野生銀耳菌絲的分離與交合

野生銀耳菌絲的分離與交合

銀杏是中國(guó)境外的一種著名食品和藥物。在古田縣科技局、古田縣食用菌產(chǎn)業(yè)管理局重視下,由寧德市科技局立項(xiàng)。選調(diào)當(dāng)?shù)乜蒲腥藛T,組成《野生銀耳種源選育優(yōu)良菌株》研究課題組,由本所負(fù)責(zé)主持開(kāi)展該項(xiàng)目的科研試驗(yàn)工作。通過(guò)一年多來(lái)全體課題組成員共同努力,從采集的野生耳木中,選育出一個(gè)雜交組合的銀耳菌株,經(jīng)過(guò)三次重復(fù)試驗(yàn),效果較好。現(xiàn)將一年多來(lái)的分離選育試驗(yàn)情況初報(bào)如下:1材料和方法1.1白云村與南安全性村鎖定野生銀耳種源采集地點(diǎn)為福建省漳州市龍?？h白云村與南靖縣南坑村這兩個(gè)地方。通過(guò)實(shí)地考察,南靖縣南坑村原始森林,有野生銀耳發(fā)現(xiàn),通過(guò)當(dāng)?shù)剞r(nóng)民配合采集到13個(gè)長(zhǎng)有銀耳的種木。1.2試驗(yàn)培養(yǎng)基1.2.1植物硫酸鎂鹽馬齡薯200g,銀耳適生木屑40g,豆稈粉20g,麩皮60g,瓊脂26g,優(yōu)質(zhì)紅糖12g,硫酸鎂2g,石膏2g,清水3000mL。適生木屑、豆稈粉先煮20min,取其濾液;另將馬齡薯切片煮熟不爛,取其濾液;把兩者濾液混合,麩皮沖洗后加入濾液入鍋煮,并加入石膏,煮15min再過(guò)濾后,加入瓊脂、紅糖、硫酸鎂攪拌溶化,裝管經(jīng)高壓滅菌,擺成斜面。1.2.2料:水比5.5%,紅出汁7.5%,石膏5.5%,紅出6.5%,紅出6.5%,紅出6.5%,紅出6.5%,紅出6.5%,紅出6.5%,紅出6.5%,紅出6.5%,紅出6.5%,紅出6.5%,紅出6.5%,紅出6.5%,紅出6.5%,紅出6.5%,紅出6.5%,紅出6.5%;紅出6.5%,紅出6.5%,紅出6.5%,紅出6.5%,紅出6.5%,紅出6.5%,紅出6.5%,紅出6.5%,紅出6.5%,紅出6.5%,紅出6.5%,紅出6.5%,紅出6.5%,紅出6.5%,紅出5.5%,紅出5.5%,紅出5.5%,紅出5.5%,紅出5.5%,紅出5.5%,紅出5.5%,紅出5.5%,紅出5.5%,紅出5.5%,紅出5.5%,紅出5.5%,紅出5.5%,紅出5.5%,紅出5.5%,紅出5.5%,紅出5.5%,紅出5.5%,紅出5.5%,紅出5.5%,紅出5.5%,紅出5.5%,紅出5.5%,紅出5.5%,紅出5.5%,紅出5.5%,紅出5.5%,紅出5.5%,紅出5.5%,紅出5.5%,紅出5.5%,紅出5.5%,紅出5.5%,紅出5.5%,紅出5.5%,紅出5.5%,紅出5.5%,紅出5.5%,紅出5.5%,紅出5.5%適生木屑43.5%,棉子殼8%,豆稈粉10%,麩皮35%,紅糖0.5%,石膏3%,料:水比1:1.5。配制時(shí)棉子殼裝入瓶底部高25mm,其他按常規(guī)方法操作。1.3代身份證的測(cè)定將2007年6月6日至15日在南靖縣南坑村先后兩批征集的野生銀耳種木13個(gè),分別定名代號(hào)為A1a1、A2a2、A3a3、A4a4、A5a5、A6a6、A7a7和B1b1、B2b2、B3b3、B4b4、B5b5、B6b6。其中大寫(xiě)字母代表銀耳純菌絲,小寫(xiě)字母代表香灰菌絲,具體操作方法:1.3.1浸泡和浸漬法先采用無(wú)菌水沖洗耳木表面,再用75%的醫(yī)用酒精進(jìn)行10s左右的浸泡,然后用無(wú)菌水反復(fù)沖洗2～3遍,再用無(wú)菌紗布將耳木表面水分吸干。1.3.2香灰植物基材料在無(wú)菌條件下,用鋒利小刀除去耳木表面材質(zhì),選取耳木內(nèi)部有香灰菌絲特有的斑紋處,采取豎橫的切割方法,挖取適量的耳木基質(zhì)接入母種培養(yǎng)基上。每個(gè)耳木各接30～50支,提取耳木中的香灰菌絲,置于23～25℃的恒溫條件下培養(yǎng)。1.3.3銀耳的培養(yǎng)基培養(yǎng)將耳木放入玻璃干燥器中,強(qiáng)行逼干3～5d,在靠近耳基的上、中層部位,采用上述的同樣切割方法,挖取適量的耳木基質(zhì)接入母種培養(yǎng)基上,為了能夠獲取有價(jià)值的銀耳純菌絲,在每支試管中各接入2～3個(gè)耳木基質(zhì),每個(gè)耳木各接30～50支,然后置于20～22℃的恒溫條件下培養(yǎng)觀察。1.3.4木屑培養(yǎng)基上的專(zhuān)一性交合為了確認(rèn)每個(gè)野生耳木品種的特性,繼續(xù)在木屑培養(yǎng)基上進(jìn)行專(zhuān)一性交合,經(jīng)20～25℃恒溫條件下培養(yǎng)40d,觀察對(duì)比4個(gè)野生品種兩種菌絲在木屑培養(yǎng)基上的生長(zhǎng)表現(xiàn)。1.3.5選擇非特異性交組合的比較選取B5銀耳純菌絲與a5、b4兩種香灰菌絲在木屑培養(yǎng)基上進(jìn)行非專(zhuān)一性交合在恒溫條件下培養(yǎng)40d,觀察其親和表現(xiàn)。2結(jié)果與分析2.14銀耳種木及其他銀耳屬植物的生長(zhǎng)特性通過(guò)上述的分離獲得了感觀上有價(jià)值銀耳純菌絲及香灰菌絲有4種,代號(hào)分別是A1a1、A5a5、B4b4、B5b5,其余9個(gè)耳木因基質(zhì)分化,受自然界雜菌侵染嚴(yán)重,無(wú)法提取兩種菌絲而淘汰。將得到的4個(gè)野生銀耳種木兩種菌絲,通過(guò)轉(zhuǎn)管提純后,在母種培養(yǎng)基上,經(jīng)22～24℃的恒溫條件下培養(yǎng)10d的生長(zhǎng)情況(表1)。從表1可以看出4個(gè)野生耳木分離得到的銀耳純菌絲與香灰菌絲,其生理特征基本相似,但在母種培養(yǎng)基上的外觀表現(xiàn)略有不同,以A1、B5兩種銀耳純菌絲表現(xiàn)最好,B4次之,A5最差;而香灰菌絲以a5表現(xiàn)最好,a1、b4次之,b5最差。2.24銀耳和香灰植物的木屑培養(yǎng)基上的生長(zhǎng)對(duì)比為了確認(rèn)每個(gè)野生耳木品種的特性,繼續(xù)在木屑培養(yǎng)基上進(jìn)行專(zhuān)一性交合,經(jīng)20～25℃恒溫條件下培養(yǎng)40d,觀察對(duì)比4個(gè)野生品種兩種菌絲在木屑培養(yǎng)基上的生長(zhǎng)表現(xiàn),見(jiàn)表2。4種野生耳木分離得到的銀耳純菌絲與香灰菌絲,在木屑培養(yǎng)基上進(jìn)行專(zhuān)一性交合培養(yǎng),從表2可以看出,各代號(hào)菌株的兩種菌絲,在木屑培養(yǎng)基上的生長(zhǎng)情況都沒(méi)有其一致性的較佳表現(xiàn)。銀耳純菌絲以B5,香灰菌絲則以a5表現(xiàn)為最好。2.3非專(zhuān)一性交合培養(yǎng)銀耳的可行性決定選取B5銀耳純菌絲與a5、b4兩種香灰菌絲在木屑培養(yǎng)基上進(jìn)行非專(zhuān)一性交合在恒溫條件下培養(yǎng)40d,觀察其親和表現(xiàn)(表3)。從表3兩組非專(zhuān)一性交合培養(yǎng)情況看,B5×a5的兩種菌絲生長(zhǎng)狀況與出耳及品質(zhì)都表現(xiàn)親和力強(qiáng),白毛團(tuán)分泌水珠與出耳比專(zhuān)一性交合提前兩天,有進(jìn)一步用于生產(chǎn)試驗(yàn)的價(jià)值。而B(niǎo)5×b4則不能親和,應(yīng)淘汰。通過(guò)上述兩組“非專(zhuān)一性”野生銀耳菌絲交合培養(yǎng)情況分析,“非專(zhuān)一性”交合培育銀耳菌株,存在著成功與失敗的可能性。也就是說(shuō),從自然界獲取的野生銀耳菌絲,進(jìn)行非專(zhuān)一性交合,有親和的可能與不親和的因素存在。3銀耳品種對(duì)銀耳菌株的誘導(dǎo)誘導(dǎo)3.1征集野生銀耳種木,除了觀察子實(shí)體外觀表現(xiàn)外,還需注意耳木的基質(zhì),對(duì)基質(zhì)分化嚴(yán)重的耳木,在分離提取銀耳兩種菌絲時(shí)難度相當(dāng)大,成功機(jī)率低,不宜作為種木使用。3.2在試驗(yàn)中發(fā)現(xiàn),同一地區(qū)征集分離得到的野生銀耳品種,其生理特性基本相似,而在同一木屑培養(yǎng)基上分點(diǎn)接入不同代號(hào)的香灰菌絲進(jìn)行培養(yǎng)觀察時(shí),發(fā)現(xiàn)相互之間又會(huì)形成明顯拮抗線,如圖1、2。這說(shuō)明不是同一品種香灰菌絲,也可以初步判斷為一個(gè)耳木上野生銀耳是一個(gè)品種。因此,征集自然條件下生存的野生銀耳種源,對(duì)尋求特優(yōu)性狀的銀耳菌株機(jī)率較高。3.3通過(guò)野生銀耳提取的香灰菌絲的拮