登革病毒感染小鼠模型的構(gòu)建

登革病毒感染小鼠模型的構(gòu)建

病毒是黃病毒屬的成員。這是一個(gè)有膜的單帶病毒。它傳播到埃及和白紋病毒。它在亞熱帶和亞熱帶地區(qū)廣泛流行，沒(méi)有得到有效控制。目前登革熱在非洲、美洲、東地中海、東南亞和西太平洋地區(qū)100多個(gè)國(guó)家呈地方性流行,東南亞和西太平洋地區(qū)受登革病毒影響尤為嚴(yán)重。DV有4種血清型(DV1—4),可引起登革熱、登革出血熱和登革熱出血綜合征,致病機(jī)制尚未闡明,缺乏合適的動(dòng)物模型是主要原因之一。最近幾十年登革病毒感染病例數(shù)大幅上升,WHO估計(jì)每年全球約有5000萬(wàn)登革病毒感染者,其中50萬(wàn)人需住院治療,約2.5%死亡。研究人員正在努力構(gòu)建登革病毒感染動(dòng)物模型,用于登革病毒的致病機(jī)理、免疫機(jī)制、藥物檢測(cè)和疫苗評(píng)價(jià)研究。1可用于疾病親屬和疾病原因的動(dòng)物模型研究1.1登革病毒的復(fù)制位點(diǎn)登革病毒感染及病情嚴(yán)重程度受多種因素的影響:(1)宿主,包括遺傳的因素;(2)病毒的特征,包括毒力和細(xì)胞嗜性;(3)免疫反應(yīng),包括免疫保護(hù)作用和免疫增強(qiáng)效應(yīng)。利用針對(duì)非結(jié)構(gòu)蛋白NS3的抗體識(shí)別正在復(fù)制的登革病毒所在的細(xì)胞可確定登革病毒的親嗜性。已在人體尸檢標(biāo)本中發(fā)現(xiàn)脾和淋巴結(jié)的巨噬細(xì)胞和樹(shù)突細(xì)胞均被感染。與之類似,在小鼠的脾、淋巴結(jié)和骨髓中的吞噬細(xì)胞中都檢測(cè)到了NS3蛋白。在病毒擴(kuò)散至全身前,這些細(xì)胞會(huì)轉(zhuǎn)移到登革病毒復(fù)制的淋巴結(jié)內(nèi),并發(fā)現(xiàn)有骨髓中的骨髓細(xì)胞和肝細(xì)胞被感染的現(xiàn)象。在登革病毒抗體依賴增強(qiáng)效應(yīng)(ADE)小鼠模型中,還發(fā)現(xiàn)登革病毒可在肝竇內(nèi)皮細(xì)胞中復(fù)制。然而,人類感染登革病毒后是否也會(huì)出現(xiàn)同樣的情況,還有待于進(jìn)一步的研究。登革熱的臨床癥狀包括發(fā)熱、皮疹、血小板減少(血小板計(jì)數(shù)≤100000個(gè)/mm3)、肝中的酶數(shù)量上升、出血和血漿滲出。血小板減少是感染登革病毒后最重要的癥狀之一,可見(jiàn)于病程的各個(gè)階段,當(dāng)血小板計(jì)數(shù)低于50000個(gè)/mm3,可認(rèn)為是出現(xiàn)重癥的前兆。嚴(yán)重的血小板減少可與血管滲漏綜合征有關(guān),其原因包括:血小板相關(guān)IgG即抗血小板抗體引起的自身免疫,最終導(dǎo)致血栓性毛細(xì)血管病;彌漫性血管內(nèi)凝血(DIC);骨髓抑制,從而誘導(dǎo)早期的后發(fā)感染、前期的發(fā)熱和退燒后的噬紅細(xì)胞現(xiàn)象。血管損傷是登革病毒感染后的另一個(gè)病理表現(xiàn)。在登革出血熱患者皮膚活檢的毛細(xì)血管中,發(fā)現(xiàn)有明顯的變形和膨脹,但沒(méi)有嚴(yán)重?fù)p傷。血栓調(diào)節(jié)蛋白是內(nèi)皮損傷的重要標(biāo)志,在有彌漫性血管內(nèi)凝血和登革患者體內(nèi)均會(huì)增加。而登革病毒感染能否引起彌漫性血管內(nèi)凝血仍具有爭(zhēng)議。另外,纖維蛋白溶解可繼發(fā)于纖溶酶原的激活,而登革病毒也被證實(shí)能直接激活纖溶酶原。此外在登革病毒感染的過(guò)程中,還發(fā)現(xiàn)了與出血癥狀有關(guān)的抗纖溶酶原抗體。抗NS1抗體可交叉激活不同的凝血分子和凝血細(xì)胞,如內(nèi)皮細(xì)胞、血小板和纖維蛋白原。血管滲漏可以導(dǎo)致低血容量性休克,而導(dǎo)致血管滲漏的原因尚不明了,伴有TNFα增加的細(xì)胞因子風(fēng)暴和免疫系統(tǒng)失調(diào)都被證實(shí)與登革病毒誘導(dǎo)的血管滲透有關(guān)。糖氨基葡聚糖,如酸乙酰肝素,是一種帶負(fù)電的多糖,可讓登革病毒吸附并能在血管壁內(nèi)組成一道阻止蛋白滲漏的物理和電子屏障。多聚糖的破壞或者負(fù)電荷蛋白的中和都可能與登革病毒誘導(dǎo)的血管滲透有關(guān)。最后,血小板激活因子的激活可誘導(dǎo)增加血管的通透性。總的來(lái)說(shuō),人類感染和動(dòng)物模型中的登革病毒的主要復(fù)制位點(diǎn)尚未明確。此外,目前還沒(méi)能建立可靠的重癥登革動(dòng)物模型,但已知部分發(fā)病機(jī)制可能與血管滲漏綜合征的發(fā)展有關(guān)。1.2不同給藥劑量對(duì)登革病毒的復(fù)制效果影響研究表明蚊子每叮咬一次可傳播104~106PFU的WNV,假設(shè)登革病毒也處于相同水平,那么感染了104~106PFU登革病毒的動(dòng)物相當(dāng)于被蚊子叮咬一次。在皮下接種劑量為105PFU的登革病毒后,NHP可以維持病毒的復(fù)制。然而,動(dòng)物體內(nèi)的登革病毒復(fù)制率遠(yuǎn)低于人體,僅局限于淋巴組織,并伴有淋巴結(jié)病、淋巴球增多癥和白血病。另外,使用環(huán)磷酰胺可以讓登革病毒長(zhǎng)期感染恒河猴的單核細(xì)胞,環(huán)磷酰胺是一種能影響細(xì)胞增殖和引起淋巴細(xì)胞減少的烷化劑和免疫抑制劑。在皮內(nèi)接種登革病毒后,部分恒河猴偶爾會(huì)出現(xiàn)血小板計(jì)數(shù)低的情況,但沒(méi)有其他明顯的臨床癥狀。最近發(fā)現(xiàn),靜脈內(nèi)接種猴子更高劑量的登革病毒可以引起出血和凝血障礙,感染后第3d出現(xiàn)瘀點(diǎn)、血腫、與DIC相關(guān)的D-二聚體的增加、凝血障礙,但沒(méi)有發(fā)熱、厭食或乏力等癥狀。因此,靜脈內(nèi)注入高劑量登革病毒的恒河猴能夠產(chǎn)生類似于人類出血熱的癥狀,并有望應(yīng)用于登革病毒感染相關(guān)凝血障礙的靶向干預(yù)治療的臨床前試驗(yàn)。1.3病毒登格病毒感染小鼠模型1.3.1受試小鼠的登革病毒最初建立的登革病毒感染小鼠模型不會(huì)出現(xiàn)人類登革熱的臨床癥狀,而是發(fā)展為嗜神經(jīng)疾病,這一情況在人群中少見(jiàn)。包括A/J、BALB/c和C57BL/6小鼠在內(nèi)的免疫活性小鼠支持一定程度的登革病毒復(fù)制,出現(xiàn)有限的登革熱的特征性癥狀,如肝損傷、肝臟酶數(shù)量的增高、白細(xì)胞計(jì)數(shù)增加、血細(xì)胞減少以及紅細(xì)胞比容增加,A/J和BALB/c小鼠可最終死于麻痹癱瘓。有報(bào)道在高度改良的病毒毒株高劑量感染的BALB/c小鼠中可出現(xiàn)與登革出血熱相似的癥狀。在C57BL/6小鼠體表不同的四個(gè)點(diǎn)真皮內(nèi)注射高劑量登革病毒(3×109PFU,DENV-2strain16681),可觀察到出血癥狀,且小鼠內(nèi)皮細(xì)胞可感染登革病毒。感染了高劑量登革病毒的其他免疫活性小鼠也可以發(fā)生沒(méi)有明顯癥狀的內(nèi)皮損傷以及組織出血。1.3.2ag119小鼠毒力檢測(cè)感染了登革病毒臨床分離株的AG129小鼠被誘導(dǎo)產(chǎn)生了與其他模型相似的神經(jīng)系統(tǒng)癥狀。然而,使用小鼠改良的DENV-2D2S10株感染AG129小鼠出現(xiàn)了血管滲漏綜合征,與人類常見(jiàn)的嚴(yán)重癥狀相似。毒力增強(qiáng)的DENV-2D2S10株在E蛋白的硫酸肝素連接域發(fā)生突變,可以降低被清除率,引起缺乏IFN-α/β受體的A129和C57/BL6小鼠致命性的疾病。隨后發(fā)現(xiàn)NS1區(qū)發(fā)生變異的DENV-D2S10的三斑純化克隆株S221可引起缺乏IFN-α/β受體的A129小鼠發(fā)病。使用高度小鼠改良的DENV-2毒株可引起B(yǎng)ALB/c小鼠出現(xiàn)了嚴(yán)重疾病的癥狀,包括肝損傷、出血癥狀和血管滲漏,但毒力增強(qiáng)的原因尚未闡明。最近發(fā)現(xiàn)未經(jīng)小鼠改良的登革病毒株能引起免疫功能不全小鼠嚴(yán)重疾病。腹腔注射不同劑量(102-107pfu)的DENV-2D2Y98P株(passage20),根據(jù)劑量的不同,可使AG129小鼠出現(xiàn)不同的癥狀,包括從輕度到重度的疾病,以肝的酶類增加和脾的結(jié)構(gòu)破壞為特征,但沒(méi)有神經(jīng)系統(tǒng)癥狀。一個(gè)在NS4B區(qū)的變異被認(rèn)為是導(dǎo)致病毒毒力改變的原因。1.3.3在腫瘤細(xì)胞內(nèi)接種登革病毒SCID小鼠存在T細(xì)胞和B細(xì)胞的發(fā)育障礙,自身缺乏體液免疫和細(xì)胞免疫,可以接受異體移植,已廣泛用于病毒感染模型的研究。SCID小鼠在感染登革病毒之前,會(huì)先移植入腫瘤細(xì)胞,登革病毒就接種在這些移植的細(xì)胞里。登革病毒可以在SCID小鼠的腫瘤模型中高效復(fù)制,先主要感染移植的腫瘤細(xì)胞,然后轉(zhuǎn)移到大腦,引起麻痹癱瘓,如K562-engraftedSCID小鼠、Huh7-engraftedSCID小鼠、HepG2-engraftedSCID小鼠。因此,這一模型與登革病毒的親嗜性和致病機(jī)理研究相關(guān)性不大,但可以用于藥物及疫苗的評(píng)價(jià)。1.3.4小鼠的人體內(nèi)免疫反應(yīng)人類細(xì)胞比小鼠細(xì)胞更容易感染登革病毒,所以建立登革病毒感染小鼠模型的另一個(gè)方法是發(fā)展人源化小鼠,如在小鼠體內(nèi)移植包括CD+43等的人類源性細(xì)胞。移植腫瘤細(xì)胞到SCID小鼠體內(nèi)很容易,但是由于其固有免疫反應(yīng),包括能阻止移植造血組織的NK細(xì)胞,所以移植人類組織入小鼠是很困難的?？蓪CID小鼠先與非肥胖糖尿病(NOD)小鼠回交,再與敲除了IL2Rγ的KO小鼠回交。其中NOD小鼠的NK細(xì)胞功能缺陷,以及因C5缺乏導(dǎo)致的溶血補(bǔ)體反應(yīng)缺陷。這種天生缺陷與改良免疫反應(yīng)的結(jié)合讓人類的各種細(xì)胞和組織可更好地移植到小鼠體內(nèi)。NOD/SCID/IL2RγKO小鼠和人類CD+43祖細(xì)胞的重組使人類不同的細(xì)胞可以在小鼠體內(nèi)生長(zhǎng),包括登革病毒感染的主要靶細(xì)胞樹(shù)突細(xì)胞。登革病毒可在不同的小鼠組織中感染人類細(xì)胞,包括脾、骨髓、肝及所有與登革病毒感染臨床體征相關(guān)的組織。在感染登革病毒后,小鼠出現(xiàn)登革熱的臨床癥狀,包括發(fā)熱、紅疹和血小板減少,但還沒(méi)有出現(xiàn)更嚴(yán)重的癥狀。這些小鼠提供了研究人體內(nèi)免疫機(jī)制的可能性。目前要產(chǎn)生穩(wěn)定足量的抗體還很困難,難以將抗體產(chǎn)品化,但小鼠通常都能產(chǎn)生針對(duì)登革病毒特有的T細(xì)胞反應(yīng),使其成為研究在持續(xù)感染中T細(xì)胞交叉反應(yīng)的重要模型。相反,使用4種不同的低傳代數(shù)DENV-2或?qū)嶒?yàn)室改良的DENV-2感染RAG和IL2Rγ基因缺陷的RAG-hu小鼠,小鼠可出現(xiàn)發(fā)熱癥狀,但沒(méi)有其他癥狀。另外,大部分的RAG/IL2RγKO小鼠(10/16)都產(chǎn)生了抗登革病毒抗體,其中3只小鼠產(chǎn)生了中和抗體。最近,有一種新的BLT-NSG小鼠模型,它是移植有臍帶血造血干細(xì)胞的人源化NOD-scidIL2rγnull小鼠,同時(shí)移植了人類胎兒的甲狀腺和肝組織。研究發(fā)現(xiàn)在BLT-NSG小鼠的血清中登革病毒特異抗體滴度增加。另外,在急性期和記憶期由BLT-NSG小鼠的脾細(xì)胞產(chǎn)生的B淋巴細(xì)胞分泌出DNNV特異性具有中和能力的IgM抗體。BLT-NSG小鼠中的人源性T細(xì)胞分泌包括DENV肽池和HLA-A2限制肽的IFN-γ。BLT-NSG小鼠也用于研究對(duì)登革病毒疫苗的人類免疫反應(yīng)和連續(xù)登革病毒感染的初始免疫作用。2增加病毒載量流行病學(xué)研究表明重癥登革與不同血清型的DENV二次感染之間密切相關(guān)。在特定條件下,抗DENV抗體可以通過(guò)交叉反應(yīng)產(chǎn)生ADE效應(yīng),造成更嚴(yán)重的疾病。ADE效應(yīng)通過(guò)增強(qiáng)登革病毒對(duì)含有Fcγ受體的細(xì)胞的感染,增加病毒載量。重癥登革的免疫致病機(jī)理可能與交叉反應(yīng)的T細(xì)胞有關(guān),交叉反應(yīng)的T細(xì)胞通過(guò)參與前炎癥級(jí)聯(lián)反應(yīng),同時(shí)產(chǎn)生比同型T細(xì)胞更高水平的TNFα和IFN-γ,從而導(dǎo)致細(xì)胞因子的紊亂。盡管如此,大多數(shù)二次感染異型登革病毒的病人都表現(xiàn)為無(wú)癥狀或典型登革熱的癥狀。因此,適應(yīng)性免疫應(yīng)答不僅與免疫致病機(jī)理有關(guān),還能對(duì)機(jī)體產(chǎn)生有效的保護(hù)。造成交叉免疫保護(hù)和免疫病理?yè)p傷這兩個(gè)截然相反效應(yīng)的因素還不清楚,而這一問(wèn)題也成為解決重癥登革致病機(jī)制及免疫保護(hù)機(jī)制的關(guān)鍵性問(wèn)題,對(duì)完善疫苗設(shè)計(jì)有潛在的應(yīng)用價(jià)值。2.1血清型/基因型denv的同源性和免疫反應(yīng)NHP不能出現(xiàn)臨床癥狀,但能產(chǎn)生與人體內(nèi)相似的免疫應(yīng)答。人類初次感染4種血清中的任意一種皆可誘導(dǎo)廣泛的可交叉反應(yīng)的抗體和T細(xì)胞應(yīng)答,但是免疫應(yīng)答主要針對(duì)原感染的血清型。異型登革病毒感染者血清間的交叉反應(yīng)性相當(dāng)普遍,尤其是在高保守的NS蛋白表位或E蛋白保守表位,但要區(qū)分不同的表位和依賴于各種血清型/基因型DENV同源性的程度。另外,NHP相繼感染異型登革病毒可以誘導(dǎo)交叉免疫應(yīng)答,但針對(duì)首次感染血清型的抗體滴度最高,與在人體和小鼠體內(nèi)觀察到的結(jié)果相似,這種現(xiàn)象被稱為“原抗原之罪”。NHP繼發(fā)感染DENV會(huì)增加出現(xiàn)病毒血癥的幾率,暗示了ADE效應(yīng)可能通過(guò)交叉反應(yīng)的抗體增加病毒載量。與之相似,在感染登革病毒之前,抗登革病毒單克隆抗體1A15被動(dòng)轉(zhuǎn)移,恒河猴發(fā)生病毒血癥的幾率增加3到100倍。細(xì)胞免疫在NHP模型中并不明顯。有研究發(fā)現(xiàn)在感染登革病毒后,會(huì)出現(xiàn)T細(xì)胞的交叉反應(yīng),同時(shí)針對(duì)初次感染血清型的免疫應(yīng)答會(huì)更強(qiáng),與在人體內(nèi)的情況相似。在人體內(nèi)初次感染的登革病毒可參與登革出血熱和登革休克綜合征的免疫發(fā)病機(jī)制中,低親和度的記憶T細(xì)胞會(huì)被高度激活?？偠灾?在NHP模型中可以看到病毒血癥的增加,但沒(méi)出現(xiàn)血管滲漏或與登革出血熱和登革休克綜合征類似的癥狀,因此無(wú)法將這一模型運(yùn)用于致病機(jī)理及免疫病理機(jī)制的研究。2.2t細(xì)胞誘導(dǎo)的免疫致病機(jī)制對(duì)交叉反應(yīng)機(jī)制的研究:部分免疫缺陷的AG129小鼠能對(duì)登革病毒產(chǎn)生廣泛的交叉反應(yīng)和持久的抗體應(yīng)答。在小鼠模型中,相繼感染的登革病毒會(huì)引起第二次感染血清型病毒載量的減少和對(duì)抗致命性感染的機(jī)體保護(hù)。另外,已證明T細(xì)胞在保護(hù)機(jī)體方面有重要作用。對(duì)DENV-1產(chǎn)生免疫且缺乏T細(xì)胞的小鼠在二次感染DENV-2DS210后,出現(xiàn)了疾病的臨床癥狀。目前尚不能建立繼發(fā)感染登革病毒造成嚴(yán)重疾病的動(dòng)物模型,但可用于研究由交叉反應(yīng)的T細(xì)胞誘導(dǎo)的免疫致病機(jī)制。利用AG129小鼠先感染DENV-1,6至8周后再感染DENV-2,建立了連續(xù)感染模型。從在ELISPOT中發(fā)現(xiàn)的DENV-1特異性細(xì)胞數(shù)目增加,以及從在二次感染DENV-2的小鼠分離出的多克隆刺激脾細(xì)胞的上清液中,發(fā)現(xiàn)抗DENV-1的親和力增加,都可證實(shí)在急性二次感染不同血清型時(shí),DENV特異性親和力的增加是由交叉反應(yīng)的記憶B細(xì)胞介導(dǎo)的。然而,即使對(duì)DENV特異性親和力增加,對(duì)DENV特異性的中和能力是沒(méi)有增加的,中和能力可能是由幼稚B細(xì)胞介導(dǎo)的。將DENV-1免疫B細(xì)胞和T細(xì)胞轉(zhuǎn)移至已經(jīng)二次感染了DENV-2的幼鼠,發(fā)現(xiàn)死亡率降低了。缺乏T細(xì)胞的小鼠會(huì)出現(xiàn)癥狀,但二次感染DENV能痊愈。并發(fā)現(xiàn)了保護(hù)性交叉抗體是由成熟的漿細(xì)胞和記憶B細(xì)胞分泌的,且交叉反應(yīng)的B細(xì)胞和T細(xì)胞能產(chǎn)生對(duì)二次感染異種血清型DENV的保護(hù)。最近,利用C57BL/6小鼠模型發(fā)現(xiàn),T細(xì)胞的表位對(duì)免疫保護(hù)和免疫增強(qiáng)有著不同的作用。雖然這些小鼠模型都初步闡明了登革病毒繼發(fā)感染時(shí)交叉反應(yīng)T細(xì)胞的激活模式,但仍未真正建立重癥登革模型。因此,要構(gòu)建出支持病毒復(fù)制、自然T細(xì)胞應(yīng)答和重癥登革癥狀的小鼠模型需要更好地闡明T細(xì)胞應(yīng)答在登革病毒二次感染和血管滲漏的作用。2.2.2發(fā)病機(jī)制的可能通過(guò)被動(dòng)轉(zhuǎn)運(yùn)抗登革病毒單克隆抗體、交叉反應(yīng)的免疫血清或稀釋的同型血清,已經(jīng)成功在AG129小鼠和其他小鼠中建立ADE小鼠模型。用抗登革病毒血清預(yù)處理小鼠,感染低于致死量的登革病毒劑量(105PFUDENV-2D2S10i.v.)即會(huì)死亡。這一預(yù)處理可提高小鼠血清及部分組織中的病毒載量,并出現(xiàn)與登革出血熱和登革休克綜合征相似的癥狀,包括血管滲漏綜合征、血清中TNF-α和IL-10水平增加以及死亡前血小板計(jì)數(shù)偏低。在使用107PFUDENV-2D2S10的致死性模型中,同樣出現(xiàn)了上述所有癥狀,說(shuō)明發(fā)病機(jī)制可能與病毒載量密切相關(guān)。高病毒載量可以通過(guò)高滴度DENV培養(yǎng)物直接注入,也可以通過(guò)ADE效應(yīng)誘導(dǎo)。值得注意的是,接受血清或抗體被動(dòng)轉(zhuǎn)移的小鼠并沒(méi)有對(duì)登革病毒產(chǎn)生記憶。免疫記憶的出現(xiàn)可能會(huì)限制ADE效應(yīng)的誘導(dǎo),連續(xù)感染登革病毒的小鼠模型可用于研究記憶細(xì)胞免疫應(yīng)答下的ADE效應(yīng)。中和抗體的數(shù)量似乎對(duì)誘導(dǎo)免疫保護(hù)還是ADE效應(yīng)至關(guān)重要。最近研發(fā)了一種全新的小鼠改良毒株,該毒株可以在IFNAR1-/-小鼠(只缺乏IFN受體)中誘導(dǎo)致命的疾病。使用DENV-3感染IFNγ缺陷小鼠,小鼠會(huì)出現(xiàn)嚴(yán)重的癥狀和病毒的高水平復(fù)制,死亡率更高。研究表明,IFNγ的缺乏與一氧化氮合酶2(NOS2)的表達(dá)較少以及NOS2-/-小鼠對(duì)DENV-3感染敏感性增強(qiáng)有關(guān),對(duì)DENV-3的保護(hù)機(jī)制可依靠IFNγ-NOS2-NO依賴的通道來(lái)控制病毒的復(fù)制和疾病的嚴(yán)重程度。因此,DENV-3感染的免疫缺陷小鼠重癥模型也許能成為闡明疾病的免疫發(fā)病機(jī)制和保護(hù)機(jī)制的工具。2.3初次和繼發(fā)感染間隔時(shí)間的延長(zhǎng)人體內(nèi)體液免疫的記憶應(yīng)答隨著時(shí)間的推移而減弱,而初次感染和繼發(fā)感染之間間隔時(shí)間的長(zhǎng)短可能是發(fā)展為重癥的關(guān)鍵。由于小鼠的壽命短,小鼠模型并不是解決上述問(wèn)題最理想的模型,可能NHP模型更適合這一研究。3可用于藥物治療效果評(píng)價(jià)研究的小鼠模型目前還沒(méi)有商業(yè)化抗登革病毒的特效藥物,只有輸液用于登革出血熱和登革休克綜合癥的支持治療。3.1尼姆樹(shù)胺和板栗樹(shù)精胺已經(jīng)將抗病毒候選藥物在小鼠麻痹和腦炎模型中進(jìn)行了評(píng)價(jià);但其在人群中的療效尚不確定,因?yàn)樗幬镌谥袠猩窠?jīng)系統(tǒng)的生物學(xué)藥效反應(yīng)與在其他組織不同。尼姆樹(shù)葉的提取液可抑制病毒復(fù)制,防止受感染乳鼠出現(xiàn)臨床癥狀。栗樹(shù)精胺是一種糖苷酶抑制劑,可抑制病毒蛋白的折疊,降低病毒滴度并使A/J小鼠感染后的死亡率下降。該藥和另一種抗病毒藥物聯(lián)合應(yīng)用于感染了未改良DENV菌株(TSV01)的AG129小鼠中,可有效降低病毒載量和炎癥反應(yīng)。表明登革病毒TSV01株可用于檢驗(yàn)準(zhǔn)抗病毒藥物對(duì)病毒血癥的治療效果,并可說(shuō)明聯(lián)合用藥中不同抗病毒藥物的協(xié)同作用。3.2ade效應(yīng)的檢測(cè)感染小鼠改良的DENV的AG小鼠模型可出現(xiàn)致命的血管滲漏綜合征,也被用于抗病毒的試驗(yàn)。藥效指標(biāo)可以是發(fā)病率、死亡率、病毒載量、血管滲漏的癥狀、血小板數(shù)量和TNFα等前炎癥因子的水平。在出現(xiàn)ADE效應(yīng)的AG129小鼠中,應(yīng)用siRNA靶向登革病毒基因組中的5’環(huán)化序列,可延長(zhǎng)壽命并大幅度降低病毒載量。該模型產(chǎn)生的單克隆抗體無(wú)法與Fcγ受體結(jié)合,可用于研究預(yù)防和治療用藥物。因此,能出現(xiàn)與人類癥狀相似的免疫缺陷小鼠模型對(duì)抗病毒藥物的評(píng)價(jià)非常有效。4臨床前疫苗的準(zhǔn)備登革疫苗尚未研制成功,部分處于臨床試驗(yàn)的1/2階段。迄今正在研發(fā)的登革病毒疫苗有減毒活疫苗、滅活疫苗、病毒樣顆粒(VLP)以及以E蛋白、PrM蛋白、NS1蛋白為靶向的亞單位疫苗。臨床前疫苗的測(cè)試包括安全性、傳染性(指活疫苗)、免疫致病性及保護(hù)性的評(píng)估。由于NHP模型價(jià)格昂貴,通常使用小鼠模型作為疫苗臨床前研究的第一步?？偟膩?lái)說(shuō),免疫活性小鼠是測(cè)試疫苗免疫原性最適宜模型。4.1基于登革病毒的免疫反應(yīng)強(qiáng)度在乳鼠模型中,登革病毒的復(fù)制量很低,這可能會(huì)導(dǎo)致低估減毒活疫苗的免疫應(yīng)答強(qiáng)度。感染了登革病毒的免疫活性小鼠,不管是乳鼠還是成鼠,皆可致神經(jīng)系統(tǒng)疾病并死于麻痹癱瘓。乳鼠是個(gè)非常好的測(cè)試安全性的模型,可用于評(píng)估減毒活疫苗的潛在神經(jīng)毒力。4.2病毒登格病毒感染跳蚤模型4.4養(yǎng)疫防治模型NHP模型主要用于致病