用差示分光光度法測定茶多酚

用差示分光光度法測定茶多酚

茶多酚是茶葉的一個有效成分。具有抗衰、腫瘤、腕帶硬化、抗菌等功效。這是目前人們最常用的保健藥物。其測定方法主要有滴定法、酒石酸亞鐵比色法(標(biāo)準(zhǔn)方法)、紫外分光光度法等,采用差示分光光度法測定茶多酚含量尚未見報道。本文報道在酸性介質(zhì)中,茶多酚能將Fe3+還原成Fe2+,Fe2+與鐵氰化鉀生成可溶性深藍(lán)色配位化合物KFe[FeⅡ(CN)6],采用差示分光光度法間接測定茶多酚含量。茶多酚含量在2~12μg/mL范圍內(nèi)符合比耳定律,檢出限為1.35μg/mL。本方法用于茶湯中茶多酚的測定,獲得滿意結(jié)果。1實驗部分1.1標(biāo)準(zhǔn)工作溶液及na2hpo4-檸檬酸緩沖溶液的制備TU-1800型分光光度計(北京普析通用儀器有限公司);Plus420A酸度計(美國,Orin公司);HH-4數(shù)顯恒溫水浴鍋(常州國華電器有限公司)。茶多酚標(biāo)準(zhǔn)溶液(用鞣酸配制):1mg/mL,用時稀釋成0.1mg/mL的標(biāo)準(zhǔn)操作液;高鐵離子溶液:0.1mol/L,用硫酸鐵銨配制;鐵氰化鉀溶液:0.01mol/L;Na2HPO4-檸檬酸緩沖溶液(pH=2.2):取2mL0.2mol/LNa2HPO4于100mL容量瓶中,加0.1mol/L的檸檬酸溶液定容。以上試劑均為分析純,水為亞沸蒸餾水。1.2e+fe2+茶多酚是一類具有多酚羥基的類黃酮物質(zhì),有強的還原性。在酸性介質(zhì)中,茶多酚能將Fe3+還原成Fe2+,Fe2+與鐵氰化鉀溶液發(fā)生反應(yīng)可產(chǎn)生兩種化合物:當(dāng)高鐵溶液用量少時,生成滕氏藍(lán)Fe3[Fe(CN)6]2沉淀;當(dāng)高鐵溶液用量大時,生成可溶性藍(lán)色絡(luò)合物KFe[FeⅡ(CN)6],此物質(zhì)在703nm處有最大吸收。1.3高鐵法測定容取兩支25mL比色管,一支加入茶多酚標(biāo)準(zhǔn)使用液0.5mL,另一支加入待測液,并分別依次加入2.0mL0.1mol/L的高鐵溶液,0.5mL0.01mol/L鐵氰化鉀溶液,用Na2HPO4-檸檬酸緩沖溶液定容,前者置參比池中,后者置樣品池中,在703nm處測其吸光度。2結(jié)果與討論2.1波長掃描結(jié)果將茶多酚標(biāo)準(zhǔn)操作液按實驗方法處理后,在400~900nm范圍內(nèi)進(jìn)行波長掃描,結(jié)果如圖1所示。配合物KFe[FeⅡ(CN)6]在703nm處有最大吸收,可作為其測定波長。2.2影響ph值的酸和介質(zhì)選擇2.2.1ph對高鐵離子的影響溶液的酸堿度對配合物KFe[FeⅡ(CN)]6的生成影響較大。實驗結(jié)果表明:當(dāng)溶液pH>3.0時,吸光度明顯減小,這是因為鐵離子在弱酸性或堿性條件下會發(fā)生水解反應(yīng),降低了高鐵離子的濃度,使配合物不能有效生成。本實驗需在強酸性條件下進(jìn)行。2.2.2種酸性介質(zhì)對溶液吸光度以及線性范圍的影響考察了Na2HPO4-檸檬酸緩沖溶液(pH=2.2)、0.1mol/LHCl、氨基乙酸-HCl(pH=2.3)緩沖溶液三種酸性介質(zhì)對溶液吸光度以及線性范圍的影響。第一種介質(zhì)條件下的線性范圍寬且靈敏度高。選擇Na2HPO4-檸檬酸緩沖溶液(pH=2.2)為反應(yīng)酸性介質(zhì)。2.3試劑用量的影響試劑的用量對配合物的形成有一定影響。結(jié)果表明:當(dāng)茶多酚總量為300μg時,0.1mol/L的高鐵試劑用量在1.5~6.0mL范圍內(nèi),0.01mol/L鐵氰化鉀溶液用量在0.2~2.0mL范圍內(nèi),測定的吸光度值大而穩(wěn)定。實驗選擇0.1mol/L的高鐵溶液2.0mL,0.01mol/L的鐵氰化鉀溶液0.5mL。2.4配合物的吸光度溫度對配合物的形成影響很顯著,當(dāng)反應(yīng)溫度高于35℃時,出現(xiàn)滕氏藍(lán)沉淀,因此本實驗應(yīng)在室溫條件下進(jìn)行。該配合物的形成速度比較快,按實驗方法加入試劑后,立即進(jìn)行時間掃描,發(fā)現(xiàn)60min內(nèi)配合物的吸光度值從0.581減小為0.575。變化僅0.006,90min時,開始出現(xiàn)滕氏藍(lán)沉淀。2.5檢出限和標(biāo)準(zhǔn)使用液在7支25mL比色管中依次加入0、0.5、1.0、1.5、2.0、2.5、3.0mL茶多酚標(biāo)準(zhǔn)使用液,按實驗方法處理后,第一支做參比液進(jìn)行測定,所得線性回歸方程為A=0.0947c-0.1814c(μg/mL),相關(guān)系數(shù)r=0.9996,根據(jù)IUPAC規(guī)定,計算得檢出限為1.35μg/mL。結(jié)果表明茶多酚含量在2~12μg/mL范圍內(nèi)符合比耳定律。2.6茶多酚的測定茶葉中的抗壞血酸、氨基酸可能對測定產(chǎn)生影響。經(jīng)用茶葉內(nèi)所含純品驗證:對于8μg/mL的茶多酚的測定,同倍的抗壞血酸、二倍的氨基酸,對測定無干擾。一般情況下,茶葉中的抗壞血酸、氨基酸的含量均小于此值,可以不考慮其干擾。3樣品分析3.1浸提濾液的制備取10g茶葉加水100mL,在沸水浴中浸提40min,減壓抽濾,濾渣再加100mL水,浸提20min,減壓抽濾;合并兩次濾液,取濾液2.0mL,用水定容至100mL容量瓶中,