DB21-T 3286-2020 水質 5種磺胺類抗生素的測定 固相萃取-高效液相色譜-三重四極桿串聯(lián)質譜法

13.020.40Z

10DB21 21/T

3286—2020水質

5

種磺胺類抗生素的測定固相萃取/高效液相色譜-三重四極桿串聯(lián)質譜法 遼寧省市場監(jiān)督管理局發(fā)

布DB21/T

3286— 前 言

.............................................................................II1

適用范圍

............................................................................12

規(guī)范性引用文件

...................................................................... 13

方法原理

............................................................................ 14

干擾和消除

.......................................................................... 15

試劑

................................................................................ 16

儀器和設備

.......................................................................... 27

樣品

................................................................................ 28

分析步驟

............................................................................ 39

結果計算與表示

...................................................................... 510

精密度和準確度

..................................................................... 611

質量保證和質量控制

................................................................. 712

廢物處理

........................................................................... 7附錄

A

（資料性附錄）

方法的精密度和準確度............................................. 8DB21/T

3286—本標準按照GB/T

1.1—《標準化工作導則

第1部分：標準的結構和編寫》給出的規(guī)則編寫。本標準附錄A為資料性附錄。本標準由大連市市場監(jiān)督管理局提出。本標準由遼寧省生態(tài)環(huán)境廳歸口。本標準主要起草單位：遼寧省大連生態(tài)環(huán)境監(jiān)測中心。本標準主要起草人：付曉燕、劉蓮蓮、楊碩、楊萌。我們將及時答復并認真處理，根據(jù)實際情況依法進行評估及復審。30。58系電話IIDB21/T

3286—

警告：實驗中所使用的甲醇、磺胺類抗生素屬于有毒有機物，實驗操作時應避免接觸皮膚和衣物，溶液配制過程應在通風櫥內進行。1適用范圍5

種磺胺類抗生素的高效液相色譜-三重四極桿串聯(lián)質譜法。本標準適用于地表水、地下水、海水、工業(yè)廢水和生活污水中

5

種磺胺類抗生素的測定。當樣品體積為

ml，濃縮定容至

ml，進樣體積為

μl時，本方法磺胺嘧啶、磺胺甲基嘧0.01

μg/L、0.01

μg/L、0.01

μg/L、0.009

μg/L和0.01

μg/L，測定下限分別為0.04

μg/L、0.04

μg/L、0.04

μg/L、0.036

μg/L，測定上限均為100

μg/L。2 規(guī)范性引用文件件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改單）適用于本文件。GB/T

6682

分析實驗室用水規(guī)格和試驗方法GB/T

14581

湖泊和水庫采樣技術指導HJ

91.1

污水監(jiān)測技術規(guī)范（部分代替HJ/T

污水監(jiān)測技術規(guī)范）HJ/T

地表水和污水監(jiān)測技術規(guī)范HJ/T

地下水環(huán)境監(jiān)測技術規(guī)范HJ

442

近岸海域環(huán)境監(jiān)測規(guī)范HJ

493

樣品的保存和管理技術規(guī)定3 方法原理水樣經固相萃取后，水中磺胺類抗生素經液相色譜儀分離，用串聯(lián)質譜儀在多反應監(jiān)測（MRM件下測定，根據(jù)保留時間和特征離子對定性，內標法以峰面積（或峰高）定量。4 干擾和消除等方式降低或消除。5 試劑5.5.3

磺胺甲基嘧啶-

C6標準貯備液：5.5.3

磺胺甲基嘧啶-

C6標準貯備液：ρ =100.0

。準確稱取適量的磺胺甲基嘧啶-

C6標準物質（5.4.2），用甲醇（100.0

mg/L的標準貯備將磺胺甲基嘧啶-

C6標準貯備溶液（5.5.35.1）稀釋至

，現(xiàn)用現(xiàn)配。除非另有說明，分析時均使用符合國家標準的優(yōu)級純試劑，實驗用水符合

66825.1

甲醇（3OH）：液相色譜純。5.2

甲酸（HCOOH）。5.3

甲酸溶液：（）。量取

ml甲酸（）緩慢加入1

L實驗用水中，混勻。5.4

標準物質5.4.1

99%。5.4.2

磺胺甲基嘧啶-C內標標準物質：純度≥。5.5

標準溶液5.5.1

磺胺類抗生素標準貯備液：ρ=100.0

mg/L。準確稱取適量的每種磺胺類標準物質（5.4.1），用甲醇配成100.0

mg/L的標準貯備液，或直接購買有證標準溶液，貯備液在0~4℃冷藏避光保存，可穩(wěn)定保存20天，或參照制造商的產品說明保存。5.5.2

磺胺類抗生素標準使用液：ρ=1.00

mg/L。將磺胺類抗生素標準貯備溶液（5.5.11.0

mg/L，現(xiàn)用現(xiàn)配。1313液，或直接購買有證標準溶液，貯備液在0~4℃冷藏避光保存或參照制造商的產品說明保存使用。5.5.4

磺胺甲基嘧啶-C標準使用液：ρ=1.0

mg/L。135.6

氮氣：純度≥99.9%。6 儀器和設備6.1

高效液相色譜/三重四極桿質譜儀：高效液相色譜儀具備梯度洗脫功能；三重四極桿質譜儀配有電噴霧離子化源（ESI）。6.2

色譜柱：填料為硅膠基質C18，粒徑

100

mm，內徑2.1

mm，或其他等效色譜柱。6.3

固相萃取裝置。6.4

濃縮裝置：K-D

濃縮器、氮吹儀等性能相當?shù)脑O備。6.5

濾膜：針式有機相過濾器，孔徑0.22

μm，直徑13

，玻璃纖維、親水性聚丙烯、親水性聚四氟乙烯（PTFE）或其它等效材質。6.6

固相萃取柱：填料為二乙烯苯和

N-乙烯基吡咯烷酮共聚物或同等柱效的萃取柱，規(guī)格為

6

mg。6.7

ml。6.8

采樣瓶：

ml棕色玻璃瓶，螺旋蓋（具聚四氟乙烯涂層的密封墊）。6.9

微量注射器：10

μl、50

μl、100

μl、1

。7 樣品7.1 樣品采集與保存min

950.5955.030707.030707.590108.590109.09510.095DB21/T

3286—按照GB/T

14581、HJ

91.1、HJ/T

91、HJ/T

164、HJ

442和

493的相關規(guī)定進行樣品的采集和保存。采集樣品時，向采樣瓶（）中加入甲酸（）

μl，然后采集樣品至滿瓶，擰緊螺旋蓋密封，搖勻。水樣0~4℃冷藏避光保存，48

h內完成分析。7.2 試樣制備活化：用10

ml甲醇（5.1）活化固相萃取柱，保證固相萃取柱柱頭浸潤。再用10

實驗用水活化固相萃取柱，保證固相萃取柱柱頭浸潤。上樣：水樣上樣前放置至室溫，準確量取100

ml水樣，水樣以3~5

ml/min淋洗：用10

ml實驗用水淋洗固相萃取柱，將在固相萃取柱上保留較弱的雜質淋洗下來，棄去淋洗液。洗脫：用10

ml甲醇（5.1）洗脫富集后的固相萃取柱，并用接收管接收甲醇洗脫液。濃縮：將上述提取溶液濃縮至低于

ml近干，加甲酸溶液（5.3）定容到

ml，最后加入內標使用液10.0

μl，經0.22

μm濾膜（）過濾，置于棕色樣品瓶（6.7）中，待測定。7.3 空白試樣的制備用實驗用水代替樣品按照試樣制備（7.2）相同操作步驟，制備空白試樣。8 分析步驟8.1 儀器參考條件8.1.1液相色譜儀參考條件流動相：流動相A為甲醇（5.1），流動相B為甲酸溶液（），線性梯度洗脫程序見表1。柱溫：40進樣體積：10

μl；流速：0.2

ml/min；表1

液相色譜流動相線性梯度洗脫程序表1

液相色譜流動相線性梯度洗脫程序m/zms251.0→92.0*203030251.0→156.015265.1203528265.116279.1203028279.115281.1→92.1*203028281.1→156.115254.0→92.203030254.0→156.2013

6271.0→162.0*203528DB21/T

3286—正離子模式（正離子模式（

離子化電壓：3000

V；離子源溫度：檢測方式：MRM，多反應監(jiān)測條件見表2。表2

目標化合物的多反應監(jiān)測條件表2

目標化合物的多反應監(jiān)測條件8.2.1 校準曲線的建立取一定量磺胺類抗生素標準使用液（5.5.25.3）水溶液中，制備至少5個濃度點的標準系列，磺胺類抗生素的質量濃度分別為4

μg/L、10.0

2

μg/L、50.0

μg/L和100

每毫升標準系列溶液中加入10.0

μl內標使用液（5.5.4），貯存在棕色樣品瓶（）中。標，繪制校準曲線。8.2.2標準樣品譜圖磺胺類抗生素和內標物的總離子流圖，見圖1。DB21/T

3286—（注：1：磺胺嘧啶、2：磺胺甲基嘧啶、3：磺胺甲基嘧啶-

（注：1：磺胺嘧啶、2：磺胺甲基嘧啶、3：磺胺甲基嘧啶-

C6、4：磺胺二甲嘧啶、5：磺胺間甲氧嘧13啶、6：磺胺甲惡唑）8.3 測定8.3.1 試樣測定按照與校準曲線的建立（）相同的參考條件，進樣

10

μl，進行試樣（）的測定。5.38.3.2空白試驗按照與校準曲線的建立（）相同的參考條件，進樣

10

7.3）的測定。9 結果計算與表示9.1 定性分析按照表2中確定的母離子和子離子進行檢測，在相同實驗條件下，試樣中磺胺類抗生素的保留時間與標準樣品中磺胺類抗生素的保留時間相對偏差的絕對值應小于2.5%度（Ksam）與濃度接近的標準溶液中對應的定性離子相對豐度（Kstd）進行比較，所得偏差在表3規(guī)定的最大允許偏差范圍內，則可判定為樣品中存在磺胺類抗生素。K=

A

×100%

........................................... 式中：K樣品中磺胺類抗生素定性離子的相對豐度，%；A樣品中磺胺類抗生素定性離子的峰面積（或峰高）；KstdKsam相對于

Kstd的最大允許偏差Kstd5020%20Kstd25%10Kstd30%Kstd1050%DB21/T

3286—A樣品中磺胺類抗生素定量離子的峰面積（或峰高）。Kstd

=

Astdstd

×100%

.......................................... 式中：Kstd標準樣品中磺胺類抗生素定性離子的相對豐度，%；A磺胺類抗生素定性離子的峰面積（或峰高）；A磺胺類抗生素酸定量離子的峰面積（或峰高）。表3 定性確證時相對離子豐度的最大允許偏差表3 定性確證時相對離子豐度的最大允許偏差當磺胺類抗生素磺胺類抗生素的質量濃度

ρ3x

1iV

D

.......................................... （3）式中：ρ

——樣品中磺胺類抗生素的質量濃度，μg/L；ρ乘積后，由標準曲線（）所得試樣中磺胺類抗生素的質量濃度，μg/L；V——萃取液濃縮后的體積，；V——水樣體積，；D——樣品稀釋倍數(shù)。9.3結果表示當測定結果小于

1

mg/L

時，保留至小數(shù)點后三位；當測定結果大于或等于

1

mg/L

時，保留三位有效數(shù)字。10 精密度和準確度10.1 精密度3家實驗室分別對磺胺類抗生素的加標濃度為0.050

μg/L和0.500

μg/L的地表水、廢水和海水進行了6次重復測定。DB21/T

3286—地表水實驗室內相對標準偏差分別在5.9%~10%、之間，實驗室間相對標準偏差分別在1.5%~4.2%、0.6%~1.6%之間，重復性限分別在0.009

μg/L、0.065

μg/L~0.078

μg/L之間，再現(xiàn)性限分別在0.009

μg/L~0.012

μg/L、0.065

μg/L~0.078

μg/L之間。廢水實驗室內相對標準偏差分別在5.0%~10%、3.4%~8.4%之間，實驗室間相對標準偏差分別在1.3%~4.5%、0.7%~2.9%之間，重復性限分別在0.009

μg/L、0.066

μg/L~0.077

μg/L之間，再現(xiàn)性限分別在0.010

μg/L~0.011

μg/L、0.066

μg/L~0.077

μg/L之間。海水實驗室內相對標準偏差分別在5.1%~10%、4.3%~7.4%之間，實驗室間相對標準偏差分別在0.6%~4.1%、0.3%~1.3%之間，重復性限分別在0.008

μg/L~0.0010

μg/L、0.070

μg/L之間，再現(xiàn)性限分別在0.008

μg/L~0.010

μg/L、0.071

μg/L~0.079

μg/L之間，具體見附錄AA.1。10.2 準確度3家實驗室分別對磺胺類抗生素的加標濃度為0.050

μg/L和0.500

μg/L的地表水、廢水和海水進行了6次重復測定，其中地表水加標回收率范圍在、之間；廢水加標回收率范圍在、、附錄A中表。11 質量保證和質量控制11.1 空白試驗每批樣品（≤20個/批）至少做一個空白實驗，空白試樣值低于方法檢出限。11.2 校準校準曲線的相關系數(shù)r≥20間校核點，其測定結果與校準曲線相應點濃度的相對誤差應在±以內。11.3 精密度控制每批樣品應至少測定10%的平行雙樣，樣品數(shù)量少于個時，應至少測定一個平行雙樣，平行雙樣測定結果的相對偏差應在±20%以內。11.4 準確度控制每批樣品應至少測定5%20標回收率應在75%~110%之間。12 廢物處理實驗過程中產生的廢液和廢物應分類收集和保管，委托有資質的單位進行處理。μ

μμ0.0506.5~103.60.0090.0090.5004.6~5.70.70.0650.0650.0506.7~103.90.0100.0100.5005.7~7.20.80.0780.0780.0507.8~124.20.0110.0120.5005.2~6.31.30.0730.0730.0505.9~9.61.50.0090.0090.5004.3~5.80.60.0660.0660.0506.2~9.84.00.0090.0100.5005.5~6.71.60.0740.0740.0507.2~9.52.70.0100.0100.5003.4~7.22.60.0760.0770.0505.1~9.61.30.0100.0100.5003.5~8.42.90.0770.0790.0505.8~103.00.0100.0100.5004.2~7.21.70.0690.0690.0505.7~8.44.50.0090.0100.5005.0~6.70.70.0770.0770.0505.0~9.61.80.0110.0110.5004.7~6.21.00.0660.0660.0505.1~9.13.70.0090.0090.5004.3~6.80.30.0730.0730.0506.4~8.83.60.0090.0090.5004.7~7.41.10.0770.0770.0505.2~9.24.10.0080.0080.5004.7~6.40.60.0710.0710.0506.7~8.51.60.0090.0090.5006.0~6.70.60.0790.079DB21/T

3286—附錄

A（資料性附錄）方法的精密度和準確度三家實驗室分別對2種不同濃度的樣品進行了測定。精密度和準確度結果見表A.1和表A.2。表A.1表A.1 方法的精密度（μg/L）加標濃度（μg/LP2SPND0.05080.2~85.683.7±6.0ND0.50087.7~88.888.4±1