反相高效液相色譜法測定果酒中的有機酸

反相高效液相色譜法測定果酒中的有機酸

這種含有大量有機質(zhì)的食物廣泛存在于水果和蔬菜中。它可以使食品具有一定的味道、質(zhì)地和顏色、耐腐蝕性和抗逆性。以科學方法釀造而成的果酒中,含有豐富的維生素、有機酸及含氮物質(zhì),其中有機酸能維持果酒的pH值,使果酒口味鮮美、清涼透明。目前,有機酸的測定方法有酸堿滴定法、旋光法、氣相色譜法,高效液相色譜法等。其中酸堿滴定法、旋光法所需費用較低,但影響因素較多,準確度差;氣相色譜法中常因酸的沸點較高、不易氣化而需要先對其衍生再進行測定,方法繁瑣;高效液相色譜法靈敏簡便,樣品不需前處理,可直接測定,因此更快捷和準確。本實驗采用反相ODS色譜柱,磷酸溶液作流動相,測定果酒中的有機酸,并對測試條件進行了研究,建立了一種簡便、準確的分析方法。1材料和方法1.1超聲波細胞粉碎機日本島津LC-6A高效液相色譜儀;紫外-可見光光度檢測器SPD-6AV;C-R3A數(shù)據(jù)處理器;JY88-Ⅱ型超聲波細胞粉碎機;SPM-10A數(shù)字酸度計。1.2乳酸ar磷酸(AR);酒石酸(AR);乳酸(AR);甲醇(AR);磷酸氫二鈉(AR);磷酸二氫鉀(AR);磷酸氫二銨(AR);檸檬酸。1.3溶液的制備1.3.1流量相的制備(1)0.01mol/l磷酸溶液的制備取1.15ml磷酸溶液,用超純水定容至1000ml,用磷酸氫二鈉調(diào)節(jié)pH至2.5,超聲波脫氣后備用。(2)0.5%磷酸氫二銨溶液的制備準確稱取1.500g磷酸氫二銨,用超純水定容至300ml,用磷酸調(diào)節(jié)pH至2.5,超聲波脫氣后備用。(3)磷酸二羥鉀溶液2mol準確稱取8.165g磷酸二氫鉀,用超純水定容至300ml,用磷酸調(diào)節(jié)pH至2.5,超聲波脫氣后備用。1.3.2標準溶液的制備(1)酒石酸標準儲備溶液準確稱取10.000g酒石酸放入100ml容量瓶中,用超純水溶解并定容至100ml(1ml=0.1g/L)。(2)標準儲備磷酸溶液準確稱取10.000g檸檬酸放入100ml容量瓶中,用超純水溶解并定容至100ml(1ml=0.1g/L)。1.4流動相和檢測波長色譜柱:InertsieΦODS-3(5μm,4.6×250mm);流動相:0.01mol/L磷酸溶液(pH=2.5);流速:1ml/min;檢測波長:210nm;進樣量:5μl;柱溫:30℃。1.5樣品預處理將葡萄酒原液用0.45μm孔徑的濾膜過濾兩次,取1ml濾液適當稀釋,備用。2結果與討論2.1色譜柱的選擇hypersilods-2色譜柱a用兩種色譜柱InersieΦODS-3(5μm,4.6×250mm)和HypersilODS-2(5μm,4.6×250mm)分析同一標準溶液,結果用InersieΦODS-3(5μm,4.6×250mm)色譜柱各組分分離效果較好,保留時間適宜。2.2流量相的選擇2.2.1流動相的測定使用不同流動相能使色譜峰得到更好分離。根據(jù)參考文獻我們分別選用0.5%磷酸氫二銨(pH=2.5)、2mol/L的磷酸二氫鉀(pH=2.5),0.01mol/L的磷酸溶液(pH=2.5)作流動相,測定同一標準混合溶液。能使有機酸結果很好分離,避免樣品中雜質(zhì)的干擾。2.2.2流動相ph的影響分別配制pH為2.0、2.5、3.0、3.5、4.0、5.0的磷酸溶液,并以其作為流動相,測定同一標準溶液。結果隨著pH的增大,兩種酸的保留時間不斷接近。為使組分更好分離和保護色譜柱,選用pH=2.5的磷酸溶液最適宜。2.3標準鉻圖在最佳色譜條件下,分析有機酸標準液,乳酸、酒石酸、檸檬酸結果的保留時間分別為8.345、4.893、13.490min。見圖1。2.4內(nèi)標巖酒石酸峰面積測定分別配制0.05、0.1、0.3、0.5、0.7、0.9g/L的標準溶液,在最佳色譜條件下,取5μl分別進樣,測定峰面積,結果酒石酸的線性范圍為0.05～0.90g/L,回歸方程Y=12370+66528X(r=0.9953)。分別配制濃度為0.3、0.5、0.7、1.0、1.2g/L標準溶液,取5μl分別進樣,結果檸檬酸線性范圍為0.3～1.2g/L,回歸方程Y=-3641.7+25884X(r=0.9936)。2.5限制采樣以三倍信噪比值計算酒石酸,檸檬酸的檢出限分別為2.58×10-6(g/L),8.48×10-6(g/L)。2.6返回率和準確度取處理后的葡萄酒向其中加入一定量的標準溶液,結果進行測定。結果見表1、表2。2.7酒石酸含量分析用上述方法分別測定通化野生原汁葡萄酒、王朝干白葡、野生山葡萄酒、張裕干紅葡萄酒、野妹原汁山葡萄酒中的酒石酸,檸檬酸的含量,