原子吸收光譜法測(cè)定cu

原子吸收光譜法測(cè)定cu

養(yǎng)分zn是人類(lèi)和魚(yú)類(lèi)代謝和維持正常生長(zhǎng)發(fā)育所必需的素。當(dāng)Cu和Zn共同作用于魚(yú)體時(shí),Cu會(huì)影響魚(yú)對(duì)Zn的吸收和富集,引起魚(yú)體內(nèi)Zn的流失。雖然已有較多的有關(guān)金屬對(duì)魚(yú)類(lèi)影響的研究,但以鯽魚(yú)為實(shí)驗(yàn)材料,研究Cu2+對(duì)鯽魚(yú)體內(nèi)Zn2+富集性和血紅蛋白量影響的研究報(bào)道較少。本文研究了暴露在不同濃度Cu2+溶液中鯽魚(yú)的鰓、腎臟、胰臟、肌肉等組織器官中Zn2+的富集性規(guī)律和血紅蛋白含量以及體重的變化。1材料和方法1.1材料表面1.1.1分子檢測(cè)儀器試劑:濃HNO3、濃HSO4、CuSO4·5H2O、ZnSO4·7H2O,均為分析純,文齊氏稀釋(高鐵氰化血紅蛋白液,HiCN)。儀器:KDN型定氮儀-HYP8孔消化裝置;WFX-120型原子吸收分光光度計(jì)(AASpectrophotometer);Hb-1002型血紅蛋白測(cè)定儀。1.1.2選擇適宜的樣品購(gòu)于浙江省溫州市洪殿花鳥(niǎo)市場(chǎng),體重(40.78±3.64)g,要求鮮活、無(wú)損傷,大小相似。鯽魚(yú)先在曝氣96h,pH6.92～7.26,溫度20～23℃的自來(lái)水中馴養(yǎng)72h。1.2方法1.2.1u3000主要參數(shù)根據(jù)文獻(xiàn)的魚(yú)類(lèi)毒性實(shí)驗(yàn)方法配置以下金屬離子的濃度:Zn2+5mg/L;Cu2+0.01,0.1,1.0mg/L。同時(shí)設(shè)置清水對(duì)照組。在每一處理組中放入已馴養(yǎng)好的鯽魚(yú)10尾,每一實(shí)驗(yàn)容器中放一個(gè)增氣泵增氧。為避免因魚(yú)體吸收導(dǎo)致水體中重金屬離子濃度下降,每12h換水1次。暴露5d后,隨機(jī)取魚(yú)試驗(yàn)。暴露期間停止喂食。1.2.2重金屬含量測(cè)定體重凈減量的計(jì)算:暴露5d后,取魚(yú),用吸水棉吸干魚(yú)體表的水分,稱(chēng)重,實(shí)驗(yàn)前魚(yú)重減去實(shí)驗(yàn)后魚(yú)重得出凈減重。鯽魚(yú)樣品中Zn含量測(cè)定:用去離子水清洗魚(yú)樣,分別取魚(yú)鰓、腎臟、胰臟、肌肉準(zhǔn)確稱(chēng)量,置于培養(yǎng)皿中,加入3ml的濃HNO3,放置過(guò)夜,在250℃下消解3h,至溶液澄清。冷卻后轉(zhuǎn)移至100ml容量瓶中,用去離子水稀釋至刻度并搖勻。用火焰原子吸收法測(cè)定樣品中的重金屬含量。血紅蛋白的測(cè)定:先吸取10ml文齊氏稀釋液(高鐵氰化血紅蛋白液,HiCN)放入試管中,以體側(cè)取血法取血后,用微量吸管吸取20μl血液放入稀釋液中,輕搖至均勻,用Hb-1002型血紅蛋白測(cè)定儀直接測(cè)定。1.3統(tǒng)計(jì)分析全部數(shù)據(jù)采用SPSS11.0統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行方差分析。2結(jié)果2.1凈減量的測(cè)定從表1可知,所有處理組中鯽魚(yú)的體重均有不同幅度的減少,但清水組、Zn2+組(第2組)及低銅離子組(第3組)的凈減量較少,分別只有1.04,1.06和1.07g。而中濃度銅離子組(第4組)和高濃度銅離子組(5組)的凈減量卻較多,分別達(dá)2.10和2.16g,方差分析差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.001)。2.2銅離子濃度對(duì)臟器中鋅含量的影響與對(duì)照組比較,除魚(yú)鰓低銅離子組(Zn2+5mg/L+Cu2+0.01mg/L)鋅含量略有上升(從5.21μg/g升到5.59μg/g)外,其余的處理組均有不同幅度的下降,并且大多數(shù)組的降幅基本上都是隨著銅離子濃度的升高而增大。腎臟、胰腺、鰓和肌肉中鋅含量降幅最大的分別為11.78,6.67,0.63和2.64μg/g,降幅大小依次為腎臟>胰腺>肌肉>鰓。方差分析表明,與對(duì)照組比,腎臟和胰腺中,低銅離子組差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義,而中、高濃度銅離子組的差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05,P<0.01)。在肌肉中,只有高濃度銅離子組差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。說(shuō)明較高銅離子濃度能對(duì)鯽魚(yú)腎臟、胰腺和肌肉內(nèi)鋅離子的富集產(chǎn)生較大影響,加大了鯽魚(yú)體內(nèi)鋅的流失,從而減少了鋅在魚(yú)體內(nèi)的積累。另外,在魚(yú)鰓各處理組中,所有的鋅含量與對(duì)照組比較差異均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義,說(shuō)明銅離子對(duì)鯽魚(yú)體內(nèi)不同組織器官內(nèi)鋅的富集量影響程度不一樣。2.3血紅蛋白的變化從表3可知,與清水對(duì)照組相比,4、5組較高銅離子組的血紅蛋白減少比較明顯,而單加鋅組(5mg/L)和鋅加低濃度銅組(5mg/L+0.01mg/L)的血紅蛋白量反而有所上升,其中單加鋅組與清水對(duì)照組相比差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。一方面說(shuō)明銅離子對(duì)鯽魚(yú)有毒害作用使其血紅蛋白量減少,另一方面也說(shuō)明鋅離子能拮抗低濃度的銅離子對(duì)鯽魚(yú)的毒害作用,但這種拮抗作用是有限的,在較高銅離子濃度時(shí)則不明顯。3其它重金屬離子對(duì)臟器的影響有關(guān)重金屬離子相互作用對(duì)重金屬在生物體內(nèi)積累的影響的理論主要有競(jìng)爭(zhēng)位點(diǎn)假說(shuō)和金屬硫蛋白誘導(dǎo)結(jié)合作用假說(shuō)。周新文等認(rèn)為,在魚(yú)腎臟、肝臟中,重金屬離子的積累與重金屬硫蛋白(MT)有關(guān),MT能調(diào)節(jié)魚(yú)體內(nèi)自由重金屬離子的濃度。重金屬能夠激活腎臟、肝臟中MT基因的轉(zhuǎn)錄,使MT得到大量的表達(dá),使魚(yú)腎臟、肝臟等中的MT含量升高,進(jìn)入魚(yú)體內(nèi)多余的或有毒害的重金屬離子將會(huì)和MT結(jié)合儲(chǔ)存起來(lái)。從本實(shí)驗(yàn)結(jié)果看,鯽魚(yú)體內(nèi)鋅的含量依次為腎臟>胰腺>肌肉>鰓,基本與上述研究結(jié)果一致。由于重金屬離子間的相互作用,一種金屬離子在生物體內(nèi)的含量變化就會(huì)引起另外一種或幾種金屬離子含量的變化。本實(shí)驗(yàn)結(jié)果也顯示,當(dāng)外界環(huán)境中鋅離子濃度一定時(shí),隨著銅離子濃度的增大,銅離子對(duì)鋅離子的影響也越來(lái)越大,減少了鋅離子的