微生物檢測操作流程

文獻(xiàn)類型操作規(guī)程(SOP)文獻(xiàn)編號編制日期編制部門審核日期審核部門同意日期頒發(fā)部門編訂根據(jù)替代文獻(xiàn)分發(fā)部門生效日期建立一種微生物程度檢查(包括細(xì)菌、霉菌、酵母菌)原則工作程序，規(guī)范QC微生物QC微生物程度檢查人員；質(zhì)量管理部QC人員接到微生物程度檢查的《工作進(jìn)程計劃單》后，查對《取樣指令》,確定微生為了保證被檢品在取樣后規(guī)定的時間內(nèi)完畢檢查，取樣前應(yīng)準(zhǔn)備好檢查需要的多種器皿(清洗→干燥→包裹)、培養(yǎng)基和稀釋劑等(配制→分裝→包裹),并滅菌備用。供試液的制備根據(jù)供試品的理化特性與生物需特性，采用合適的措施制備供試液。文獻(xiàn)類型操作規(guī)程(SOP)文獻(xiàn)編號編訂根據(jù)替代文獻(xiàn)取供試品10ml,加pH7.0無菌氯化鈉-蛋白胨緩沖液至100ml,混勻，作為供試液?？捎蛣┛上燃尤脒m量的無菌聚山梨酯80使供試品分散均勻，然后再加0.9%無菌氯化鈉-蛋白胨緩沖液至100m,混勻，作為供試液。措施，混勻，作為1:10供試液。必要時可加適量的無菌聚山梨酯80,并置水浴中合適取供試品5g(5m1),加入含溶化的(溫度不超過45℃)5g司盤80、3g單硬脂酸甘油酯、10g聚山梨酯80無菌混合物的燒杯中，用無菌玻棒攪拌成團(tuán)后，慢慢加入45℃pH7.0無菌氯化鈉-蛋白胨緩沖液至100ml,邊加邊攪拌，使其充足乳化，作為1:20供試液。取供試品10g,加PH6.8無菌磷酸鹽緩沖液(用于腸溶制劑)或PH7.6無菌磷酸鹽緩沖液(用于結(jié)腸溶制劑)至100ml,置45℃水浴中，振搖，使溶解，作為1:10的供試液。含抑菌作用。取低稀釋級供試液(原液或1:10的供試液)2份，每份各1ml,分別注入5個或5個以上平皿中(每皿0.2ml或<0.2ml),每個平皿傾注培養(yǎng)基約15ml,混勻，凝固后，倒置培養(yǎng)，按每1ml分注的平皿點計菌落數(shù)之和計數(shù)，即為每1ml的菌落數(shù)，共得2組數(shù)據(jù)，再以2組數(shù)的平均數(shù)乘以稀釋倍數(shù)的值匯報菌數(shù)。.8供試液的制備若需用水浴加溫時，溫度不應(yīng)超過45℃,時間為30min。文獻(xiàn)類型操作規(guī)程(SOP)文獻(xiàn)編號編訂根據(jù)替代文獻(xiàn)供試液的梯度稀釋(10倍遞增稀釋法).1取3或4支滅菌試管，分別加入9mlpH7.0無菌氯化鈉-蛋白胨緩沖液作為稀釋劑。.2另取1支1ml滅菌吸管，右手執(zhí)管插入1:10(1級)均勻供試液內(nèi)不低于液面2.5cm,反復(fù)吸吹約10次，吸液時，先吸至高于吸管上部刻度少許，然后提起吸管，貼與容器內(nèi)壁，調(diào)整液量至1ml刻度，左手執(zhí)裝有9mlpH7.0無菌氯化鈉-蛋白胨緩沖液的試管并將塞打開，傾斜，將吸管移至第2級稀釋管的內(nèi)壁近液面處(勿接觸液面),緩慢地放出所有供試液(吸管內(nèi)應(yīng)無黏附或殘留液體),混勻，即為1:100供試液(2級)。以此類推，根據(jù)供試品污染程度，可稀釋至1:10、1:10?等合適稀釋級(3~4級)。每遞增1稀釋級，必須用另一支吸管。細(xì)菌程度檢測使用營養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基，標(biāo)識符號為X;霉菌或霉玫瑰紅鈉瓊脂培養(yǎng)基，標(biāo)識符號為M;酵母菌程度檢測使用酵母浸瓊脂培養(yǎng)基，標(biāo)識符號為J。在供試液梯度稀釋的同步，以該稀釋級吸管吸取該稀釋級供試液各1ml至每個事先準(zhǔn)待各級稀釋液注皿完畢后，用1支1ml吸管同法吸取稀釋劑(H7.0無菌氯化鈉-蛋白胨緩沖液)各1ml,分別注入平皿中，每一種培養(yǎng)基分別注2個平皿作為陰性對照。文獻(xiàn)類型操作規(guī)程(SOP)文獻(xiàn)編號編訂根據(jù)替代文獻(xiàn).1將預(yù)先配制好的微生物程度檢查的培養(yǎng)基(營養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基、玫瑰紅鈉瓊脂培養(yǎng)基、YPD瓊脂培養(yǎng)基)溶化，冷至約45℃時，傾注上述各個平皿約15ml,以順時針或逆時針.3為了防止菌落蔓延生長，可將已凝固的瓊脂培養(yǎng)基平皿開蓋，倒置斜放在操作平臺上，開機(jī)1~2hr后合蓋，放入培養(yǎng)箱培養(yǎng)。培養(yǎng).1一般細(xì)菌計數(shù)平板倒置于30~35℃培養(yǎng)箱中，培養(yǎng)3天(72hr)。.2霉菌、酵母菌計數(shù)平板倒置于23~28℃培養(yǎng)箱中，培養(yǎng)5天(120hr)。.1一般將平板置于菌落計數(shù)器上或從平板的背面直接以肉眼點計，以透射光襯以暗色.2供試品稀釋液常具有不溶性原料和輔料，培養(yǎng)基注皿后也也許產(chǎn)生沉淀，通過培養(yǎng)作時將合適稀釋級的供試液多增長注皿1~2個，注皿后不經(jīng)培養(yǎng)而放置于冰箱(勿結(jié)凍).3若平板上有2個或2個以上菌落重疊，則在肉眼可辨別時仍以2個或2個以上菌落計一種菌落計數(shù)；但若鏈、片上出現(xiàn)性狀與鏈(片)狀菌落不一樣的可辨菌落時，仍應(yīng)分.4若各稀釋級2個平板菌落的平均數(shù)在15個以上，同稀釋級二平板菌落數(shù)相差1倍時，該稀釋級菌落數(shù)不得作為計數(shù)根據(jù)；當(dāng)2個平板菌落均數(shù)在15(含15)如下時，兩個平板菌落數(shù)的差值容許范圍為0~4、1~7、2~~9、3~~10、4~12、5~~14、6~15、7~17、.6在3天點計細(xì)菌、5天點計霉菌或酵母菌時，假如菌落極小，不易辨計，可延長培養(yǎng)時間至7天，再點計菌落數(shù)。文獻(xiàn)類型操作規(guī)程(SOP)文獻(xiàn)編號編訂根據(jù)替代文獻(xiàn)細(xì)菌、酵母菌宜選用平均菌落數(shù)不不小于300cfu、霉菌宜選用平均菌落數(shù)不不小于100cfu的稀釋級，作為菌數(shù)匯報(取兩位有效數(shù)字)的根據(jù)。以最高的平均菌落數(shù)乘以稀釋倍數(shù)的值匯報1g、1ml或10cm3供試品中所含的菌數(shù)。假如各稀釋級的平板均無菌落生長，或僅最低稀釋級的平板有菌落生長，但平均菌落數(shù)不不小于1時，則以<1乘以文獻(xiàn)類型操作規(guī)程(SOP)文獻(xiàn)編號編訂根據(jù)替代文獻(xiàn)附表：細(xì)菌、霉菌和酵母菌形態(tài)特性比較(營養(yǎng)瓊脂以及玫瑰紅鈉瓊脂平板)細(xì)菌霉菌酵母菌菌落大小差異很大，在同一尖大小至不小于10mm菌落一般較大，也有細(xì)小的菌落。在同一平板上生長的菌落大小有時不一致多數(shù)直徑為1~2mm,在同一平板上生長的菌落大小有時不一致態(tài)多樣，小而突起或大而扁平多為圓形，有的蔓延生長為無定形培養(yǎng)基表面生長者多為員形，內(nèi)層生長者為圓形、鐵餅、紡錘或三角形色澤白、灰白或無色也有淡褐、淡黃以及淡紅色。菌落正背面顏色相似小菌落灰白，大菌落形成孢子后顏色多不一樣乳白或粉紅色多見，在同一平板上色調(diào)較同一透明度透明或不透明小菌落半透明有明顯折光性，大菌落不透明透明較差整潔或不整潔，有低倍鏡下一般見不到邊緣菌絲體構(gòu)成多呈放