品揮發(fā)性和熱穩(wěn)定性的限制，對(duì)分子量大、難氣化、熱穩(wěn)定性差的生化樣品及高分子和離子型樣品均可檢測(cè)用途廣泛，可測(cè)有機(jī)物占有機(jī)物的80%以上。高效液相色譜法的特點(diǎn)儀器分析流動(dòng)相氣相色譜法流動(dòng)相為惰性氣體，且氣體組分與流動(dòng)相無親合作用力，只與固定相有相互作用。高效液相色譜法流動(dòng)相為液體，流動(dòng)相與組分間有親合作用力，能提高柱的選擇性、改善分離度，對(duì)分離起正向作用。且流動(dòng)相種類較多，選擇余地廣，改變流動(dòng)相極性和pH值也對(duì)分離起到調(diào)控作用，選用不同比例的兩種或兩種以上液體作為流動(dòng)相也可以增大分離選擇性。高效液相色譜法的特點(diǎn)儀器分析

操作條件對(duì)比項(xiàng)目柱溫柱壓柱效氣相色譜法加溫操作較HPLC低較HPLC低高效液相色譜法室溫高壓（液體粘度大，峰展寬小）高效：大于30000塔板/米；高靈敏：10-9g（紫外檢測(cè)）、10-11g（熒光檢測(cè)）高效液相色譜法的特點(diǎn)儀器分析

分離機(jī)理：氣相色譜法依據(jù)吸附、分配兩種原理進(jìn)行樣品分離，可供選用的固定相種類較多。高效液相色譜法可依據(jù)吸附、分配、篩析、離子交換、親和等多種原理進(jìn)行樣品分離，可供選用的固定相種類繁多。Contents目1檢測(cè)器的概述2檢測(cè)器的種類3檢測(cè)器的特點(diǎn)4檢測(cè)器的應(yīng)用及發(fā)展錄儀器分析高效液相色譜法-檢測(cè)器高效液相色譜法-檢測(cè)器儀器分析HPLC分析不受溫度和樣品沸點(diǎn)、揮發(fā)性、熱穩(wěn)定性的限制，幾乎所有的化合物包括高沸點(diǎn)、極性、離子型化合物和大分子物質(zhì)均可用高效液相色譜法分析測(cè)定。因此具有更廣闊的應(yīng)用潛力。

高效液相色譜法在基礎(chǔ)理論、儀器裝置和色譜柱等方面的研究日趨成熟，已經(jīng)成為化學(xué)、化工、環(huán)境、藥學(xué)、食品等多個(gè)領(lǐng)域中最具優(yōu)勢(shì)的分離分析方法之一。

HPLC因其具有分析速度快、檢測(cè)靈敏度好、能分析和分離高沸點(diǎn)且不能氣化的熱不穩(wěn)定生理活性物質(zhì)的特點(diǎn)而被廣泛使用。HPLC的高效分離效果結(jié)合適宜的檢測(cè)器，可以實(shí)現(xiàn)多種組分、物質(zhì)的分析測(cè)定。尤其在生物化學(xué)、藥學(xué)及臨床分析中作為標(biāo)準(zhǔn)檢測(cè)方法被收錄于藥典。EDCDMSDELSDED檢測(cè)器儀器分析高效液相色譜法-檢測(cè)器UVDRIDFD高效液相色譜法-檢測(cè)器儀器分析HPLC檢測(cè)器的作用是將柱流出物中樣品組成和含量的變化轉(zhuǎn)化為可供檢測(cè)的信號(hào)，常用檢測(cè)器有：紫外可見吸收檢測(cè)器（UVD）、熒光檢測(cè)器（FD）、示差折光檢測(cè)器（RID）、化學(xué)發(fā)光檢測(cè)器（CD）、電化學(xué)檢測(cè)器（ED）、質(zhì)譜檢測(cè)器（MSD）和蒸發(fā)光散射檢測(cè)器（ELSD）等。一、紫外可見吸收檢測(cè)器（ultraviolet－visibledetector，UVD）

紫外可見吸收檢測(cè)器(UVD)是HPLC中應(yīng)用最廣泛的檢測(cè)器之一，幾乎所有的液相色譜儀都配有這種檢測(cè)器。其特點(diǎn)是靈敏度較高，線性范圍寬，噪聲低，適用于梯度洗脫，對(duì)強(qiáng)吸收物質(zhì)檢測(cè)限可達(dá)1ng，檢測(cè)后不破壞樣品，可用于制備，并能與任何檢測(cè)器串聯(lián)使用。紫外可見檢測(cè)器的工作原理與結(jié)構(gòu)同一般分光光度計(jì)相似，實(shí)際上就是裝有流動(dòng)地的紫外可見光度計(jì)。高效液相色譜法-檢測(cè)器儀器分析高效液相色譜法-檢測(cè)器儀器分析二、熒光檢測(cè)器(fluorescencedetector，F(xiàn)D)

熒光檢測(cè)器是一種高靈敏度、有選擇性的檢測(cè)器，可檢測(cè)能產(chǎn)生熒光的化合物。某些不發(fā)熒光的物質(zhì)可通過化學(xué)衍生化生成熒光衍生物，再進(jìn)行熒光檢測(cè)。其最小檢測(cè)濃度可達(dá)0.1ng／ml，適用于痕量分析；一般情況下熒光檢測(cè)器的靈敏度比紫外檢測(cè)器約高2個(gè)數(shù)量級(jí)，但其線性范圍不如紫外檢測(cè)器寬。

近年來，采用激光作為熒光檢測(cè)器的光源而產(chǎn)生的激光誘導(dǎo)熒光檢測(cè)器極大地增強(qiáng)了熒光檢測(cè)的信噪比，因而具有很高的靈敏度，在痕量和超痕量分析中得到廣泛應(yīng)用。高效液相色譜法-檢測(cè)器儀器分析高效液相色譜法-檢測(cè)器儀器分析三、示差折光檢測(cè)器（RID）示差折光檢測(cè)器是一種濃度型通用檢測(cè)器，對(duì)所有溶質(zhì)都有響應(yīng)，某些不能用選擇性檢測(cè)器檢測(cè)的組分，如高分子化合物、糖類、脂肪烷烴等，可用示差檢測(cè)器檢測(cè)。示差檢測(cè)器是基于連續(xù)測(cè)定樣品流路和參比流路之間折射率的變化來測(cè)定樣品含量的。光從一種介質(zhì)進(jìn)入另一種介質(zhì)時(shí)，由于兩種物質(zhì)的折射率不同就會(huì)產(chǎn)生折射。只要樣品組分與流動(dòng)相的折光指數(shù)不同，就可被檢測(cè)，二者相差愈大，靈敏度愈高，在一定濃度范圍內(nèi)檢測(cè)器的輸出與溶質(zhì)濃度成正比。高效液相色譜法-檢測(cè)器儀器分析高效液相色譜法-檢測(cè)器儀器分析四、

電化學(xué)檢測(cè)器(elec)chemicaldetector，ED)

電化學(xué)檢測(cè)器主要有安培、極譜、庫侖、電位、電導(dǎo)等檢測(cè)器，屬選擇性檢測(cè)器，可檢測(cè)具有電活性的化合物。目前它已在各種無機(jī)和有機(jī)陰陽離子、生物組織和體液的代謝物、食品添加劑、環(huán)境污染物、生化制品、農(nóng)藥及醫(yī)藥等的測(cè)定中獲得了廣泛的應(yīng)用。其中，電導(dǎo)檢測(cè)器在離子色譜中應(yīng)用最多。電化學(xué)檢測(cè)器的優(yōu)點(diǎn)是：①靈敏度高，最小檢測(cè)量一般為ng級(jí)，有目可達(dá)pg級(jí)；②選擇性好，可測(cè)定大量非電活性物質(zhì)中極痕量的電活性物質(zhì)；③線性范圍寬，一般為4～5個(gè)數(shù)量級(jí)；④設(shè)備簡單，成本較低；⑤易于自動(dòng)操作。

高效液相色譜法-檢測(cè)器儀器分析高效液相色譜法-檢測(cè)器儀器分析

五、化學(xué)發(fā)光檢測(cè)器(c。iluminescencedetector，CD)

化學(xué)發(fā)光檢測(cè)器是近年來發(fā)展起來的一種快速、靈敏的新型檢測(cè)器，因其設(shè)備簡單、價(jià)廉、線性范圍寬等優(yōu)點(diǎn)。其原理是基于某些物質(zhì)在常溫下進(jìn)行化學(xué)反應(yīng)，生成處于激發(fā)態(tài)勢(shì)反應(yīng)中間體或反應(yīng)產(chǎn)物，當(dāng)它們從激發(fā)態(tài)返回基態(tài)時(shí)，就發(fā)射出光子。由于物質(zhì)激發(fā)態(tài)的能量是來自化學(xué)反應(yīng)，故叫作化學(xué)發(fā)光。當(dāng)分離組分從色譜柱中洗脫出來后，立即與適當(dāng)?shù)幕瘜W(xué)發(fā)光試劑混合，引起化學(xué)反應(yīng)，導(dǎo)致發(fā)光物質(zhì)產(chǎn)生輻射，其光強(qiáng)度與該物質(zhì)的濃度成正比。

這種檢測(cè)器不需要光源，也不需要復(fù)雜的光學(xué)系統(tǒng)，只要有恒流泵，將化學(xué)發(fā)光試劑以一定的流速泵入混合器中，使之與柱流出物迅速而又均勻地混合產(chǎn)生化學(xué)發(fā)光，通過光電倍增管將光信號(hào)變成電信號(hào)，就可進(jìn)行檢測(cè)。這種檢測(cè)器的最小檢出量可達(dá)10-12g。高效液相色譜法-檢測(cè)器儀器分析高效液相色譜法-檢測(cè)器儀器分析六、蒸發(fā)光散射檢測(cè)器（ELSD）ELSD也是一種通用型的檢測(cè)器，可檢測(cè)揮發(fā)性低于流動(dòng)相的任何樣品，而不需要樣品含有發(fā)色基團(tuán)。ELSD的響應(yīng)值與樣品的質(zhì)量成正比，因而能用于測(cè)定樣品的純度或者檢測(cè)未知物。ELSD靈敏度比RID高，對(duì)溫度變化不敏感，基線穩(wěn)定，可用于梯度洗脫。現(xiàn)在ELSD已被廣泛應(yīng)用于碳水化合物、類脂、脂肪酸和氨基酸、藥物以及聚合物等的檢測(cè)。高效液相色譜法-檢測(cè)器儀器分析高效液相色譜法-檢測(cè)器儀器分析七、質(zhì)譜檢測(cè)器（MSD）

MSD是另一種通用型檢測(cè)器，在靈敏度、選擇性、通用性及化合物的分子量和結(jié)構(gòu)信息的提供等方面都有突出的優(yōu)點(diǎn)。但它的昂貴操作費(fèi)用和復(fù)雜性限制了它的推廣應(yīng)用。高效液相色譜法-檢測(cè)器儀器分析高效液相色譜法-檢測(cè)器儀器分析光學(xué)類檢測(cè)器：UVD、FD通用型檢測(cè)器：RID、MSD、ELSD、ED、CDContents目1認(rèn)識(shí)高效液相色譜法的特點(diǎn)2熟悉高效液相色譜的分類錄項(xiàng)目4：頭孢拉定分析

（高效液相色譜法定量分析）任務(wù)1：認(rèn)識(shí)高效液相色譜法子任務(wù)1：認(rèn)識(shí)高效液相色譜法的特點(diǎn)

以氣體為流動(dòng)相的色譜稱為氣相色譜；以液體為流動(dòng)相的色譜稱為液相色譜。高效液相色譜法（HighPerformanceLiquidChromatography,HPLC）色譜圖子任務(wù)1：認(rèn)識(shí)高效液相色譜法的特點(diǎn)

發(fā)展歷史1903年俄國植物化學(xué)家茨維特（Tswett）首次提出“色譜法”（Chromatography）和“色譜圖”（Chromatogram）的概念。他在論文中寫到：“（原文）一植物色素的石油醚溶液從一根主要裝有碳酸鈣吸附劑的玻璃管上端加入，沿管濾下，后用純石油醚淋洗，結(jié)果按照不同色素的吸附順序在管內(nèi)觀察到它們相應(yīng)的色帶，就象光譜一樣，稱之為色譜圖?！?930年以后，相繼出現(xiàn)了紙色譜、離子交換色譜和薄層色譜等液相色譜技術(shù)。1952年，英國學(xué)者M(jìn)artin和Synge基于他們?cè)诜峙渖V方面的研究工作，提出了關(guān)于氣－液分配色譜的比較完整的理論和方法。1960年中后期，氣相色譜理論和實(shí)踐發(fā)展，以及機(jī)械、光學(xué)、電子等技術(shù)上的進(jìn)步，液相色譜又開始活躍。到60年代末期把高壓泵和化學(xué)鍵合固定相用于液相色譜就出現(xiàn)了HPLC。子任務(wù)1：認(rèn)識(shí)高效液相色譜法的特點(diǎn)

子任務(wù)1：認(rèn)識(shí)高效液相色譜法的特點(diǎn)

高效液相色譜法（HPLC）是在經(jīng)典液相色譜法的基礎(chǔ)上，隨著現(xiàn)代科學(xué)技術(shù)的發(fā)展而發(fā)展起來的一種高效、高速、高靈敏度的分離方法。由于固定相和流動(dòng)相的多樣性，分離機(jī)理也是多種多樣。從原理上講，只要是能溶解在流動(dòng)相中的物質(zhì)都可以用高效液相色譜來分離和分析。

方法項(xiàng)目高效液相色譜法經(jīng)典液相（柱）色譜法色譜柱：柱長/cm柱內(nèi)徑/mm10~252~1010~20010~50固定相粒度：粒徑/um篩孔/目5~502500~30075~600200~30色譜柱入口壓力/Mpa2~200.001~0.1色譜柱柱效/（理論塔板數(shù)/m）2×102~5×1042~50進(jìn)樣量/g10-6~10-21~10分析時(shí)間/h0.05~1.01~20特點(diǎn)：高壓、高效、高速、高靈敏度、應(yīng)用范圍廣（表4-6）

高沸點(diǎn)、對(duì)熱不穩(wěn)定、相對(duì)分子質(zhì)量大的有機(jī)及生化試樣的高效分離分析方法。子任務(wù)1：認(rèn)識(shí)高效液相色譜法的特點(diǎn)

高效液相色譜儀裝置示意圖流動(dòng)相石油醚混合色素葉綠素葉黃素胡蘿卜素分離組分色譜柱固定相碳酸鈣氣相色譜法與高效液相色譜法異同點(diǎn)子任務(wù)1：認(rèn)識(shí)高效液相色譜法的特點(diǎn)

氣相色譜法與高效液相色譜法異同點(diǎn)子任務(wù)1：認(rèn)識(shí)高效液相色譜法的特點(diǎn)

氣相色譜法與高效液相色譜法異同點(diǎn)子任務(wù)1：認(rèn)識(shí)高效液相色譜法的特點(diǎn)

相同點(diǎn)1.都是利用物質(zhì)在流動(dòng)向和固定相中分配系數(shù)不同而分離的。2.都根據(jù)色譜流出曲線的色譜峰位置（保留值）進(jìn)行定性分析，根據(jù)色譜峰面積或峰高進(jìn)行定量測(cè)定；根據(jù)色譜峰位置及其寬度，可以對(duì)色譜柱分離情況進(jìn)行評(píng)價(jià)。3.進(jìn)行定量分析都可用外標(biāo)法、內(nèi)標(biāo)法及歸一化法。4.色譜分離及色譜柱的分離效能可用塔板理論和速率理論進(jìn)行解釋。高效液相色譜按分離機(jī)理分類液固吸附色譜液液分配色譜鍵合相色譜凝膠色譜離子色譜子任務(wù)2：熟悉高效液相色譜的分類

一、液固吸附色譜1.分離原理組分在固定相吸附劑上的吸附作用不同進(jìn)行分離與吸附劑結(jié)構(gòu)和性質(zhì)相似的組分易被吸附，保留時(shí)間長，后出峰；反之，與吸附劑結(jié)構(gòu)和性質(zhì)差異較大的組分不易被吸附，保留時(shí)間短，先出峰。子任務(wù)2：熟悉高效液相色譜的分類

應(yīng)用：適用于分離相對(duì)分子質(zhì)量中等的油溶性試樣，對(duì)具有極性官能團(tuán)的化合物和異構(gòu)體有較高選擇性；對(duì)同系物的選擇性小，對(duì)不同族化合物具有好的選擇分離能力。

2.固定相子任務(wù)2：熟悉高效液相色譜的分類

極性非極性硅膠、氧化鋁、分子篩，；分離酸性物質(zhì)，如酚類、羧酸活性碳、多孔石墨化炭黑（5-10μm），苯乙烯-二乙烯基苯共聚物的單分散多孔微球固定相酸性吸附劑堿性吸附劑硅膠、硅酸鎂；分離堿性物質(zhì)，如胺類吸附劑結(jié)構(gòu)類型薄殼型硅膠全多孔型硅膠直徑為30～40μm的玻璃珠表面涂布一層1-2μm厚的硅膠微粒，孔徑均一、滲透性好、傳質(zhì)快但柱容量有限。粒徑為5～10μm的硅膠微粒，顆粒和孔徑均一，柱容量大，為液固色譜固定相和鍵合固定相的主要基質(zhì)。選擇流動(dòng)相原則：極性大的試樣用極性較強(qiáng)的流動(dòng)相，極性小的則用極性弱的流動(dòng)相。極性強(qiáng)度的表示方法：用溶劑強(qiáng)度參數(shù)

°表示。子任務(wù)2：熟悉高效液相色譜的分類

3.流動(dòng)相°：每單位面積吸附劑表面溶劑的吸附能力?！阍酱螅瑯O性越大。（表4-9）為獲得合適的溶劑極性，一般采用兩種或兩種以上不同極性的溶劑按一定比例混合后使用。一、液液分配色譜1.分離原理流動(dòng)相：液相固定相：液相涂漬在惰性載體或硅膠上。組分在固定相和流動(dòng)相上的分配，分配系數(shù)K大的組分，保留時(shí)間長，后出柱。子任務(wù)2：熟悉高效液相色譜的分類

對(duì)極性化合物和非極性化合物都能實(shí)現(xiàn)較好的分離效果。根據(jù)固定相和流動(dòng)相的相對(duì)極性的不同分類子任務(wù)2：熟悉高效液相色譜的分類

（1）正相分配色譜法（normalphase）：固定相極性＞流動(dòng)相極性（2）反相分配色譜法（reversephase）：固定相極性＜流動(dòng)相極性固定相載體上涂布的是極性固定液，流動(dòng)相為非極性溶劑，適用于極性化合物的分離，極性小的組分先流出，極性大的組分后流出。固定相載體上涂布的是極性較弱或非極性的固定液，流動(dòng)相為極性較強(qiáng)的溶劑，適用于非極性化合物的分離，極性組分先流出，非極性組分后流出。組成惰性載體（擔(dān)體）：固體吸附劑，如硅膠、氧化鋁固定液（表4-10）子任務(wù)2：熟悉高效液相色譜的分類

2.固定相正相分配色譜法的固定液反相分配色譜法的固定液β,β’-氧二丙腈乙二醇甲基硅酮1,2,3-三（2-氰乙氧基）丙烷乙二胺氰丙基硅酮聚乙二醇400,600二甲基亞砜聚烯烴甘油，丙二醇硝基甲烷正庚烷冰乙酸二甲基甲酰胺（DMF）防止固定液流失的辦法子任務(wù)2：熟悉高效液相色譜的分類

（1）盡量選擇對(duì)固定液僅有較低溶解度的溶劑作為流動(dòng)相。（2）在分析柱前加一根預(yù)飽和柱。流動(dòng)相進(jìn)入色譜柱前，先通過預(yù)飽和柱，預(yù)先用固定液把流動(dòng)相飽和。（3）使流動(dòng)相保持低速經(jīng)過固定相，并保持色譜柱溫度穩(wěn)定。（4）選擇時(shí)若溶解樣品的溶劑對(duì)固定液有較大的溶解度，應(yīng)避免過大的進(jìn)樣量。3.流動(dòng)相組成洗脫劑：溶解和分離試樣調(diào)節(jié)劑：調(diào)節(jié)極性，改變組分在柱中的移動(dòng)速度和分離狀態(tài)子任務(wù)2：熟悉高效液相色譜的分類

正相分配色譜：流動(dòng)相主體為低極性溶劑，可加入＜20%的極性改進(jìn)劑反相分配色譜：流動(dòng)相主體為水，可加入＜10%的改性劑流動(dòng)相的選擇原則（1）對(duì)試樣有適當(dāng)?shù)娜芙舛?，以防止在柱頭產(chǎn)生沉淀。（2）與固定相互不相溶，不與試樣發(fā)生化學(xué)反應(yīng)。（3）應(yīng)與所用檢測(cè)器匹配。（4）黏度應(yīng)較小，以獲得較高的柱效。（5)純度高，毒性小，價(jià)格便宜，不污染環(huán)境和腐蝕儀器。三、鍵合相色譜法鍵合相色譜：采用化學(xué)鍵合相的液相色譜法。鍵合固定相：利用化學(xué)反應(yīng)將各種不同的有機(jī)基團(tuán)以化學(xué)鍵的形式連接到載體表面的游離羥基上而制得。形成化學(xué)鍵合相的條件：一是載體表面應(yīng)有某種活性基團(tuán)；二是固定液應(yīng)有與載體表面發(fā)生化學(xué)反應(yīng)的官能團(tuán)。子任務(wù)2：熟悉高效液相色譜的分類

分類正相鍵合色譜法：固定相極性＞流動(dòng)相極性，分離極性與強(qiáng)極性化合物反相鍵合色譜法：固定相極性＜流動(dòng)相極性，分離非極性、極性化合物等鍵合固定相應(yīng)符合的條件（1）化學(xué)穩(wěn)定性和熱穩(wěn)定性好，在使用中固定液不易流失。（2）在pH=2～8的溶液中不變質(zhì)，選擇性好，有利于梯度洗脫1.分離原理子任務(wù)2：熟悉高效液相色譜的分類

（1）正相鍵合相色譜分離原理（2）反相鍵合相色譜分離原理正相鍵合相色譜使用的是極性鍵合固定相[以極性有機(jī)基團(tuán)如胺基、腈基、醚基等鍵合在硅膠表面制成]，溶質(zhì)在此類固定相上的分離機(jī)理屬于分配色譜。反相鍵合相色譜使用的是極性較小的鍵合固定相[以極性較小的基團(tuán)如苯基、烷基等鍵合在硅膠表面制成]，分離機(jī)理可用疏溶劑作用解釋。2.固定相基體：全多孔或薄殼型微粒硅膠分類：非極性、弱極性、極性（表4-11）子任務(wù)2：熟悉高效液相色譜的分類

非極性烷基鍵合相：應(yīng)用最廣泛的柱填料，C18反相鍵合相（ODS)，可完成高效液相色譜分析任務(wù)的70%～80%。3.流動(dòng)相正相鍵合相色譜：采用與正相液-液分配色譜相似的流動(dòng)相，主體為己烷（或庚烷）反相鍵合相色譜：采用與反相液-液分配色譜相似的流動(dòng)相，主體為水，為改善分離的選擇性常加入甲醇、乙腈、四氫呋喃等。甲醇-水體系應(yīng)用較多。四、凝膠色譜法又稱條件排阻色譜法或空間排阻色譜法。原理：基于分子大小不同進(jìn)行分離的一種色譜分析方法。分子體積大先流出，分子體積越小，保留時(shí)間越長。固定相凝膠：化學(xué)惰性的多孔性凝膠。應(yīng)用：分離、鑒定高分子聚合物。如研究聚合機(jī)理，選擇聚合工藝及條件，并考察聚合材料在加工和使用過程中相對(duì)分子質(zhì)量的變化。子任務(wù)2：熟悉高效液相色譜的分類

子任務(wù)2：熟悉高效液相色譜的分類

分析實(shí)例：總結(jié)

按分離機(jī)理分類高效液相色譜可分為液固吸附色譜、液液分配色譜、鍵合相色譜、凝膠色譜、離子色譜等。1.液固吸附色譜

（1）分離原理液固色譜是基于各組分吸附能力的差異進(jìn)行混合物分離的（2）固定相吸附色譜固定相可分為極性和非極性兩大類。極性固定相主要有硅膠（酸性）、氧化鎂和硅酸鎂分子篩（堿性）等。非極性固定相有高強(qiáng)度多孔微?；钚蕴亢投嗫资亢冢?）流動(dòng)相在液固色譜中，選擇流動(dòng)相的基本原則是極性大的試樣用極性較強(qiáng)的流動(dòng)相，極性小的則用低極性流動(dòng)相。流動(dòng)相的極性強(qiáng)度可用溶劑強(qiáng)度參數(shù)ε°表示。ε°是指每單位面積吸附劑表面的溶劑的吸附能力，ε°越大，表明流動(dòng)相的極性也越大。總結(jié)

2.液-液分配色譜（1）分離原理在液-液分配色譜中，一個(gè)液相作為流動(dòng)相，另一個(gè)液相（即固定液）則分散在很細(xì)的惰性載體或硅膠上作為固定相。（2）固定相分配色譜固定相由兩部分組成，一部分是惰性載體，另一部分是涂漬在惰性載體上的固定液。（3）流動(dòng)相在正相分配色譜中，使用的流動(dòng)相類似于液固色譜中使用極性吸附劑時(shí)應(yīng)用的流動(dòng)相。此時(shí)流動(dòng)相主體為己烷、庚烷，可加入<20%的極性改性劑，如1-氯丁烷、異丙醚、二氯甲烷、四氫呋喃、氯仿、乙酸乙酯、乙醇、乙腈等。在反相分配色譜中，使用的流動(dòng)相類似于液固色譜中使用非極性吸附劑時(shí)應(yīng)用的流動(dòng)相。此時(shí)流動(dòng)相的主體為水，可加入一定量的改性劑，如二甲基亞砜、乙二醇、乙腈、甲醇、丙酮、對(duì)二氧六環(huán)、乙醇、四氫呋喃、異丙醇等。總結(jié)

3.鍵合相色譜法(1)分離原理①正相鍵合相色譜的分離原理正相鍵合相色譜使用的是極性鍵合固定相（以極性有機(jī)基團(tuán)如胺基（-NH2）、腈基（-CN）、醚基（-O-）等鍵合在硅膠表面制成的），溶質(zhì)在此類固定相上的分離機(jī)理屬于分配色譜。②反相鍵合相色譜的分離原理反相鍵合相色譜使用的是極性較小的鍵合固定相（以極性較小的有機(jī)基團(tuán)如苯基、烷基等鍵合在硅膠表面制成的），其分離機(jī)理可用疏溶劑作用理論來解釋。（2）固定相化學(xué)鍵合固定相廣泛使用全多孔或薄殼型微粒硅膠做為基體。（3）流動(dòng)相總結(jié)1.知識(shí)目標(biāo)：高效液相色譜法與氣相色譜、經(jīng)典液相色譜的異同；高效液相色譜法的分類。2.能力目標(biāo)：熟悉高效液相色譜法的應(yīng)用領(lǐng)域。授課任務(wù):分10個(gè)任務(wù)，10個(gè)組，每個(gè)組出一名同學(xué)進(jìn)行授課，其他組員協(xié)助、補(bǔ)充，回答問題。1.熟悉高效液相色譜儀的工作流程（第一組）2.高壓輸液系統(tǒng)：（1）貯液器（第二組）（2）高壓輸液泵、過濾器（第三組）（3）梯度洗脫裝置（第四組）3.進(jìn)樣系統(tǒng)（第五組）4.分離系統(tǒng)（第六組）5.檢測(cè)系統(tǒng):（1）HPLC檢測(cè)器的要求，分類（第七組）（2）紫外-可見光檢測(cè)器（第八組）（3）二極管陣列檢測(cè)器、熒光檢測(cè)器（第九組）（4）折光指數(shù)檢測(cè)器、蒸發(fā)激光散射檢測(cè)器（第十組）6.數(shù)據(jù)處理系統(tǒng)任務(wù)2：認(rèn)識(shí)高效液相色譜儀

Contents目1熟悉高效液相色譜工作流程2熟悉高效液相色譜儀組成和各部分作用3學(xué)習(xí)高效液相色譜儀的使用錄項(xiàng)目4：頭孢拉定分析

（高效液相色譜法定量）任務(wù)2：認(rèn)識(shí)高效液相色譜儀

子任務(wù)1：熟悉高效液相色譜工作流程

高效液相色譜儀結(jié)構(gòu)示意圖系統(tǒng)一般由輸液泵、進(jìn)樣器、色譜柱、檢測(cè)器、數(shù)據(jù)記錄及處理裝置等組成。其中輸液泵、色譜柱、檢測(cè)器是關(guān)鍵部件。子任務(wù)1：認(rèn)識(shí)紅外光譜儀工作流程高壓輸液泵將貯液器中的流動(dòng)相以穩(wěn)定的流速（或壓力）輸送至分析體系，在色譜柱之前通過進(jìn)樣器將樣品導(dǎo)入，流動(dòng)相將樣品依次帶入預(yù)柱、色譜柱，在色譜柱中各組分被分離，并依次隨流動(dòng)相流至檢測(cè)器，檢測(cè)到的信號(hào)送至工作站記錄、處理和保存。子任務(wù)2：熟悉高效液相色譜儀組成和各部分作用一、高壓輸液系統(tǒng)高壓輸液系統(tǒng)一般包括貯液器、高壓輸液泵、過濾器、梯度洗脫裝置等。1．貯液器貯液器主要用來提供足夠數(shù)量的符合要求的流動(dòng)相以完成分析工作。過濾裝置脫氣裝置材質(zhì)：不銹鋼、玻璃、聚四氟乙烯容積：0.5～2L溶劑：過濾、脫氣子任務(wù)2：熟悉高效液相色譜儀組成和各部分作用2．高壓輸液泵主要部件之一，壓力：150×105～350×105

Pa。作用：將流動(dòng)相以穩(wěn)定的流速或壓力輸送到色譜分離系統(tǒng)。應(yīng)具有壓力平穩(wěn)、脈沖小、流量穩(wěn)定可調(diào)、耐腐蝕等特性。高壓輸液泵子任務(wù)2：熟悉高效液相色譜儀組成和各部分作用高壓泵分類色譜泵恒壓泵恒流泵氣動(dòng)放大泵注射泵隔膜泵單柱塞泵雙柱塞泵并聯(lián)泵串聯(lián)泵往復(fù)泵子任務(wù)2：熟悉高效液相色譜儀組成和各部分作用3.過濾器在高壓輸液泵的進(jìn)口和它的出口與進(jìn)樣閥之間，應(yīng)設(shè)置過濾器。高壓輸液泵的活塞和進(jìn)樣閥閥芯的機(jī)械加工精密度非常高，微小的機(jī)械雜質(zhì)進(jìn)入流動(dòng)相，會(huì)導(dǎo)致上述部件的損壞，同時(shí)機(jī)械雜質(zhì)在柱頭的積累，會(huì)造成柱壓升高，使色譜柱不能正常工作。過濾器的濾芯用不銹鋼材料制成，孔徑2～3μm，耐有機(jī)溶劑浸蝕，若發(fā)現(xiàn)過濾器堵塞（流量減小），可將其進(jìn)入稀HNO3溶液中，在超聲波清洗器中振動(dòng)10～15min，即可將堵塞的固體雜質(zhì)洗出。若清洗后仍達(dá)不到要求，則應(yīng)更換濾芯。子任務(wù)2：熟悉高效液相色譜儀組成和各部分作用4.梯度洗脫裝置定義：梯度洗脫也稱溶劑程序，指一個(gè)樣品在分離過程中，溶劑組分或溶劑強(qiáng)度隨洗脫時(shí)間按一定規(guī)律連續(xù)變化的洗脫方式。高壓梯度：只用于二元梯度低壓梯度：一個(gè)高壓輸出泵子任務(wù)2：熟悉高效液相色譜儀組成和各部分作用特點(diǎn)：改善分離，加快分析速度；改善峰形，減少拖尾；可能引起基線漂移。下圖顯示了等度洗脫與梯度洗脫在分離度上造成的不同影響。子任務(wù)2：熟悉高效液相色譜儀組成和各部分作用二、進(jìn)樣系統(tǒng)

進(jìn)樣器是將樣品溶液準(zhǔn)確送入色譜柱的裝置，要求密封性好，死體積小，重復(fù)性好，進(jìn)樣引起色譜分離系統(tǒng)的壓力和流量波動(dòng)要很小。

1.六通閥進(jìn)樣器：進(jìn)樣體積由定量管（10L、20L）確定。操作步驟：閥柄置于Load，用平頭微量注射器注入樣品溶液，再將閥柄置于Inject，流動(dòng)相與定量管接通，進(jìn)入色譜柱。子任務(wù)2：熟悉高效液相色譜儀組成和各部分作用2.自動(dòng)進(jìn)樣器自動(dòng)進(jìn)樣器可實(shí)現(xiàn)批量進(jìn)樣。計(jì)算機(jī)自動(dòng)控制定量閥、取樣、進(jìn)樣、復(fù)位、清洗和樣品盤轉(zhuǎn)動(dòng)等連續(xù)調(diào)節(jié)，進(jìn)樣重復(fù)性高，適合于大量樣品的分析，節(jié)省人力，可實(shí)現(xiàn)自動(dòng)化操作。子任務(wù)2：熟悉高效液相色譜儀組成和各部分作用三、分離系統(tǒng)組成：色譜柱、恒溫裝置、連接管。1.色譜柱（1）柱管：內(nèi)徑4.6mm、3.9mm，長10-50cm（2）固定相:5-10μm子任務(wù)2：熟悉高效液相色譜儀組成和各部分作用注意：色譜柱填充完畢后是有方向的，即流動(dòng)相的方向應(yīng)與柱的填充方向一致。色譜柱的管外都以箭頭顯著標(biāo)示了該柱的使用方向，安裝和更換色譜柱時(shí)一定要使流動(dòng)相按箭頭所指方向流動(dòng)。2.色譜柱恒溫裝置提供柱溫有利于增加樣品在流動(dòng)相中的溶解度，從而縮短分析時(shí)間；有利于改善傳質(zhì)過程，減少傳質(zhì)阻力，提高柱效；有利于降低流動(dòng)相黏度，從而降低柱壓。恒溫裝置：水浴式、電加熱式、恒溫箱式。柱溫范圍：室溫-65℃。子任務(wù)2：熟悉高效液相色譜儀組成和各部分作用四、檢測(cè)系統(tǒng)檢測(cè)器：用于連續(xù)監(jiān)測(cè)被測(cè)色譜系統(tǒng)分離后的柱流出物組成和含量變化的裝置。作用：將柱流出物中樣品組成和含量的變化轉(zhuǎn)化為可供檢測(cè)的信號(hào)，完成定性定量分析的任務(wù)。要求：靈敏度高、響應(yīng)快、重現(xiàn)性好、線性范圍寬、適用范圍廣、對(duì)流動(dòng)相流量和溫度波動(dòng)不敏感、死體積小等特點(diǎn)。子任務(wù)2：熟悉高效液相色譜儀組成和各部分作用檢測(cè)器分類檢測(cè)器通用型檢測(cè)器專用型檢測(cè)器連續(xù)測(cè)量色譜柱流出物（流動(dòng)相、樣品）的全部特性變化，通常采用差分測(cè)量法。差折光檢測(cè)器、電導(dǎo)檢測(cè)器和蒸發(fā)光散射檢測(cè)器適用范圍廣、但靈敏度低，易受溫度和流量波動(dòng)的影響，造成較大的漂移和噪聲，不適合痕量分析和梯度洗脫。測(cè)量被分離樣品組分某種特性的變化。紫外檢測(cè)器、熒光檢測(cè)器、安培檢測(cè)器。靈敏高，對(duì)流動(dòng)相流量和溫度變化不敏感，可用于痕量分析和梯度洗脫。

a.紫外檢測(cè)器應(yīng)用最廣，對(duì)大部分有機(jī)化合物有響應(yīng)。

特點(diǎn)：靈敏度高；線形范圍寬；流通池可做得很小(1mm×10mm，容積5-8μL)；

對(duì)流動(dòng)相的流速和溫度變化不敏感；波長可選，易于操作；可用于梯度洗脫。子任務(wù)2：熟悉高效液相色譜儀組成和各部分作用b.光電二極管陣列檢測(cè)器紫外檢測(cè)器的重要進(jìn)展；光電二極管陣列檢測(cè)器：1024個(gè)二極管陣列，各檢測(cè)特定波長，計(jì)算機(jī)快速處理，三維立體譜圖。子任務(wù)2：熟悉高效液相色譜儀組成和各部分作用子任務(wù)2：熟悉高效液相色譜儀組成和各部分作用C.熒光檢測(cè)器

（Fluorescencedetector）高靈敏度，高選擇性。對(duì)多環(huán)芳烴，維生素B、黃曲霉素、卟啉類化合物、農(nóng)藥、藥物、氨基酸、甾類化合物等有響應(yīng)。子任務(wù)2：熟悉高效液相色譜儀組成和各部分作用D.示差折光檢測(cè)器

（Differentialrefractiveindexdetector）除紫外檢測(cè)器之外應(yīng)用最多的檢測(cè)器?？蛇B續(xù)檢測(cè)參比池和樣品池中流動(dòng)相之間的折光指數(shù)差值。差值與濃度成正比。

通用型檢測(cè)器（每種物質(zhì)具有不同的折光指數(shù)）。靈敏度低、對(duì)溫度敏感，不能用于梯度洗脫。

偏轉(zhuǎn)式、反射式和干涉型三種。子任務(wù)2：熟悉高效液相色譜儀組成和各部分作用子任務(wù)2：熟悉高效液相色譜儀組成和各部分作用五、數(shù)據(jù)處理系統(tǒng)（色譜工作站）HPLC的分析結(jié)果除可用記錄儀繪制譜圖外，現(xiàn)在廣泛適用色譜數(shù)據(jù)處理機(jī)和色譜工作站來記錄和處理色譜分析結(jié)果。子任務(wù)3：學(xué)習(xí)高效液相色譜儀的使用一、高效液相色譜分析操作過程樣品的采集→樣品的制備→標(biāo)準(zhǔn)樣品溶液的制備→流動(dòng)相的配制→色譜柱的安裝和流動(dòng)相的更換→開機(jī)→分析樣品（包括進(jìn)樣、數(shù)據(jù)采集、定性分析、譜圖優(yōu)化和數(shù)據(jù)處理）→關(guān)機(jī)與結(jié)束工作。二、樣品制備1．樣品的采集樣品的采集同氣相色譜分析。2．樣品的制備樣品的制備同氣相色譜分析。三、標(biāo)準(zhǔn)溶液的制備子任務(wù)3：學(xué)習(xí)高效液相色譜儀的使用四、流動(dòng)相的配制五、色譜柱的安裝和流動(dòng)相的更換六、高效液相色譜的開機(jī)七、分析樣品1、進(jìn)樣2、數(shù)據(jù)采集3、定性分析4、譜圖優(yōu)化和數(shù)據(jù)處理八、關(guān)機(jī)與結(jié)束工作總結(jié)知識(shí)目標(biāo)：（1）高效液相色譜法儀工作流程；(2)高效液相色譜儀組成和各部分作用；（3）高效液相色譜儀的使用。能力目標(biāo)：（1）熟悉高效液相色譜儀各部件及作用（2）熟悉高效液相色譜儀工作流程（3）會(huì)進(jìn)行樣品液制備，流動(dòng)相配制、過濾、脫氣、更換，色譜柱安裝。（4）會(huì)操作儀器進(jìn)行樣品分析，數(shù)據(jù)處理。期末復(fù)習(xí)填空題1、電化學(xué)電池是

和

進(jìn)行相互轉(zhuǎn)換的電化學(xué)反應(yīng)器，分為

和

兩類。2、電位分析法中常用的指示電極有

和

兩大類。3、原子吸收分光光度計(jì)主要由

、

、

、

等四部分組成。4、朗伯比爾定律可以寫成

，應(yīng)用時(shí)溶液濃度不宜超過

，且多組分測(cè)定時(shí)吸光度A具有

性。5、在中紅外光區(qū)中，一般把4000～1330cm-1區(qū)域叫做

，而把13300～400cm-1區(qū)域叫做

。6、共軛作用或引入助色團(tuán)可使紫外-可見吸收峰向長波方向移動(dòng)，這種現(xiàn)象稱為吸收峰

，使吸收峰向短波方向移動(dòng)的現(xiàn)象稱為

。

期末復(fù)習(xí)7、氣相色譜分離系統(tǒng)主要由柱箱和色譜柱組成，其中

是

氣相色譜儀的心臟，一般可分為

和

兩類。8、傅里葉變換紅外光譜儀是紅外光譜儀的第

代，其核心部分是

。9、pH電極測(cè)定溶液前需要進(jìn)行

操作，常選用的緩沖溶液有

、

、或

。10、紅外吸收光譜產(chǎn)生的條件是

。11、根據(jù)固定相和流動(dòng)相極性的不同，液液分配色譜可分為兩類：

和

。12、紅外光譜分析法，由于取代基的誘導(dǎo)效應(yīng)，使得基團(tuán)頻率發(fā)生變化，隨著取代基數(shù)目的增加或取代基電負(fù)性的增大，會(huì)導(dǎo)致基團(tuán)振動(dòng)頻率向

移動(dòng)。13、波數(shù)與波長的關(guān)系：

，中紅外光區(qū)波數(shù)范圍是

。期末復(fù)習(xí)判斷題（

）1.pH電極是離子選擇性電極，響應(yīng)的是溶液中的H+。（

）2.膜電位產(chǎn)生的根本原因是離子交換和擴(kuò)散。（

）3.吸光度和透射比的關(guān)系是A=lg(1/T)。（

）4.朗伯比爾定律應(yīng)用前提是：單色光，均勻介質(zhì)發(fā)生吸收，反應(yīng)體系穩(wěn)定且濃度在0.01mol/L以下。（

）5.光的波長在200-400nm屬于紫外光區(qū)，在400-780nm屬于可見光區(qū)。（

）6.互補(bǔ)的兩束單色光按照一定強(qiáng)度比例混合可得到白光。（

）7.朗伯比爾定律作為光吸收基本定律，適用于溶液對(duì)光的吸收、氣體或固體對(duì)光的吸收。（

）8.λmax對(duì)應(yīng)的ε表明測(cè)定法的靈敏度。（

）9.當(dāng)入射光為280nm時(shí)進(jìn)行分光光度法測(cè)定時(shí)應(yīng)使用石英比色皿。（

）10.常見的參比溶液包括：溶劑參比、試劑參比、試液參比、褪色參比。期末復(fù)習(xí)（

）11.色譜法按固定相形式可以分為柱色譜、薄層色譜、紙色譜等。（

）12.空心陰極燈中是充滿了低壓惰性氣體。（

）13.半峰寬W1/2即為峰寬Wb的一半。（

）14.保留值是色譜定性分析的參數(shù)。（

）15.正相分配色譜的流動(dòng)相極性大于固定相的極性。（

）16.氣相色譜儀使用熱導(dǎo)檢測(cè)器時(shí)，為保證檢測(cè)器有較高的靈敏度，應(yīng)選用N2作載氣。（

）17.氣液色譜中選擇固定液的原則是極性相同原理。（

）18.紅外光譜法中由于共軛效應(yīng)會(huì)使共軛體系的電子云密度平均化，結(jié)果使原來的雙鍵伸長，力常數(shù)削弱，所以振動(dòng)頻率會(huì)升高。（

）19.普通酸度計(jì)通電后可以立即開始測(cè)量。（

）20.原子吸收光譜分析中，燈電流的選擇原則是：在保證放電穩(wěn)定和有適當(dāng)光強(qiáng)輸出的情況下，盡可能選用低的工作電流。（

）21.鄰二氮菲分光光度法測(cè)定水中微量鐵的試樣中，參比溶液采用的是褪色參比。期末復(fù)習(xí)選擇題1、電位滴定法是根據(jù)（

）來確定滴定終點(diǎn)的。A.指示劑顏色變化B.電極電位C.電位突躍D.電位大小2、評(píng)價(jià)氣相色譜檢測(cè)器的性能好壞的指標(biāo)有（

）。A．基線噪聲與漂移B.檢測(cè)器體積的大小

C．檢測(cè)器的線性范圍D.靈敏度與檢測(cè)限3、分子價(jià)電子在發(fā)生軌道躍遷時(shí)所需能量的大小順序是（

）。A.σ→σ*＞π→π*＞n→σ*＞n→π*B.σ→σ*＞n→σ*＞π→π*＞n→π*C.σ→σ*＞π→π*＞n→π*＞n→σ*D.σ→σ*＞n→π*＞n→σ*＞π→π*4、某有色溶液的吸光度為0.300，則該溶液在同樣比色皿厚度下的透光度為（）。

A.

30%

B.

50%

C.

70%

D.

10-0.30期末復(fù)習(xí)5、紅外吸收光譜是

光譜，原子吸收光譜是

光譜。A.線狀光譜，線狀光譜B.帶狀光譜，帶狀光譜C.線狀光譜，帶狀光譜D.帶狀光譜，線狀光譜6、對(duì)氣相色譜描述不正確的是()。A.以氣體為流動(dòng)相B.可分析氣體、液體、固體試樣C.對(duì)樣品的氣化溫度無限制D.可與紅外儀、質(zhì)譜儀等聯(lián)用7、俄國植物學(xué)家茨維特在研究植物色素的成分時(shí)所采用的色譜方法屬于（

）。A.液固色譜B.液液色譜C.氣固色譜D.氣液色譜8、離子選擇電極的電位選擇性系數(shù)可用于（

）。A.

估計(jì)電極的檢測(cè)限

B.

估計(jì)共存離子的干擾程度

C.

校正方法誤差

D.

估計(jì)電極的線形響應(yīng)范圍9、影響摩爾吸光系數(shù)ε大小的是（

）。

A.

吸光物質(zhì)的濃度

B.

吸收池的長度

C.

入射光波長

D.

入射光強(qiáng)度期末復(fù)習(xí)10、在多原子分子中，以下分子的振動(dòng)形式中強(qiáng)度最大的是（

）。A.面內(nèi)彎曲振動(dòng)

B.面外彎曲振動(dòng)

C.對(duì)稱伸縮振動(dòng)

D.不對(duì)稱伸縮振動(dòng)11、已知某待測(cè)水樣的pH大約為5左右，定位溶液最好選（

）。A、pH4.00

和pH6.86

B、pH2.00

和pH6.86

C、pH6.86

和pH9.18

D、pH4.00

和pH9.1812、原子吸收分光光度法的干擾不包括()。A.光譜干擾B.電離干擾C.溶劑干擾D.物理干擾

13、使用原子吸收分光光度計(jì)測(cè)定

組分時(shí)應(yīng)選擇較窄狹縫。A.堿金屬B.堿土金屬C.稀土金屬D.前三者均是14、色譜分離的基本理論不包括()A.塔板理論B.速率理論C.朗伯比爾定律D.前三者15、紫外吸收分光光度法中溶劑對(duì)測(cè)定可能產(chǎn)生的影響是（

）。A．共軛效應(yīng)B．助色效應(yīng)C．超共軛效應(yīng)D．溶劑效應(yīng)期末復(fù)習(xí)簡答題1、介紹本學(xué)期學(xué)到的儀器分析常用的定量方法：方法內(nèi)容、特點(diǎn)、適應(yīng)性。2、氣相色譜法定性分析常用方法有哪幾種？寫出具體內(nèi)容。3、電極活化和色譜柱老化的目的各是什么？4、氣相色譜法色譜柱溫度的選擇原則是什么？5、原子吸收分光光度法與紫外-可見分光光度法的異同點(diǎn)。6、影響朗伯-比爾吸收定律的因素有哪些？7、原子吸收分光光度法干擾及其消除方法。8、高效液相色譜法與氣相色譜法的異同點(diǎn)。期末復(fù)習(xí)計(jì)算題1、當(dāng)下列電池中的溶液是pH=4.00的緩沖溶液時(shí)，在25℃測(cè)定電池的電動(dòng)勢(shì)為0.209V：

玻璃電極丨H+（xmol/L）‖SCE

當(dāng)緩沖溶液由未知溶液代替時(shí)，測(cè)定電池電動(dòng)勢(shì)如下：（1）0.312V；（2）-0.017V。試計(jì)算每種溶液的pH。2、SCE作負(fù)極，氟電極作正極，置于0.0010mol/L的氟離子溶液中，測(cè)得E=-0.159V，換用含氟離子試液，測(cè)定E=-0.218V，計(jì)算試液中氟離子濃度。期末復(fù)習(xí)3、使用一根理論塔板數(shù)n為6400的色譜柱分離某混合物。由色譜圖上測(cè)得組分A的tRA為14min40s，組分B的tRB為15min，峰寬WbA、WbB分別為44s、45s。試計(jì)算：（1）組分A和B的分離度；能否完全分離？（2）假如A和B的保留時(shí)間不變，欲達(dá)到基本完全分離，所需的有效塔板數(shù)是多少？

在一定條件下，兩個(gè)組分的調(diào)整保留時(shí)間分別為85秒和100秒，要達(dá)到完全分離，即R=1.5。計(jì)算需要多少塊有效塔板。若填充柱的塔板高度為0.1cm，柱長是多少？解：r21=100/85=1.18

n有效=16R2[r21/(r21—1)]2

=16×1.52×(1.18/0.18)2=1547（塊）L有效=n有效·H有效

=1547×0.1=155cm=1.55m

即柱長為1.55m時(shí)，兩組分可以得到完全分離。

在一定條件下，兩個(gè)組分的保留時(shí)間分別為12.2s和12.8s，計(jì)算分離度（柱長1m，n=3600）

。要達(dá)到完全分離，即R=1.5，所需要的柱長。解：分離度：子任務(wù)4：認(rèn)識(shí)分離度——色譜柱的總分離效能指標(biāo)

Contents目1認(rèn)識(shí)常用的定性定量方法2頭孢拉定定量分析錄子任務(wù)1：認(rèn)識(shí)常用的定性定量方法一、定性方法——標(biāo)準(zhǔn)對(duì)照法定性與氣相色譜法的定性分析類似。二、定量方法——外標(biāo)法子任務(wù)1：認(rèn)識(shí)常用的定性定量方法1.方法首先用欲測(cè)組分的標(biāo)準(zhǔn)樣品繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。具體方法是：用標(biāo)準(zhǔn)樣品配制成不同濃度的標(biāo)準(zhǔn)系列，在與待測(cè)組分相同的色譜條件下，等體積準(zhǔn)確進(jìn)樣，測(cè)量各峰的峰面積或峰高，用峰面積或峰高對(duì)樣品濃度繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，此標(biāo)準(zhǔn)曲線應(yīng)是通過原點(diǎn)的直線。若標(biāo)準(zhǔn)曲線不通過原點(diǎn)，則說明存在系統(tǒng)誤差。標(biāo)準(zhǔn)曲線的斜率即為絕對(duì)校正因子。在測(cè)定樣品中的組分含量時(shí)，要用與繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線完全相同的色譜條件作出色譜圖，測(cè)量色譜峰面積或峰高，然后根據(jù)峰面積和峰高在標(biāo)準(zhǔn)曲線上直接查出注入色譜柱中樣品組分的濃度。子任務(wù)1：認(rèn)識(shí)常用的定性定量方法2.特點(diǎn)標(biāo)準(zhǔn)曲線法的優(yōu)點(diǎn)是：繪制好標(biāo)準(zhǔn)工作曲線后測(cè)定工作就變得相當(dāng)簡單，可直接從標(biāo)準(zhǔn)工作曲線上讀出含量，因此特別適合于大量樣品的分析。標(biāo)準(zhǔn)曲線法的缺點(diǎn)是：每次樣品分析的色譜條件（檢測(cè)器的響應(yīng)性能，柱溫，流動(dòng)相流速及組成，進(jìn)樣量，柱效等）很難完全相同，因此容易出現(xiàn)較大誤差。此外，標(biāo)準(zhǔn)工作曲線繪制時(shí)，一般使用欲測(cè)組分的標(biāo)準(zhǔn)樣品（或已知準(zhǔn)確含量的樣品），而實(shí)際樣品的組成卻千差萬別，因此必將給測(cè)量帶來一定的誤差。子任務(wù)2：頭孢拉定定量分析學(xué)習(xí)情境（藥典）色譜條件與系統(tǒng)適用性實(shí)驗(yàn)：用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑，水-甲醇-3.86%醋酸鈉溶液-4%醋酸溶液（1565：400：30：6）為流動(dòng)相，流速為每分鐘0.7~0.9mL，檢測(cè)波長為254nm。取頭孢拉定對(duì)照品溶液10份和頭孢氨芐對(duì)照品貯備液（0.4mg/mL）1份?；靹?，量取10μL注入液相色譜儀測(cè)定。頭孢拉定峰和頭孢氨芐峰的分離度應(yīng)不小于2.0，計(jì)算數(shù)次進(jìn)樣結(jié)果，其相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)差（RSD）不得過2.0%。理論板數(shù)按頭