人IL-17AF定量檢測試劑盒(ELISA)說明書

人IL-17AF定量檢測試劑盒(ELISA)說明書僅供科研使用，不得用于臨床檢驗。人IL-17AF定量檢測試劑盒（ELISA）說明書【貨號】YKE-1434【產(chǎn)品名稱】通用名稱：人IL-17AF定量檢測試劑盒（ELISA）英文名稱：HumanIL-17AF【包裝規(guī)格】96人份/盒【預(yù)期用途】僅供科研使用，定量檢測血清、血漿、細(xì)胞培養(yǎng)上清液中IL-17AF的濃度?！緳z驗原理】本試劑盒采用雙抗體夾心酶聯(lián)免疫吸附檢測技術(shù)。特異性抗人IL-17AF單克隆抗體預(yù)包被在高親和力的酶標(biāo)板上。酶標(biāo)板孔中加入標(biāo)準(zhǔn)品、待測樣本和生物素化的檢測抗體，經(jīng)過孵育，樣本中存在的IL-17AF與固相抗體和檢測抗體結(jié)合。洗滌去除未結(jié)合的物質(zhì)后，加入辣根過氧化物酶標(biāo)記的鏈霉親和素(streptavidin-HRP)。洗滌后，加入顯色底物TMB，避光顯色。顏色反應(yīng)的深淺與樣本中IL-17AF的濃度成正比。加入終止液終止反應(yīng)，在450nm波長(參考波長570-630nm)測定吸光度值。【主要組成成分】主要成分組分規(guī)格數(shù)量包被微孔板96T1板標(biāo)準(zhǔn)品4000pg/mL2管抗體80uL1管辣根過氧化物酶標(biāo)記的鏈霉親和素150uL1管10×檢測緩沖液5mL1瓶標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液5mL1瓶TMB顯色液10mL1瓶TMB終止液10mL1瓶洗滌緩沖液(20X)30ml1瓶封板膜4張注意：使用前請檢查試劑盒中試劑的標(biāo)簽和數(shù)量與表格是否一致【樣本要求】樣本類型和采集細(xì)胞培養(yǎng)上清300g離心10分鐘去除沉淀物，即刻檢測,或者分裝，-20℃以下貯存。血清樣本分離管分離血清。在1000g離心之前，使血樣凝集30分鐘。吸取血清樣本之后即刻檢測，或者分裝，-20℃以下貯存。血漿樣本EDTA、枸櫞酸鈉或肝素抗凝收集血漿樣本。1000g離心30分鐘收集樣本。即刻檢測，或者分裝，-20℃以下貯存。本試劑盒可能適用于其它生物學(xué)樣本。細(xì)胞培養(yǎng)上清、血清和血漿已經(jīng)過驗證。注意：檢測前，樣本中可見的沉淀必須去除。不要使用嚴(yán)重溶血或高血脂的樣本。樣本應(yīng)分裝并貯存于-20℃，以避免人IL-6活性的丟失。如果在24小時內(nèi)檢測，樣本可以存放在2-8℃。避免樣本的反復(fù)凍融。在檢測前，冷凍樣本應(yīng)該緩慢地恢復(fù)至室溫，輕柔地混勻。樣本保存和穩(wěn)定性樣本在2-8℃條件下，可以儲存72h，或者在-20℃儲存6個月。樣本收集后，不是一次檢測完，請按一次用量分裝凍存，避免反復(fù)凍融，使用時在室溫下解凍，確保樣品均勻充分解凍?！緳z驗方法】試劑準(zhǔn)備檢測前請將所有的試劑、樣本恢復(fù)至室溫。如果濃縮的試劑出現(xiàn)結(jié)晶，37℃溫浴，直至結(jié)晶全部溶解。1×洗液吸取20×濃縮洗液30ml至1L的量筒，加蒸餾水或去離子水至600ml，輕輕混勻，避免泡沫。轉(zhuǎn)移至干凈瓶內(nèi)。2-25℃貯存，1×洗液可穩(wěn)定30天。1×檢測緩沖液吸取10×濃縮檢測緩沖液5ml至100ml量筒，加蒸餾水或去離子水至50ml，輕輕混勻，避免泡沫。2-8℃貯存，1×檢測緩沖液可穩(wěn)定保存30天。檢測抗體稀釋前充分混勻。根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)品和待測樣本的數(shù)量，用1×檢測緩沖液按1：100稀釋濃縮的檢測抗體。注意：請在30分鐘內(nèi)使用稀釋后的檢測抗體。辣根過氧化物酶標(biāo)記的鏈霉親和素稀釋前充分混勻。根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)品和待測樣本的數(shù)量，用1×檢測緩沖液按1：100稀釋濃縮的辣根過氧化物酶標(biāo)記的鏈霉親和素。注意：請在30分鐘內(nèi)使用稀釋后的辣根過氧化物酶標(biāo)記的鏈霉親和素。樣本稀釋如果樣本需要稀釋，請用試劑盒提供的1×檢測緩沖液稀釋血清/血漿樣本，用細(xì)胞培養(yǎng)基稀釋細(xì)胞培養(yǎng)上清。人IL-17AF標(biāo)準(zhǔn)品用蒸餾水或去離子水重溶人IL-17AF標(biāo)準(zhǔn)品，重溶體積標(biāo)注在人IL-17AF標(biāo)準(zhǔn)品的標(biāo)簽上。輕柔地渦旋震蕩，確保充分混勻，重溶后標(biāo)準(zhǔn)品的濃度為4000pg/ml。重溶后靜置10-30分鐘。稀釋前充分混勻。請使用聚丙烯管進(jìn)行標(biāo)準(zhǔn)品稀釋。標(biāo)準(zhǔn)曲線制作血清/血漿樣本標(biāo)準(zhǔn)曲線的制作：取250μl濃縮的人IL-17AF標(biāo)準(zhǔn)品，加入250μl標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液，作為標(biāo)準(zhǔn)曲線的最高濃度(2000pg/ml)。在每一個試管中加入250μl標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液。使用高濃度標(biāo)準(zhǔn)品做1：1系列稀釋。每次移液時，請確保充分混勻。以標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液作為標(biāo)準(zhǔn)曲線的零濃度。細(xì)胞培養(yǎng)上清樣本標(biāo)準(zhǔn)曲線的制作：取250μl濃縮的人IL-17AF標(biāo)準(zhǔn)品，加入250μl細(xì)胞培養(yǎng)基，作為標(biāo)準(zhǔn)曲線的最高濃度(2000pg/ml)。在每一個試管中加入250μl細(xì)胞培養(yǎng)基。使用高濃度標(biāo)準(zhǔn)品做1：1系列稀釋。每次移液時，確保充分混勻。以細(xì)5、如果樣本值高于最高標(biāo)準(zhǔn)品濃度值，請將樣本適當(dāng)稀釋后，再重新測定。6、待測樣本中存在的人抗鼠等異嗜抗體會干擾檢測結(jié)果，檢測前，請排除該因素。7、通過其他方法得到的檢測結(jié)果，與本試劑盒測定結(jié)果不具有直接的可比性?！井a(chǎn)品性能指標(biāo)】1、物理性能試劑盒的各液體組分應(yīng)澄清透明、無沉淀或者絮狀物。微孔板鋁箔袋應(yīng)真空包裝，無破損漏氣。2、劑量反應(yīng)曲線線性校準(zhǔn)品劑量反應(yīng)曲線相關(guān)系數(shù)r值，大于等于0.9900。3、精密度批內(nèi)精密度：三組已知的高、中、低濃度樣品，進(jìn)行二十次在同一個板塊內(nèi)精度評估。批內(nèi)變異系數(shù)CV%小于10%。批間精密度：三組已知的高、中、低濃度樣品，進(jìn)行二十次在不同板塊內(nèi)精度評估。批間變異系數(shù)CV%小于15%。4、檢測范圍62.50pg/ml→4000pg/ml5、靈敏度最低檢出劑量小于10.24pg/mL。6、回收率三組已知的高、中、低濃度樣品，進(jìn)行五次回收率評估，回收率在85%-115%之間。7、特異性本試劑盒識別天然和重組人IL-17AF，與結(jié)構(gòu)類似物無交叉。8、穩(wěn)定性2℃-8℃保存，有效期6個月?！咀⒁馐马棥可锇踩?、檢測必須符合實驗室管理規(guī)范的規(guī)定，嚴(yán)格防止交叉污染，所有樣品、洗棄液和各種廢棄物都應(yīng)按照傳染物進(jìn)行處置。2、試劑盒的液體組分中，含有proclin-300防腐劑，可能引起皮膚過敏反應(yīng)，避免吸入煙霧與皮膚接觸。3、底物液對皮膚、眼睛和上呼吸道有刺激作用，避免吸入煙霧。戴上防護(hù)手套，實驗完成后徹底洗手。技術(shù)提示1、混合蛋白溶液時，避免起泡。2、加校準(zhǔn)品與樣本時，每個校準(zhǔn)品濃度和樣本都要更換移液槍頭，公共組分應(yīng)該懸臂加樣，避免交叉污染。3、合適的溫育時間，和充分的洗滌步驟，是保證實驗結(jié)果準(zhǔn)確性的必要條件。4、底物溶液為無色液體，保存過程中變?yōu)樗{(lán)色，代表底物溶液已經(jīng)失效，不得使用。5、終止液加樣順序