反相高效液相色譜法測(cè)定果酒中的有機(jī)酸

反相高效液相色譜法測(cè)定果酒中的有機(jī)酸

這種含有大量有機(jī)質(zhì)的食物廣泛存在于水果和蔬菜中。它可以使食品具有一定的味道、質(zhì)地和顏色、耐腐蝕性和抗逆性。以科學(xué)方法釀造而成的果酒中,含有豐富的維生素、有機(jī)酸及含氮物質(zhì),其中有機(jī)酸能維持果酒的pH值,使果酒口味鮮美、清涼透明。目前,有機(jī)酸的測(cè)定方法有酸堿滴定法、旋光法、氣相色譜法,高效液相色譜法等。其中酸堿滴定法、旋光法所需費(fèi)用較低,但影響因素較多,準(zhǔn)確度差;氣相色譜法中常因酸的沸點(diǎn)較高、不易氣化而需要先對(duì)其衍生再進(jìn)行測(cè)定,方法繁瑣;高效液相色譜法靈敏簡(jiǎn)便,樣品不需前處理,可直接測(cè)定,因此更快捷和準(zhǔn)確。本實(shí)驗(yàn)采用反相ODS色譜柱,磷酸溶液作流動(dòng)相,測(cè)定果酒中的有機(jī)酸,并對(duì)測(cè)試條件進(jìn)行了研究,建立了一種簡(jiǎn)便、準(zhǔn)確的分析方法。1材料和方法1.1超聲波細(xì)胞粉碎機(jī)日本島津LC-6A高效液相色譜儀;紫外-可見(jiàn)光光度檢測(cè)器SPD-6AV;C-R3A數(shù)據(jù)處理器;JY88-Ⅱ型超聲波細(xì)胞粉碎機(jī);SPM-10A數(shù)字酸度計(jì)。1.2乳酸ar磷酸(AR);酒石酸(AR);乳酸(AR);甲醇(AR);磷酸氫二鈉(AR);磷酸二氫鉀(AR);磷酸氫二銨(AR);檸檬酸。1.3溶液的制備1.3.1流量相的制備(1)0.01mol/l磷酸溶液的制備取1.15ml磷酸溶液,用超純水定容至1000ml,用磷酸氫二鈉調(diào)節(jié)pH至2.5,超聲波脫氣后備用。(2)0.5%磷酸氫二銨溶液的制備準(zhǔn)確稱(chēng)取1.500g磷酸氫二銨,用超純水定容至300ml,用磷酸調(diào)節(jié)pH至2.5,超聲波脫氣后備用。(3)磷酸二羥鉀溶液2mol準(zhǔn)確稱(chēng)取8.165g磷酸二氫鉀,用超純水定容至300ml,用磷酸調(diào)節(jié)pH至2.5,超聲波脫氣后備用。1.3.2標(biāo)準(zhǔn)溶液的制備(1)酒石酸標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備溶液準(zhǔn)確稱(chēng)取10.000g酒石酸放入100ml容量瓶中,用超純水溶解并定容至100ml(1ml=0.1g/L)。(2)標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備磷酸溶液準(zhǔn)確稱(chēng)取10.000g檸檬酸放入100ml容量瓶中,用超純水溶解并定容至100ml(1ml=0.1g/L)。1.4流動(dòng)相和檢測(cè)波長(zhǎng)色譜柱:InertsieΦODS-3(5μm,4.6×250mm);流動(dòng)相:0.01mol/L磷酸溶液(pH=2.5);流速:1ml/min;檢測(cè)波長(zhǎng):210nm;進(jìn)樣量:5μl;柱溫:30℃。1.5樣品預(yù)處理將葡萄酒原液用0.45μm孔徑的濾膜過(guò)濾兩次,取1ml濾液適當(dāng)稀釋,備用。2結(jié)果與討論2.1色譜柱的選擇hypersilods-2色譜柱a用兩種色譜柱InersieΦODS-3(5μm,4.6×250mm)和HypersilODS-2(5μm,4.6×250mm)分析同一標(biāo)準(zhǔn)溶液,結(jié)果用InersieΦODS-3(5μm,4.6×250mm)色譜柱各組分分離效果較好,保留時(shí)間適宜。2.2流量相的選擇2.2.1流動(dòng)相的測(cè)定使用不同流動(dòng)相能使色譜峰得到更好分離。根據(jù)參考文獻(xiàn)我們分別選用0.5%磷酸氫二銨(pH=2.5)、2mol/L的磷酸二氫鉀(pH=2.5),0.01mol/L的磷酸溶液(pH=2.5)作流動(dòng)相,測(cè)定同一標(biāo)準(zhǔn)混合溶液。能使有機(jī)酸結(jié)果很好分離,避免樣品中雜質(zhì)的干擾。2.2.2流動(dòng)相ph的影響分別配制pH為2.0、2.5、3.0、3.5、4.0、5.0的磷酸溶液,并以其作為流動(dòng)相,測(cè)定同一標(biāo)準(zhǔn)溶液。結(jié)果隨著pH的增大,兩種酸的保留時(shí)間不斷接近。為使組分更好分離和保護(hù)色譜柱,選用pH=2.5的磷酸溶液最適宜。2.3標(biāo)準(zhǔn)鉻圖在最佳色譜條件下,分析有機(jī)酸標(biāo)準(zhǔn)液,乳酸、酒石酸、檸檬酸結(jié)果的保留時(shí)間分別為8.345、4.893、13.490min。見(jiàn)圖1。2.4內(nèi)標(biāo)巖酒石酸峰面積測(cè)定分別配制0.05、0.1、0.3、0.5、0.7、0.9g/L的標(biāo)準(zhǔn)溶液,在最佳色譜條件下,取5μl分別進(jìn)樣,測(cè)定峰面積,結(jié)果酒石酸的線(xiàn)性范圍為0.05～0.90g/L,回歸方程Y=12370+66528X(r=0.9953)。分別配制濃度為0.3、0.5、0.7、1.0、1.2g/L標(biāo)準(zhǔn)溶液,取5μl分別進(jìn)樣,結(jié)果檸檬酸線(xiàn)性范圍為0.3～1.2g/L,回歸方程Y=-3641.7+25884X(r=0.9936)。2.5限制采樣以三倍信噪比值計(jì)算酒石酸,檸檬酸的檢出限分別為2.58×10-6(g/L),8.48×10-6(g/L)。2.6返回率和準(zhǔn)確度取處理后的葡萄酒向其中加入一定量的標(biāo)準(zhǔn)溶液,結(jié)果進(jìn)行測(cè)定。結(jié)果見(jiàn)表1、表2。2.7酒石酸含量分析用上述方法分別測(cè)定通化野生原汁葡萄酒、王朝干白葡、野生山葡萄酒、張?jiān)８杉t葡萄酒、野妹原汁山葡萄酒中的酒石酸,檸檬酸的含量,