木棉花提取物乳膏的制備與質(zhì)量評價

木棉花提取物乳膏的制備與質(zhì)量評價【摘要】目的：以木棉花提取物為主要功效成分，制備具有抑菌抗炎、抗氧化、美白作用的乳膏，并對其進(jìn)行質(zhì)量評價。方法：通過DPPH法、水楊酸法對木棉花提取物進(jìn)行抗氧化功效評價，通過酪氨酸酶抑制實(shí)驗(yàn)進(jìn)行美白功效評價，綜合確定其在配方中的用量；通過控制變量法確定油脂、乳化劑和增稠劑用量；以外觀、pH值、粘度、保濕率、穩(wěn)定性對乳膏進(jìn)行質(zhì)量評價；通過控制變量法確定乳膏的最大載藥量；通過雞胚絨毛尿囊膜試驗(yàn)、人體斑貼試驗(yàn)對乳膏進(jìn)行刺激性評價。結(jié)果：木棉花提取物對酪氨酸酶的抑制率為47.64%，對DPPH自由基、羥自由基的清除率分別為73.82%、80.58%；油脂總用量為20%，乳化劑的用量為2.5%和增稠劑的用量為5%；最大載藥量為10%；木棉花提取物乳膏外觀均勻細(xì)膩，pH為6.73，粘度為3514mPa·s，保濕率為60.54%。結(jié)論：木棉花提取物乳膏質(zhì)地細(xì)膩、理化性質(zhì)穩(wěn)定，對雞胚絨毛尿囊膜和人體皮膚無刺激，具有抗氧化、美白效果?！娟P(guān)鍵詞】木棉花提取物；抗氧化性；乳膏；配方設(shè)計；質(zhì)量評價PreparationandQualityEvaluationofKapokExtractCream[Abstract]Objective:Withkapokextractasthemaineffectiveingredient,thecreamwithanti-inflammatory,anti-oxidationandwhiteningeffectsisprepared,anditsqualityisevaluated.Methods:TheantioxidantefficacyofkapokextractisevaluatedbyDPPHandsalicylicacidmethodandtyrosinaseinhibitionexperimenttocomprehensivelydeterminethedosageintheformula;Thedosageofoil,emulsifierandthickeningagentaredeterminedbycontrollingvariablemethod.Results:Theinhibitionrateofkapokextracttotyrosinaseis47.64%;TheclearancerateofDPPHradicalandhydroxylradicalis73.82%and80.58%respectively;Thetotalamountofoilis20%,theamountofemulsifieris2.5%andthatofthickeningagentis5%;Themaximumdrugloadis10%;Theappearanceofkapokextractcreamisuniformanddelicate,thepHis6.73,theviscosityis3514mPa·s,andthemoisturizingrateis60.54%.Conclusion:Kapokextractcreamhasfinetexture,stablephysicalandchemicalproperties,noirritationtochickenembryovillallantoicmembraneandhumanskin,andhasantioxidantandwhiteningeffect.[Keywords]KapokextractOxidationresistanceCreamFormuladesignQualityevaluation目錄1前言 前言1.1木棉花提取物的性質(zhì)特點(diǎn)及研究現(xiàn)狀木棉花(GossampiniFlos)，為木棉科植物木棉Gossampinusmalabarica(DC.)Merr.的干燥花[1]。木棉花性涼，味甘、淡，無毒，歸大腸經(jīng)，功效為清熱利濕、涼血、解毒，具有抗氧化、改善肝損傷、抗腫瘤、抗炎、抗菌、降血糖、降脂、抗病毒等活性，主治泄瀉、咳血、血崩、金瘡出血、瘡毒、濕疹等，被廣泛應(yīng)用于中藥方劑、中成藥、涼茶和藥膳等[2,3]。木棉花總提取液中含有豐富的總黃酮、多糖、紅色素、超氧化物歧化酶等化合物[4]。國內(nèi)外學(xué)者從木棉花提取液中分離、鑒定出約73種單體化合物，其中包括31種黃酮類化合物[5-8]，6種脂肪酸類化合物，還有12種苯丙素類、3種酰胺類成分和11種其他化合物[6,9]。其中木棉花中黃酮的含量為6%～9.37%，具有抗炎、抗菌、抗過敏等多種功能作用，在黃酮類化合物研究中具有重要意義。盡管活性顯著，但至今木棉花資源并沒有得到充分的利用[10,11]。木棉花提取物作用廣泛，目前國內(nèi)外主要研究其抑菌抗炎、抗氧化以及美白等方面。AkhtarN等發(fā)現(xiàn)木棉花提取物對革蘭氏陰性菌如大腸桿菌、傷寒沙門氏菌等和革蘭氏陽性菌如枯草芽孢桿菌、金黃色葡萄球菌等具有廣譜抗菌作用，其中金黃色葡萄球菌為最敏感的菌株，而傷寒沙門氏菌為最耐藥的菌株[12]。鄭必勝等人通過抑菌圈實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)當(dāng)木棉花黃酮質(zhì)量濃度達(dá)到12.5g/L時，對表皮葡萄球菌表現(xiàn)為高度敏感，而對痤瘡丙酸桿菌表現(xiàn)為中度敏感，且此抑菌功效表現(xiàn)為劑量依賴效應(yīng)[13]。包文龍等人發(fā)現(xiàn)乙醇提取物和總黃酮提取物對酪氨酸酶的抑制率高達(dá)78%和91%[14]。Yu等通過發(fā)現(xiàn)所有的木棉花提取物都具有較好的抗氧化性，各提取物中的總黃酮含量越高，則抗氧化作用越強(qiáng)[15]。木棉花作為一種天然植物和中草藥，性質(zhì)較溫和安全，抗菌機(jī)制廣譜、多樣，較抗生素不易形成耐藥性，且可以通過抑制酪氨酸酶改善痤瘡色素沉著，發(fā)揮抗氧化、抗炎等活性，因此在治療痤瘡方面顯示出其獨(dú)特的優(yōu)勢[14]。1.2乳膏的性質(zhì)特點(diǎn)及研究現(xiàn)狀乳膏劑系指原料藥物溶解或分散于乳狀液型基質(zhì)中形成的均勻半固體制劑。乳膏劑因基質(zhì)種類的不同，可分為水包油型乳膏和油包水型乳膏。乳膏劑基質(zhì)要求均勻、細(xì)膩，具有恰當(dāng)?shù)酿こ矶龋蝗诨?，黏稠度隨季節(jié)變化很小，涂于皮膚或黏膜上無刺激性。除基質(zhì)外，乳膏劑的制備還應(yīng)考慮劑型的特點(diǎn)、原料藥物的性質(zhì)，以及成品療效、穩(wěn)定性和安全性，可根據(jù)需要加入增稠劑、抗氧劑、保濕劑、抑菌劑和透皮促進(jìn)劑等[15]。乳膏劑使用方便、易于攜帶和貯存、性質(zhì)穩(wěn)定，還具有保護(hù)、柔潤皮膚，保持皮膚水分的功能，能較快通過皮膚給藥發(fā)揮療效、作用強(qiáng)，作用時間長[16]。相對于其他劑型，乳膏劑不阻礙皮膚表面上的分泌物的分泌和水分蒸發(fā)，對皮膚的正常功能幾乎無影響，可以避免藥物刺激、損傷胃腸道，減少進(jìn)入體循環(huán)的藥物量從而大大降低不良反應(yīng)，同時還可提高作用器官、細(xì)胞、靶點(diǎn)等的藥物濃度。可被直接涂抹于面部上的特定部位，對痤瘡、色斑等疾病也有較針對性地局部給藥[17]。1.3研究的目的與意義本課題旨在設(shè)計以木棉花提取物為主要成分，結(jié)合肉豆蔻酸異丙酯、辛癸酸甘油酯、核桃油以及橄欖油和乳化劑吐溫-80、單硬脂酸甘油酯，并以甘油、泛醇、吡咯烷酮羧酸鈉、燕麥葡聚糖為保濕體系，具有抑菌抗炎、抗氧化、美白功效且對人體溫和、無刺激的乳膏。1.4研究內(nèi)容與方法首先通過DPPH法、水楊酸法對木棉花提取物進(jìn)行抗氧化能力測定以及酪氨酸酶抑制率實(shí)驗(yàn)對木棉花提取物進(jìn)行美白能力測定，確定其在配方中的最佳添加量。以油膩性、細(xì)膩性、涂展性為指標(biāo)，通過總分來確定油脂用量；以細(xì)膩性、柔順性和流動性為評價指標(biāo)確定乳化劑的用量；以粘稠度、涂展性、粘起性和清爽性為評價指標(biāo)確定增稠劑的用量；通過體外稱重法篩選保濕劑的種類及正交設(shè)計試驗(yàn)優(yōu)化保濕體系的最佳配比；再以顏色、細(xì)膩性和離心穩(wěn)定性篩選乳膏的最大載藥量；通過感官評價、粘度測定、pH值測定、保濕率測定、穩(wěn)定性試驗(yàn)、雞胚絨毛尿囊膜實(shí)驗(yàn)和人體皮膚斑貼試驗(yàn)對木棉花提取物乳膏進(jìn)行質(zhì)量評價。2實(shí)驗(yàn)部分2.1主要試劑與儀器2.1.1實(shí)驗(yàn)試劑表1主要試劑試劑名稱級別生產(chǎn)廠家木棉花提取物食品級西安八脈興生物科技有限公司橄欖油化妝品級廣州珠烽進(jìn)出口貿(mào)易有限公司核桃油化妝品級江西金源天然香料有限公司辛癸酸甘油酯（GTCC）化妝品級廣州凱潮貿(mào)易有限公司肉豆蔻酸異丙酯（IPM）化妝品級廣州市宜生貿(mào)易有限公司吐溫-80化學(xué)純天津市富宇精細(xì)化工有限公司單硬脂酸甘油酯食品級廣州燦博化工有限公司十六十八醇化妝品級廣州佰宇生物科技甘油分析純廣東光華化學(xué)廠有限公司燕麥葡聚糖化妝品級廣州美懿生物科技有限公司吡絡(luò)烷酮羧酸鈉化妝品級山東優(yōu)索化工科技有限公司泛醇分析純廣州瑄燁生物有限公司酪氨酸酶優(yōu)級純北京華邁科生物技術(shù)有限責(zé)任公司酪氨酸分析純山東齊魯生物科技1,1-二苯基-2-三硝基苯肼(DPPH)分析純德州潤昕實(shí)驗(yàn)儀器有限公司水楊酸分析純天津市登峰化學(xué)試劑廠硫酸亞鐵分析純天津市登峰化學(xué)試劑廠30%過氧化氫分析純廣州化學(xué)試劑廠尼泊金甲酯分析純天津市科密歐化學(xué)試劑有限公司尼泊金丙酯分析純天津市科密歐化學(xué)試劑有限公司2.1.2實(shí)驗(yàn)儀器表2主要儀器儀器名稱型號生產(chǎn)廠家紫外可見分光光度計L8上海天美科學(xué)儀器有限公司恒溫水浴鍋HWS26上海一恒科學(xué)儀器有限公司旋轉(zhuǎn)式數(shù)字粘度計NDJ-8S上海昌吉地質(zhì)儀器有限公司電子分析天平BP211D德國賽多利斯離心機(jī)TDL-80-2B上海安亭科學(xué)儀器廠孵化器HHD32S豪華德電器制造源頭廠家數(shù)顯pH計PHS-31上海儀電科學(xué)儀器有限公司2.2DPPH自由基清除率的測定（1）試劑準(zhǔn)備0.12mg/mLDPPH乙醇溶液：稱取6.0mg的DPPH粉末于燒杯中，再用95%乙醇溶解，攪拌均勻，定容至50mL，現(xiàn)配現(xiàn)用。木棉花提取物溶液：分別稱取5.0、10.0、30.0、50.0、100.0、150.0、200.0、300.0mg的木棉花提取物粉末，用去離子水溶解，每個濃度溶液分別配制10mL，配制成濃度為0.5、1.0、3.0、5.0、10.0、15.0、20.0、30.0mg/mL的木棉花提取物溶液。（2）實(shí)驗(yàn)步驟在具塞刻度試管中加入95%乙醇和不同濃度的木棉花提取物溶液，再加DPPH溶液，配制出0號、1號、2號和3號溶液。使各反應(yīng)組分混合均勻，在室溫下避光反應(yīng)30min，用95%乙醇溶液作為空白對照，在波長517nm下依次測定A0、A1、A2、A3，加樣組分如表3所示。每組溶液平行測定3次，記錄數(shù)據(jù)，根據(jù)公式（1）計算木棉花提取物對DPPH自由基的清除率。表3清除DPPH自由基反應(yīng)體系組成表實(shí)驗(yàn)組分A0A1A2A3樣品溶液/mL1100去離子水mL2300DPPH乙醇溶液/mL101095%乙醇/mL0034DPPH自由基清除率（%）=公式（1）式中:A0——木棉花提取物溶液與DPPH溶液的吸光度A1——木棉花提取物溶液的吸光度A2——DPPH溶液的吸光度A3——95%乙醇的吸光度2.3羥自由基清除率的測定（1）試劑準(zhǔn)備6.0mM硫酸亞鐵（FeSO4）溶液：用水溶解0.0456gFeSO4固體于燒杯中，再定容至50mL，制得6.0mmol/LFeSO4溶液。6.0mM過氧化氫（H2O2）溶液：用水稀釋0.0612g30%H2O2溶液，再定容至100mL，制得6.0mMH2O2溶液。6.0mM水楊酸溶液：用無水乙醇溶液溶解0.0414g水楊酸固體，定容至50mL，制得6.0mmol/L水楊酸溶液。木棉花提取物水溶液：分別稱取0.01、0.05、0.10、0.15、0.20、0.30、0.40g的木棉花提取物粉末，用去離子水溶解，每個濃度溶液分別配制10mL，配制成濃度為1、5、10、15、20、30、40mg/mL的木棉花提取物溶液。（2）實(shí)驗(yàn)步驟在具塞刻度試管中先加入水楊酸溶液、FeSO4溶液和不同濃度的木棉花提取物溶液，再加入H2O2溶液混合搖勻，配制出0號、1號、2號溶液?；旌暇鶆蚝笤?7℃下水浴反應(yīng)30min。用無水乙醇作為空白背景，在510nm下平行測定3次A0、A1、A2，加樣組分如表4所示。記錄數(shù)據(jù)，根據(jù)公式（2）計算木棉花提取物對羥自由基的清除率。表4清除羥自由基反應(yīng)體系組成表實(shí)驗(yàn)組分A0A1A2樣品溶液/mL110FeSO4溶液/mL111水楊酸溶液/mL111H2O2溶液/mL101無水乙醇/mL011羥自由基清除率（%）=公式（2）式中：A0——木棉花提取物溶液與羥自由基體系的吸光度A1——木棉花提取物溶液的吸光度A2——羥自由基體系的吸光度2.4酪氨酸酶抑制率的測定（1）試劑準(zhǔn)備PBS（pH=6.8）緩沖液：稱取磷酸二氫鈉1.7943g和磷酸氫二鈉7.1628g分別用去離子水溶解好并且定容到100mL的容量瓶中，取上述配制好的兩種溶液各100mL,用去離子水定容到500mL，配制得到了pH=6.8的PBS緩沖液。0.05%L-酪氨酸溶液：稱取0.05g的L-酪氨酸先用35mL上述配制的0.1mol/LHCl，再加入65mLPBS（pH=6.8）緩沖液。200U/mL酪氨酸酶溶液：精確稱取5.0mg酪氨酸酶用PBS（pH=6.8）緩沖液定容到25mL的容量瓶。木棉花提取物溶液：分別稱取0.01、0.05、0.10、0.15、0.20、0.25、0.30g的木棉花提取物，用去離子水定容到10mL容量瓶中，得到木棉花提取物水溶液濃度為1、5、10、15、20、25、30mg/mL。（2）實(shí)驗(yàn)步驟向4支具塞刻度試管中加入L-酪氨酸溶液、PBS（pH=6.8）緩沖液以及木棉花提取物水溶液，在37°C恒溫水浴10min，最后在向試管中加入酪氨酸酶溶液于37°C恒溫水浴30min，于波長475nm處測定吸光度，加樣組分如表5所示，按照公式（3）計算木棉花提取物對酪氨酸酶的抑制率。表5木棉花對酪氨酸酶抑制的反應(yīng)體系組成實(shí)驗(yàn)組分A0A1A2A3樣品溶液/mL0011L-酪氨酸溶液/mL1111PBS緩沖液/mL2312酪氨酸酶/mL1010酪氨酸酶的抑制率（%）=QUOTEQUOTE公式（3）式中：A0——酪氨酸酶和酪氨酸反應(yīng)的吸光度A1——酪氨酸酶的吸光度A2——木棉花提取物、酪氨酸酶和酪氨酸反應(yīng)的吸光度A3——木棉花提取物和酪氨酸的吸光度2.5油脂用量的確定固定乳化劑吐溫-80、單硬脂酸甘油酯的配比和用量，選用對皮膚親和性好的IPM、GTCC、核桃油和橄欖油作為油脂的成分，并固定IPM、GTCC、核桃油和橄欖油的比例為2∶1∶1∶1，油脂的總量分別為18%、20%、22%、24%以及26%的占比，配制成乳膏。以乳膏使用過程中的涂展性（40分）、細(xì)膩性（30分）、涂展性（30分）評分的總分來選擇油脂的最佳添加總量，油脂用量確定的具體評分方法如表6所示。（1）涂展性：樣品涂抹10圈后涂展的難易程度（2）細(xì)膩性：樣品的均勻程度（3）油膩性：樣品涂抹在手上的油膩感，清洗難易程度表6油脂用量確定的評價指標(biāo)評價指標(biāo)評分方法涂展性（40分）涂抹后難展開1～8涂抹后較難展開11～25涂抹后易展開31～40細(xì)膩性（30分）不均勻、氣泡多1～10較均勻、氣泡少11～20均勻，無氣泡21～30油膩性（30分）有油膩感、難清洗1～10油膩感輕、較易清洗11～20無油膩感，易清洗21～302.6乳化劑用量的確定固定IPM、GTCC、核桃油以及橄欖油的配比及總量，選用O/W型乳化能力較好的吐溫-80、單硬脂酸甘油酯作為乳膏的乳化劑，并固定吐溫-80、單硬脂酸甘油酯的比例為3∶2，復(fù)配乳化劑的總量分別為2.0%、2.5%、3.0%、3.5%以及4.0%的占比，配制成乳膏。以乳膏使用過程中的細(xì)膩性（50分）、柔順性（30分）、流動性（20分）評分的總分來選擇乳化劑的最佳添加總量，乳化劑用量確定的具體評分方法如表7所示。細(xì)膩性：樣品的均勻程度、有無氣泡等情況柔順性：樣品涂展在皮膚的柔順感流動性：樣品沾在皮膚上的流動情況表7乳化劑用量確定的評價指標(biāo)評價指標(biāo)評分表細(xì)膩性（50分）粗糙、氣泡多1～15不粗糙、氣泡少20～35細(xì)膩、無氣泡38～50柔順性（30分）質(zhì)地厚重1～10質(zhì)地較輕柔11～20質(zhì)地輕柔21～30流動性（20分）流動過快/過慢1～5流動較快/較慢8～13流動適中15～202.7增稠劑用量的確定固定油脂IPM、GTCC、核桃油以及橄欖油和乳化劑吐溫-80、單硬脂酸甘油酯的配比及總量，選用增稠效果好、助乳膏穩(wěn)定的十六十八醇作為乳膏的增稠劑，使十六十八醇在乳膏中占比為2%、3%、4%、5%、6%，配制成乳膏。以乳膏使用過程中的粘稠度（40分）、涂展性（30分）、粘起性（15分）、清爽性（15分）的評價指標(biāo)來進(jìn)行評分確定十六十八醇的最佳用量，其用量確定的具體評分方法如表8所示。粘稠度：樣品在皮膚上的粘稠感涂展性：樣品涂抹在皮膚的均勻程度和難易程度粘起性：用玻璃棒粘起樣品的難易程度清爽性：樣品涂抹在皮膚上的清爽程度表8增稠劑用量確定的評價指標(biāo)評價指標(biāo)方法粘稠度（40分）太稠或太稀1～10較稠或較稀15～25粘稠適中30～40涂展性（30分）不均勻、難涂展1～10較均勻、涂展一般11～20均勻、易涂展21～30粘起性（15分）粘起困難/容易1～5粘起較困難/容易6～10粘起適中11～15清爽性黏膩較黏膩不黏膩（15分）1～56～1011～152.8保濕體系的篩選2.8.1保濕劑種類及用量的篩選準(zhǔn)確稱取甘油、泛醇、燕麥葡聚糖、吡絡(luò)烷酮羧酸鈉等各0.2g至干燥恒重的25mm×25mm稱量瓶中，均勻鋪散后放置在盛有飽和硫酸銨溶液的玻璃干燥缸（相對濕度RH為81%）中，分別記錄放置4h、12h、24h時稱量瓶的重量。根據(jù)公式（4）計算其吸濕率。吸濕率（%）=公式（4）式中：M0——干燥至恒重的稱量瓶重量（g）M1——恒濕放置前稱量瓶與保濕劑的總重量（g）M2——恒濕放置后稱量瓶與保濕劑的總重量（g）2.8.2正交設(shè)計試驗(yàn)優(yōu)化保濕劑的配比根據(jù)L9（34）正交設(shè)計因素水平表，選用甘油（A）、泛醇（B）、吡絡(luò)烷酮羧酸鈉（C）、燕麥葡聚糖（D）4種保濕劑作為試驗(yàn)因素，每個因素均設(shè)置3個水平，正交設(shè)計試驗(yàn)優(yōu)化保濕劑配比用量如表9所示。以RH為43%，恒濕放置4h的保濕率作為評價指標(biāo)，根據(jù)其平均值，極差分析各因素對保濕率的影響程度，篩選出4種保濕劑的最佳配比。按表9配制保濕劑復(fù)配水溶液，在干燥至恒重的2.5cm×7.5cm玻璃板上貼一層透氣型壓敏膠帶，將100μL保濕劑復(fù)配溶液涂布在貼有透氣型壓敏膠帶的玻璃板上，共9組，每組保濕體系設(shè)置3個平行樣品，放進(jìn)盛有飽和碳酸鉀溶液（RH為43%）的干燥器中，放置4h后取出玻璃板稱量并記錄，根據(jù)公式（5）計算各復(fù)配保濕劑水溶液的保濕率。保濕率（%）=公式（5）式中：M0——貼有透氣型壓敏膠帶玻璃板的總重量（g）M1——恒濕放置前貼有透氣型壓敏膠帶玻璃板與保濕劑的總重量（g）M2——恒濕放置后貼有透氣型壓敏膠帶玻璃板與保濕劑的總重量（g）表9L9（34）正交設(shè)計因素水平表水平A甘油（%）B泛醇（%）C吡咯烷酮羧酸鈉（%）D燕麥葡聚糖（%）13.001.001.000.8024.002.002.001.0035.003.003.001.202.9木棉花提取物乳膏的質(zhì)量評價2.9.1感官評價在室內(nèi)明亮柔和光線下觀察木棉花提取物乳膏，并對木棉花提取物乳膏的外觀形態(tài)、氣味、涂展性、細(xì)膩性、粘起性、油膩性、流動性等作出評價。2.9.2pH值測定取3個批號的木棉花提取物乳膏于燒杯中，每份樣品稱取5g，加入去離子水，配成10%溶液，用pH計測定3個批號樣品的pH值，取其平均值。2.9.3粘度測定取3個批號的木棉花提取物乳膏于燒杯中，選擇適當(dāng)?shù)霓D(zhuǎn)子及轉(zhuǎn)速用旋轉(zhuǎn)粘度計測定3個批號樣品的粘度，取其平均值。2.9.4保濕率評價取適量干燥至恒重的木棉花提取物乳膏樣品，均勻涂布在玻璃板上，放入恒濕（RH為43%）的密封干燥器中，經(jīng)放置12h后取出玻璃板精密稱量并記錄，平行測定3個批號，根據(jù)公式（6）計算木棉花提取物乳膏的保濕率。保濕率（%）=公式（6）式中：M0——貼有透氣型壓敏膠帶玻璃板的總重量（g）M1——恒濕放置前貼有透氣型壓敏膠帶玻璃板與保濕劑的總重量（g）M2——恒濕放置后貼有透氣型壓敏膠帶玻璃板與保濕劑的總重量（g）2.9.5穩(wěn)定性評價（1）離心穩(wěn)定性取3支干燥潔凈的離心管分別添加3個批號木棉花提取物乳膏，放入離心機(jī)后在3000r/min轉(zhuǎn)速下離心30min后取出，將3個批號的木棉花提取物乳膏與未離心的樣品進(jìn)行比較，觀察3個批號樣品外觀的變化。（2）耐寒穩(wěn)定性取3個批號木棉花提取物乳膏，分別添加到3支干燥潔凈的離心管中，注入量約占離心管2/3高度，置于-5℃的恒溫條件中24h，將離心管取出恢復(fù)室溫后，分別將3個批號的樣品與常溫放置的樣品進(jìn)行比較，觀察樣品外觀、涂展性、黏稠度、流動性的變化。（3）耐熱穩(wěn)定性取3個批號木棉花提取物乳膏，分別添加到3支干燥潔凈的離心管中，注入量約占離心管2/3高度，置于40℃的恒溫條件中24h，將離心管取出恢復(fù)室溫后，分別將3個批號的樣品與常溫放置的樣品進(jìn)行比較，觀察樣品外觀、涂展性、黏稠度、流動性的變化。（4）耐熱耐寒交替實(shí)驗(yàn)取3個批號木棉花提取物乳膏，分別通過上述的耐熱實(shí)驗(yàn)步驟，取出后又進(jìn)入到上述的耐寒實(shí)驗(yàn)，反復(fù)3次后取出3個樣品與常溫放置的樣品進(jìn)行比較，觀察樣品外觀、涂展性、黏稠度、流動性的變化。2.10最大載藥量的確定固定油脂IPM、GTCC、核桃油以及橄欖油、乳化劑吐溫-80、單硬脂酸甘油酯的總量以及增稠劑十六十八醇的用量，木棉花提取物用量在乳膏中占比為8%、9%、10%、11%，配制成乳膏，以乳膏的顏色、細(xì)膩性、3000r/min離心30min的離心穩(wěn)定性為指標(biāo)確定出木棉花提取物乳膏的最大載藥量。2.11雞胚絨毛尿囊膜實(shí)驗(yàn)將7d天以內(nèi)的受精雞胚于37.8℃（±0.5℃）、相對濕度55%～70%的培養(yǎng)箱中培養(yǎng)9d。在蛋殼的表面畫出氣室位置，再對應(yīng)大小的蛋殼剝?nèi)馐?，露出白色的蛋膜，滴?.3mL0.9%氯化鈉溶液充分濕潤蛋膜后，再用鑷子小心斯去內(nèi)膜。參考SN/T2329-2009《化妝品眼刺激性／腐蝕性的雞胚絨毛尿囊膜試驗(yàn)》[19]，采用終點(diǎn)評價法，取0.3ml木棉花提取物乳膏直接涂布使其與CAM膜接觸。接觸3min后，用生理鹽水輕輕沖洗CAM膜上的受試物，沖洗操作可能很快將CAM膜上輕度的出血變化掩蓋，故應(yīng)在30s沖洗完成時觀察結(jié)果，觀察每種毒性效應(yīng)變化的程度，平行6次。采用反應(yīng)時間法，以質(zhì)量分?jǐn)?shù)為0.9%的氯化鈉溶液作為陰性對照，以0.1mol/L氫氧化鈉溶液作為陽性對照，設(shè)置對照組。根據(jù)公式（7）計算木棉花提取物乳膏樣品終點(diǎn)評分（ES），根據(jù)公式（8）計算對照組刺激評分（IS）。并根據(jù)表10評價木棉花提取物乳膏樣品的刺激性，根據(jù)表11評價對照組的刺激性，結(jié)果保留小數(shù)點(diǎn)后2位：ES=公式（7）IS=公式（8）式中：secH——CAM出現(xiàn)出血的平均時間（s）secL——CAM出現(xiàn)血管融解的平均時間（s）secC——CAM出現(xiàn)凝血的平均時間（s）表10終點(diǎn)評分法結(jié)果評價刺激評分刺激性分類ES＜12無/輕刺激性12≤ES＜16中度刺激性16≤ES強(qiáng)刺激性/腐蝕性表11刺激評分法結(jié)果評價刺激評分刺激性分類IS＜1無刺激性1≤IS＜5輕刺激性5≤IS＜10中度刺激性10≤IS強(qiáng)刺激性/腐蝕性2.12人體皮膚斑貼試驗(yàn)選取志愿者30人，符合受試者入選標(biāo)準(zhǔn)。選取志愿者左手臂內(nèi)側(cè)為受試部位，皮膚分為兩部分，一部分為空白對照，另一部分用膠帶貼上含有0.1g木棉花提取物乳膏的斑試器，持續(xù)24h，分別于去除斑貼器1h、12h、24h后觀察受試部分皮膚狀態(tài)，根據(jù)《化妝品安全技術(shù)規(guī)范2015修改版》中反應(yīng)標(biāo)準(zhǔn)記錄實(shí)驗(yàn)結(jié)果。表12皮膚封閉型斑貼實(shí)驗(yàn)皮膚反應(yīng)分級標(biāo)準(zhǔn)反應(yīng)程度評分等級皮膚反應(yīng)-0陰性反應(yīng)±1可疑反應(yīng)，僅有微弱紅斑+2弱陽性反應(yīng)；紅斑、浸潤、水腫、可有丘疹++3強(qiáng)陽性反應(yīng)；紅斑、浸潤、水腫、丘疹、皰疹+++4極強(qiáng)陽性反應(yīng)；明顯紅斑、嚴(yán)重浸潤、水腫、融合性皰疹；反應(yīng)可超出受試區(qū)3結(jié)果與討論3.1DPPH自由基清除率的測定結(jié)果木棉花提取物對DPPH自由基的清除結(jié)果如圖1所示，當(dāng)木棉花提取物濃度低于20.0mg/mL時，木棉花提取物對DPPH自由基的清除率隨木棉花提取物濃度的增大而明顯增加，達(dá)到25mg/mL后趨于平緩。當(dāng)木棉花提取物濃度為30.0mg/mL（含量為3.0%）時，木棉花提取物對DPPH自由基清除率為73.82%，表明木棉花提取物對DPPH自由基有一定的清除能力。圖1木棉花提取物對DPPH自由基的清除結(jié)果3.2羥自由基清除率的測定結(jié)果木棉花提取物對羥自由基的清除結(jié)果如圖2所示，當(dāng)濃度低于30mg/mL時，木棉花提取物對羥自由基的清除率隨木棉花提取物濃度的增大顯著增加，達(dá)到30mg/mL后羥自由基清除率變化不大。當(dāng)木棉花提取物濃度為40mg/mL（含量為4.0%）時，對羥自由基的清除率為80.58%，表明木棉花提取物對羥自由基有一定的清除功能。圖2木棉花提取物對羥自由基的清除結(jié)果3.3酪氨酸酶抑制率的測定結(jié)果木棉花提取物對酪氨酸酶抑制的結(jié)果如圖3所示，當(dāng)木棉花提取物濃度低于25mg/mL時，木棉花提取物對酪氨酸酶抑制率隨木棉花提取物濃度的增大而增加，達(dá)到25mg/mL后趨于平緩。當(dāng)木棉花提取物濃度達(dá)到30mg/mL（含量為3.0%）時，對酪氨酸酶的抑制率為47.64%，表明木棉花提取物對酪氨酸酶有一定的抑制能力。綜合DPPH自由基清除實(shí)驗(yàn)、羥自由基清除實(shí)驗(yàn)和酪氨酸酶抑制率實(shí)驗(yàn)考慮，木棉花提取物在乳膏中的添加量為4.0%。圖3木棉花提取物對酪氨酸酶抑制的結(jié)果3.4油脂用量的確定結(jié)果油脂用量確定的結(jié)果如表13所示，固定量的乳化劑吐溫-80和單硬脂酸甘油酯，當(dāng)選用IPM為8.0%、GTCC為4.0%、核桃油為4.0%以及橄欖油為4.0%的復(fù)合油脂，即油脂總用量為20%時，制備的乳膏基質(zhì)均勻細(xì)膩、無明顯氣泡，油膩感輕、易清洗以及涂抹10圈后易展開，因此乳膏中選用油脂總用量為20%。表13油脂用量確定的結(jié)果油脂含量油膩性細(xì)膩性涂展性總分18%2417226320%2323317722%2320236724%2216246226%181719553.5乳化劑用量的確定結(jié)果乳化劑用量確定的結(jié)果如表14所示，固定4種油脂IPM∶GTCC∶橄欖油∶核桃油=2∶1∶1∶1的總量為20%，并且固定乳化劑的比例為：吐溫-80∶單硬脂酸甘油酯=3∶2，當(dāng)乳化劑總用量為2.5%時，乳膏均勻細(xì)膩、無氣泡、無顆粒感，質(zhì)地輕柔、膚感好以及在皮膚的流動性適中，因此選擇乳化劑的用量為2.5%。表14乳化劑用量確定的結(jié)果含量細(xì)膩性柔順性流動性總分2.0%422213772.5%442316833.0%341916693.5%291613584.0%261512533.6增稠劑用量的確定結(jié)果增稠劑十六十八醇用量確定的結(jié)果如表15所示，固定4種油脂IPM∶GTCC∶橄欖油∶核桃油=2∶1∶1∶1的總量為20%，乳化劑吐溫-80∶單硬脂酸甘油酯=3∶2的總量為2.5%，當(dāng)十六十八醇用量達(dá)到5.0%時，乳膏粘稠度適中、不軟化、不結(jié)塊，用玻璃棒粘起程度適中、涂抹于皮膚易均勻展開、清爽不油膩，因此選擇乳化劑的用量為5.0%。表15增稠劑用量確定的結(jié)果含量粘稠度涂展性粘起性清爽性總分2.0%23211211673.0%31231213794.0%32211213785.0%33241213826.0%2222910633.7保濕體系的篩選結(jié)果3.7.1單一保濕劑的吸濕率測定結(jié)果甘油、燕麥葡聚糖、泛醇和吡咯烷酮羧酸鈉4種保濕劑在相對濕度為81%環(huán)境中的吸濕性能如圖4所示，4種保濕劑的吸濕性能大小順序?yàn)椋焊视?gt;泛醇>吡咯烷酮羧酸鈉>燕麥葡聚糖。圖44種保濕劑在80%濕度環(huán)境中放置不同時間的吸濕率3.7.2正交設(shè)計試驗(yàn)優(yōu)化3種保濕劑的配比結(jié)果正交設(shè)計試驗(yàn)優(yōu)化4種保濕劑結(jié)果如表16所示，4個因素的極差R值結(jié)果為：RA>RB>RC>RD，因此3個因素對保濕率的影響程度為：A>B>C>D，即4種保濕劑對保濕體系的影響程度為：甘油>泛醇>吡咯烷酮羧酸鈉>燕麥葡聚糖。根據(jù)Ki值結(jié)果，保濕體系的最優(yōu)組合為A3B2C2D2，即保濕體系為：甘油5.0%、泛醇2.0%、吡咯烷酮羧酸鈉2.0%、燕麥葡聚糖1.0%。表16L9（34）正交設(shè)計試驗(yàn)結(jié)果編號ABCD保濕率/%13.001.001.000.8047.0723.002.003.001.0050.1433.003.002.001.2051.4844.001.003.001.2048.2054.002.002.000.8053.1464.003.001.001.0052.3475.001.002.001.0054.4085.002.001.001.2056.5495.003.003.000.8055.23K149.5649.8951.9851.81K251.2353.2753.0152.29K355.3953.0251.1952.07R5.833.381.820.48注：A為甘油，B泛醇，C為吡咯烷酮羧酸鈉，D為燕麥葡聚糖經(jīng)實(shí)驗(yàn)結(jié)果驗(yàn)證，以A3B2C2D2為組合的保濕體系進(jìn)行3次平行實(shí)驗(yàn)所得保濕率分別為59.23%、60.18%、59.56%，平均保濕率為59.55%，保濕效果達(dá)到最優(yōu)，因此確定保濕體系為：甘油5.0%、泛醇2.0%、吡咯烷酮羧酸鈉2.0%、燕麥葡聚糖為1.0%。3.8木棉花提取物乳膏的配方及制備工藝通過上述實(shí)驗(yàn)，對油脂IPM、GTCC、橄欖油、核桃油和乳化劑吐溫-80、單硬脂酸甘油酯、增稠劑十六十八醇、木棉花提取物等成分確定了配比及用量，得到木棉花提取物乳膏的配方如表17所示。表17木棉花提取物乳膏的配方表相別序號原料名稱質(zhì)量分?jǐn)?shù)/%A相1IPM8.02GTCC4.03橄欖油4.04核桃油4.05吐溫-801.56單硬脂酸甘油酯1.07十六十八醇5.08尼泊金甲酯0.19尼泊金丙酯0.1B相10木棉花提取物4.0C相11甘油5.012泛醇2.013吡咯烷酮羧酸鈉2.014燕麥葡聚糖1.015去離子水To100制備工藝如下：首先用少量去離子水溶解好木棉花提取物，將其以水溶液形式存在。（1）A相各組分混合均勻并加熱至80℃；（2）用少量去離子水溶解C相混合組分，攪拌均勻；（3）C相緩慢加入A相，均質(zhì)5min，至體系均一；（4）在攪拌的同時，降溫至50℃左右，加入B相，攪拌均勻至完全冷卻。3.9木棉花提取物乳膏的質(zhì)量評價結(jié)果3.9.1感官評價在明亮柔和光線下觀察木棉花提取物乳膏，均勻細(xì)膩、無顆粒、無氣泡，有淡淡的植物清香；取適量木棉花提取物乳膏涂抹于皮膚，粘稠度適中、易涂展、無白條，涂布后清爽細(xì)膩且不油膩。3.9.2pH值測定測得3個批號的木棉花提取物乳膏pH值結(jié)果分別為6.73、6.75、6.70，平均pH為6.73。3.9.3粘度測定在2號轉(zhuǎn)子、6.0r/min轉(zhuǎn)速下測得3個批號木棉花提取物乳膏粘度分別為3548mPa·s、3481mPa·s、3513mPa·s，平均粘度為3514mPa·s。3.9.4保濕率評價在RH為43%、時間為4h的條件下，測得3個批號木棉花提取物乳膏的保濕率分別為60.35%、61.55%、59.44%，平均保濕率為60.45%，表明制備的木棉花提取物乳膏具有一定的保濕效果。3.9.5穩(wěn)定性評價（1）離心穩(wěn)定性3個批號的乳膏經(jīng)離心測試后均未發(fā)生明顯變化，沒有出現(xiàn)油水分離現(xiàn)象，也未曾出現(xiàn)分層、沉淀和乳液顏色變化等現(xiàn)象，表明木棉花提取物乳膏的離心穩(wěn)定性良好。（2）耐寒穩(wěn)定性3個批號木棉花提取物乳膏經(jīng)低溫測試恢復(fù)室溫后，均未發(fā)生明顯變化，未出現(xiàn)分層、變稀、沉淀現(xiàn)象，表明木棉花提取物乳膏的耐寒穩(wěn)定性良好。（3）耐熱穩(wěn)定性3個批號木棉花提取物乳膏經(jīng)高溫測試恢復(fù)室溫后，均未發(fā)生明顯變化，未出現(xiàn)分層、變稀、沉淀現(xiàn)象，表明木棉花提取物乳膏的耐熱穩(wěn)定性良好。（4）耐熱耐寒交替實(shí)驗(yàn)3個批號木棉花提取物乳膏樣品，經(jīng)過反復(fù)3次的冷熱循環(huán)試驗(yàn)恢復(fù)到室溫后，觀察到乳液的顏色沒有變化，并且沒有出現(xiàn)分層、沉淀的情況，表明木棉花提取物乳膏的耐寒穩(wěn)定性良好。3.10最大載藥量的確定結(jié)果最大載藥量的確定結(jié)果如表18所示，固定4種油脂IPM∶GTCC∶橄欖油∶核桃油=2∶1∶1∶1的總量為20%，乳化劑吐溫-80∶單硬脂酸甘油酯=3∶2的總量為2.5%，增稠劑十六十八醇用量為5%，當(dāng)木棉花提取物用量為10%時，乳膏表面深棕色、基質(zhì)細(xì)膩均勻，3000r/min離心30min后不分層、油水不分離；當(dāng)用量為11%時，乳膏表面深棕色、膏體細(xì)膩程度下降，3000r/min離心30min后乳膏出現(xiàn)油水分離現(xiàn)象。因此，確定木棉花提取物乳膏最大載藥量為10.0%。表18最大載藥量測定的結(jié)果含量顏色、細(xì)膩性離心穩(wěn)定性8.0%棕色、細(xì)膩均勻不分層，油水不分離9.0%棕色、細(xì)膩均勻不分層，油水不分離10.0%深棕色、細(xì)膩均勻不分層，油水不分離11.0%深棕色、較細(xì)膩均勻不分層，油水分離3.11雞胚絨毛尿囊膜試驗(yàn)的結(jié)果雞胚絨毛尿囊膜血管的刺激性結(jié)果表19所示，6組木棉花提取物乳膏樣品經(jīng)試驗(yàn)均無出血、凝血和血管融解的情況出現(xiàn)，ES=0，表現(xiàn)為無刺激性；0.9%氯化鈉溶液作用于雞胚絨毛尿囊膜5min內(nèi)均未出現(xiàn)出血、血管融解、凝血現(xiàn)象，IS為0；0.1mol/L的氫氧化鈉溶液作用于雞胚絨毛尿囊膜后14s時開始發(fā)生出血，31s時出現(xiàn)血管融解，86s時發(fā)生凝血現(xiàn)象，根據(jù)公式（8），算得IS為17.53。表19木棉花提取物乳膏對CAM刺激性結(jié)果序號出血情況凝血情況血管融解情況ES或IS刺激性分類1000無刺激性續(xù)表19木棉花提取物乳膏對CAM刺激性結(jié)果2000無刺激性30000無刺激性4000無刺激性5000無刺激性6000無刺激性陰性對照0000無刺激性陽性對照14318617.53強(qiáng)刺激性/腐蝕性3.12人體皮膚斑貼試驗(yàn)結(jié)果人體皮膚斑貼試驗(yàn)前后對比如圖5所示，30位受試者去除斑貼器1h、12h、24h后，皮膚均不出現(xiàn)紅斑、嚴(yán)重浸潤、水腫、融合性皰疹等現(xiàn)象；表明木棉花提取物乳膏對人體皮膚未引起不良反應(yīng)，即對人體皮膚無刺激作用。受試前、受試中、受試后的皮膚狀態(tài)對比圖5人體皮膚斑貼試驗(yàn)結(jié)果圖4結(jié)論本論文主要是以木棉花提取物為功效成分，設(shè)計具有抑菌抗炎及抗氧化、美白作用的溫和、細(xì)膩、無刺激的乳膏。通過一系列實(shí)驗(yàn)得出以下結(jié)論：（1）通過DPPH法得到當(dāng)木棉花提取物用量為3.0%時，對DPPH自由基的清除率為73.82%，說明木棉花提取物對DPPH自由基有一定的清除能力。（2）通過水楊酸法得到當(dāng)木棉花提取物用量為4.0%時，對DPPH自由基的清除率為80.58%，說明木棉花提取物對羥自由基有一定的清除能力。（3）通過酪氨酸酶抑制實(shí)驗(yàn)可以得到當(dāng)木棉花提取物用量為3.0%時，對酪氨酸酶的抑制率為47.64%，說明木棉花提取物有一定的美白效果。（4）綜合DPPH自由基清除實(shí)驗(yàn)、羥自由基清除實(shí)驗(yàn)和酪氨酸酶抑制率實(shí)驗(yàn)考慮，木棉花提取物在乳膏中的添加量為4.0%。（5）以油膩性、細(xì)膩性和涂展性為感官評價指標(biāo)，通過總分來篩選最終油脂用量為20%。以細(xì)膩性、柔順性和流動性來確定能夠形成穩(wěn)定乳液的乳化體系并結(jié)合評價總分確定乳化劑的用量為2.5%。（6）以粘稠度、涂展性、粘起性和清爽性為評價指標(biāo)，通過評分來確定增稠劑十六十八醇的用量為5%。（7）通過體外稱重法，根據(jù)保濕劑的正交設(shè)計試驗(yàn)結(jié)果得到保濕體系：甘油5.0%、泛醇2.0%、吡咯烷酮羧酸鈉1.0%。（8）離心、耐寒、耐熱和耐熱耐寒交替實(shí)驗(yàn)測試后，木棉花提取物乳膏的外觀未發(fā)生明顯變化，未出現(xiàn)分層、變稀、沉淀現(xiàn)象，表明木棉花提取物乳膏的穩(wěn)定性良好。（9）木棉花提取物乳膏粘度大小3514mPa·s、pH值為6.73、保濕率為60.45%。（10）以顏色、細(xì)膩性和離心穩(wěn)定性為指標(biāo)測試木棉花提取物乳膏的最大載藥量，在固定基礎(chǔ)配方后最大載藥量為10%。（11）通過雞胚絨毛尿囊膜試驗(yàn)，測得3組木棉花提取物乳膏的平均ES為0，表現(xiàn)為無刺激，與陰性組和陽性