病理技術(shù)專業(yè)知識(shí)

（一）單純固定液甲醛：濃度：40%，氣體滲透力強(qiáng)，固定均勻，組織收縮小，不能使白蛋白和核蛋白沉淀保存脂類，必須用冷凍切片。是糖的保護(hù)劑可固定高爾基體，線粒體重鉻酸鉀濃度：1%-3%水溶液，有毒，橘紅色結(jié)晶穿透速度快，幾乎不收縮，經(jīng)乙醇脫水后明顯收縮，未酸化的重鉻酸鉀不能使蛋白質(zhì)沉淀，但可使蛋白質(zhì)變?yōu)橹軇Ｋ峄罂墒沟鞍踪|(zhì)沉淀，此時(shí)染色體可被保存，但線粒體破壞。固定高爾基體和線粒體有良好效果。酸性染料著色好，堿性染料著色差固定的組織需經(jīng)流水沖洗12-24h，或用亞硫酸鹽洗滌?？辔端狳S色結(jié)晶體，是一種強(qiáng)酸，易燃易爆，配成飽和溶液儲(chǔ)藏穿透慢，組織收縮明顯，無(wú)明顯硬化。能沉淀一切蛋白質(zhì)4．對(duì)脂肪和類脂無(wú)固定作用。5.可軟化皮膚和火棉膠，不宜用火棉膠包埋6.固定期間不宜超過(guò)24h，7.固定的組織應(yīng)盡快放入70%乙醇，滴加飽和碳酸鋰或濃氨水，有助于除去苦味酸固定產(chǎn)生的黃色。升汞1.濃度為5%-7%的水溶液，針狀結(jié)晶2．穿透力低，只宜固定薄片組織，單獨(dú)應(yīng)用組織收縮明顯3,對(duì)蛋白質(zhì)有固定作用，4.對(duì)類脂和糖類無(wú)固定作用5.臨用時(shí)加冰醋酸醋酸1.刺激性氣味的無(wú)色液體，低于15℃為冰醋酸5%的醋酸PH為2-8，可克制細(xì)菌和酶的活性，可防止自溶。2.穿透力強(qiáng)3不能沉淀白蛋白，球蛋白，但能沉淀核蛋白4不能固定脂肪和內(nèi)酯，不能保存糖5.固定線粒體和高爾基復(fù)合體不能用高濃度的醋酸，可較好的保存染色體6,缺陷是組織膨脹明顯，特別對(duì)于膠原纖維和纖維蛋白鉻酸為三氧化鉻的水溶液，濃度0.5%-1%，強(qiáng)氧化劑，不能與乙醇，甲醛等混合2穿透力弱，一般組織需固定12-24h，固定的組織有收縮，3能沉淀蛋白質(zhì)，核蛋白固定良好。4對(duì)脂肪無(wú)固定作用5固定線粒體和高爾基復(fù)合體6.宜避光保存，以防蛋白質(zhì)溶解。7.必須徹底流水沖洗（≥24h）。鋨酸（四氧化鋨）1.淡黃色結(jié)晶，劇毒，濃度1%-2%，強(qiáng)氧化劑，不能與乙醇，甲醛等混合2.滲透力極弱，易使組織變硬，延長(zhǎng)固定期間，組織的脆性增長(zhǎng)，對(duì)染色不利。3.固定均勻，不沉淀蛋白質(zhì)。4．為脂類固定劑5.合用于線粒體和內(nèi)質(zhì)網(wǎng)的固定6.為電鏡研究的必須固定劑。7.固定目的不同，配方和濃度根據(jù)需要改變8.固定后對(duì)堿性染料親和力強(qiáng)，細(xì)胞核的染色效果好9.應(yīng)在臨用前前幾天配制以保證充足溶解。丙酮1．易揮發(fā)，易燃的無(wú)色液體，可與水，醇，氯仿，醚混合2.滲透力強(qiáng)，對(duì)核的固定差3.可使蛋白質(zhì)沉淀4.作用基本與乙醇相同，但對(duì)糖原無(wú)固定作用5．廣泛用于酶組織化學(xué)中各種酶的固定乙醇1.無(wú)色液體，，還原劑，可與水無(wú)限相溶，有固定兼脫水作用用于固定的濃度為80%-95%2．滲透力弱，固定速度較慢，易使組織變脆，無(wú)水乙醇固定期，穿透速度快，滲透力差，使組織收縮3.，能沉淀白蛋白，球蛋白，核蛋白4.用于糖原的固定5.50%以上乙醇可溶解脂肪和類脂體，并可溶解血紅蛋白，對(duì)其他色素也有破壞。三氯醋酸1.為無(wú)色易潮解的結(jié)晶體，水溶液為強(qiáng)酸性，易溶于醇和醚，應(yīng)密封保存2.也是一種良好的脫鈣劑（二）混合固定液B-5固定液（醋酸鈉-升汞-甲醛）1．多用于固定淋巴組織，2.染色前應(yīng)進(jìn)行脫汞解決3.配方：無(wú)水醋酸鈉1.25g，升汞6g，甲醛10ml，蒸餾水90ml.Bouin液1.有一定毒性，應(yīng)避免吸入或與皮膚接觸2.固定液偏酸，對(duì)抗原有一定損害，使組織收縮，不適宜標(biāo)本的長(zhǎng)期保存3.固定效果好，組織細(xì)胞結(jié)構(gòu)完整。細(xì)胞核著色鮮明，細(xì)胞質(zhì)著色較差。4.對(duì)脂肪固定效果好，尤合用于含脂肪的淋巴結(jié)，乳腺組織和脂肪瘤標(biāo)本5.合用于結(jié)締組織染色，特別是三色染色更為抱負(fù)。6.配方：飽和苦味酸水溶液：甲醛水溶液：冰醋酸=15：5:：1Carnoy液1．有防止乙醇的硬化和收縮作用，增長(zhǎng)滲透力，外膜致密的組織可用其固定2.固定速度快，3mm厚組織塊1h內(nèi)即可固定，大塊組織不超過(guò)4h。3，固定細(xì)胞質(zhì)和細(xì)胞核，對(duì)于染色體固定佳，顯示DNA，RNA效果好。4.常用于糖原和尼氏體的固定5．不能保存脂類，不合用脂肪染色。6.配方：冰醋酸10ml，氯仿30ml，無(wú)水乙醇60mlMuller液1.作用緩慢，固定均勻，組織收縮小2.多用于媒染和硬化神經(jīng)組織3.固定過(guò)程中，需常更換新鮮的液體4.配方：重鉻酸鉀2-2.5g，硫酸鈉1.0g，蒸餾水100mlOrth液1.滲透力強(qiáng)，組織收縮小2.應(yīng)臨時(shí)配置，在暗處固定，固定24h左右，固定液變?yōu)楹谏珪r(shí)不可用，固定后流水沖洗12-24h。3.固定胚胎組織，神經(jīng)組織。脂肪組織4.配方：重鉻酸鉀2.5g，硫酸鈉1.0g，蒸餾水100ml，37%-40%的甲醛10ml（用時(shí)加入）PFG液1.合用于多種肽類抗原的固定，多用于免疫電鏡研究2.對(duì)細(xì)胞抗原性和結(jié)構(gòu)保存好3.配方：對(duì)苯醌20g，多聚甲醛15g，25%戊二醛40ml，0.1mol/L二甲砷酸鈉緩沖液1000ml。PLP和PLPD液1.均含過(guò)碘酸鹽2.對(duì)細(xì)胞抗原性和結(jié)構(gòu)保存好，合用于富含糖類組織的固定Rossman液1.對(duì)糖原固定好，固定12-24h，用95%的乙醇洗2.配方：無(wú)水乙醇苦味酸飽和液90ml，甲醛10mlZenker液1．用于固定多種組織，對(duì)于病毒包涵體固定效果也較好2.使細(xì)胞核和細(xì)胞質(zhì)染色清楚，常用于三色染色，對(duì)免疫球蛋白染色最佳3.不合用含血量較多的標(biāo)本，如充血的脾臟和肺梗死等標(biāo)本4.不能用金屬容器盛放，且固定后不能用金屬鑷夾取。4%多聚甲醛-0.1mol/L磷酸緩沖液1.合用于光鏡免疫組織化學(xué)法，2.動(dòng)物先用此液灌注固定，取材后再用該液浸泡固定3.可用于標(biāo)本的較長(zhǎng)時(shí)間的保存4%多聚甲醛-磷酸二鈉/氫氧化鈉1.合用于光鏡和電鏡免疫組織化學(xué)法，2.用于免疫電鏡時(shí)，應(yīng)加入新鮮配置的戊二醛。使其終濃度為0.5-1%3.性質(zhì)溫和，可長(zhǎng)期保存組織。4．配置后PH值應(yīng)調(diào)至7.2-7.4,4保存甲醛-鈣液.合用于固定脂肪組織和組織化學(xué)染色乙醇-甲醛液有脫水作用，對(duì)皮下組織中肥大細(xì)胞的固定好乙醚-乙醇液滲透性強(qiáng)，固定效果好，用于細(xì)胞涂片的固定。去除甲醛色素：Verocay液脫汞鹽結(jié)晶：Lugol液脫黑色素：0.25%高錳酸鉀藍(lán)化作用：稀氨水組織的脫水（一）乙醇乙醇脫水的濃度：70%—80%—90%—95%—100%進(jìn)行糖原和尿酸鹽結(jié)晶染色的標(biāo)本應(yīng)直接用無(wú)水乙醇固定，更換一次無(wú)水乙醇脫水即可。（二）丙酮與乙醇作用相似，但對(duì)組織塊的收縮作用比乙醇更嚴(yán)重，快速脫水或固定兼脫水時(shí)應(yīng)用，脫水時(shí)間為1-3h.丙酮可作為染色后的脫水劑，用于DNA和RNA染色。（三）異丙醇是乙醇的良好替代品，不含水，可代替無(wú)水乙醇使用，對(duì)火棉膠和染料不溶，因此不能用于火棉膠包埋和染料配制。（四）正丁醇和叔丁醇（電鏡標(biāo)本制作時(shí)常用作中間脫水劑。）正丁醇：無(wú)色液體，脫水能力較弱，可與水，乙醇和石蠟混合，因此，這種這種脫水的組織塊可直接浸蠟包埋，叔丁醇：無(wú)毒，可與水，乙醇和二甲苯混合，與正丁醇相比，它不易使組織收縮或變硬，并且脫水后可不經(jīng)透明直接浸蠟，（五）還氧已環(huán)還氧已環(huán)能于水和乙醇混合，也能溶解石蠟，可代替乙醇進(jìn)行脫水，也可代替二甲苯進(jìn)行透明，不引起組織收縮和硬化，用于制備植物標(biāo)本較好，易揮發(fā)，價(jià)格昂貴。（六）四氫呋喃易于水，乙醇，丙醇和苯類混溶，對(duì)組織滲透快，易揮發(fā)，無(wú)毒，可用作封片溶劑，對(duì)染料不溶。（七）環(huán)己酮環(huán)己酮無(wú)毒，與苯，二甲苯，氯仿和石蠟混合，可代替無(wú)水乙醇脫水后直接浸蠟，組織塊不會(huì)變硬。（八）松脂醇可取代無(wú)水乙醇用作脫水劑和隨后的浸透與包埋。樹(shù)脂包埋法合用于：不脫鈣骨髓活檢組織，肝、腎穿刺活檢和淋巴結(jié)組織等。常用的特殊染色技術(shù)一結(jié)締組織染色Mallory三色Masson三色膠原纖維，網(wǎng)狀纖維藍(lán)色綠色軟骨，粘液，淀粉樣淡藍(lán)色神經(jīng)膠質(zhì)纖維，肌纖維紅色紅色髓鞘，紅細(xì)胞橘紅色橘紅色顯示膠原纖維，網(wǎng)狀纖維，彈性纖維三聯(lián)染色膠原纖維：紅，網(wǎng)狀纖維：黑，彈性纖維：綠色肌肉和紅細(xì)胞：淡黃色二膠原纖維染色（一）顯示膠原纖維，細(xì)胞，肌肉的染色法1試劑：Ponceau（麗春紅）染色液：麗春紅水溶液10-15ml，苦味酸飽和水溶液85-90mlVictoriablue(維多利亞藍(lán))：維多利亞藍(lán)，70%乙醇2結(jié)果：膠原纖維：紅，細(xì)胞核和血細(xì)胞：綠色肌肉：黃色3注意事項(xiàng)：①：Ponceau染色后。不能與水接觸，直接用無(wú)水乙醇沖洗脫水②：膠原纖維切片的厚度需6um,③:Victoriablue染色液應(yīng)盛染色缸內(nèi)，進(jìn)行染色。（二）天狼星紅苦味酸染色法1.試劑：天狼星紅飽和苦味酸液：0.5%天狼星紅10ml，苦味酸飽和水溶液,90ml天青石藍(lán)液：天青石蘭，鐵明礬，蒸餾水，甘油，濃鹽酸2結(jié)果：膠原纖維：紅，細(xì)胞核和血細(xì)胞：綠色其他：黃色3注意事項(xiàng)：①：細(xì)胞核復(fù)染可以用Harris蘇木精淡染②：必須用偏光顯微鏡觀測(cè)三網(wǎng)狀纖維染色（一）Gomori銀染色法1.結(jié)果：網(wǎng)狀纖維：黑色膠原纖維：紅，背景：黃色3注意事項(xiàng)：①氨性銀溶液：必須器皿洗干凈，滴加氨水不能過(guò)量，冰箱保存②氧化液存放時(shí)間不能過(guò)長(zhǎng)，以免失去氧化作用③麗春紅復(fù)染用滴染方便，無(wú)水乙醇沖洗要傾斜（二）James染色法1.結(jié)果：網(wǎng)狀纖維：黑色膠原纖維：紅，背景：淡黃色3注意事項(xiàng)：①5%硝酸銀使用時(shí)不能滴染②二氨銀配制時(shí)，氨水要一滴一滴的加，以免濃氨水加的太多③甲醛液要新配制四：彈性纖維染色（一）維多利亞藍(lán)染色結(jié)果：彈力纖維：藍(lán)色細(xì)胞核：紅色注意事項(xiàng)：配制的溶液放置2周成熟后使用（二）Gomori醛復(fù)紅染色法1試劑：醛復(fù)紅染液：堿性復(fù)紅0.5g，濃鹽酸1ml，70%乙醇100ml，三聚乙醛1ml室溫下靜置1-2日，待變?yōu)樽仙闯墒?，于冰箱保存?zhèn)溆?。橘黃G染液：2：對(duì)特殊的蛋白質(zhì)及含硫酸根的粘多糖有很強(qiáng)的親和力，和彈力纖維結(jié)合很緊。對(duì)肥大細(xì)胞顆粒，脂褐素，HBsAg,胃主細(xì)胞，胰島的β細(xì)胞，腦垂體的嗜堿性細(xì)胞也能很好著色。3固定液：以甲醛生理鹽水固定的染色效果最佳。結(jié)果：彈力纖維深紫色粘液紫色五顯示彈性，膠原纖維的雙重組合染色結(jié)果：彈力纖維：藍(lán)綠色膠原纖維：紅色背景：淡黃色注意事項(xiàng)：維多利亞藍(lán)液可每次反復(fù)使用，溶液在室溫中保存可用數(shù)年。六肌肉組織染色（一）橫紋肌組織染色Mallory磷鎢酸蘇木精染色法（PTAH）1.結(jié)果：橫紋肌藍(lán)色膠原纖維，網(wǎng)狀纖維：黃色或玫瑰紅色心肌（缺血缺氧）：紫藍(lán)色或棕黃色2．注意事項(xiàng)：①．此液經(jīng)陽(yáng)光解決數(shù)周后至數(shù)月才成熟，置冰箱內(nèi)保存可使用數(shù)年時(shí)間。②．可加入0.15高錳酸鉀，加快促使成熟③．95%乙醇分化時(shí)應(yīng)注旨在切片上保存一定的紅色，然后用無(wú)水乙醇快速脫水，冷風(fēng)稍干燥后封固。初期心肌病變組織染色（一）Nagar—Olsen結(jié)果：缺氧心肌，紅細(xì)胞紅色正常心肌黃色或黃棕色細(xì)胞核藍(lán)色（二）Poley顯示缺氧心肌染色法結(jié)果：缺氧心肌紅色胞核紫色其他：綠色七：糖類染色糖原染色：過(guò)碘酸-Schiff(PAS)染色法1結(jié)果：糖原及其他PAS反映陽(yáng)性物質(zhì)紅色細(xì)胞核藍(lán)色2.注意事項(xiàng)：過(guò)碘酸是一種氧化劑染色前將Schiff試劑取出后，適應(yīng)室溫后再進(jìn)行染色八．粘液物質(zhì)（粘多糖）染色中性粘多糖多見(jiàn)于：胃粘膜的表面上皮，十二指腸腺，頜下腺，前列腺上皮，結(jié)腸的杯狀細(xì)胞。強(qiáng)硫酸化粘多糖多見(jiàn)于：皮膚，動(dòng)脈和肺、軟骨、角膜及肥大細(xì)胞弱硫酸化粘多糖多見(jiàn)于：頜下腺、結(jié)腸、氣管、支氣管的杯狀細(xì)胞粘液物染色用于：腫瘤方面的胃癌，粘液瘤和粘液肉瘤，軟骨粘液樣纖維瘤、橫紋肌肉瘤、動(dòng)脈粥樣硬化和膠原病及慢性胃炎的腸化（一）Mowry阿爾辛藍(lán)過(guò)碘酸雪夫（ABPAS）染色法1結(jié)果：中性粘液物質(zhì)紅色酸性粘液物質(zhì)藍(lán)色混合性粘液物質(zhì)紫紅色2注意事項(xiàng)：切片中不能涂白膠或火棉膠Schiff試劑保存于冰箱中備用，滴染法，用過(guò)的不能回收使用。阿爾辛藍(lán)染色30分鐘，或更長(zhǎng)（二）Schiff阿爾辛藍(lán)地衣紅染色法1結(jié)果：胃粘膜腸化生上皮和胃腸腫瘤的酸性粘多糖：藍(lán)色中性粘多糖：棕色2.注意事項(xiàng)：①高錳酸鉀氧化液必須新配制使用②地衣紅染色液冰箱保存，可反復(fù)使用③地衣紅染色時(shí)間4h,阿爾辛藍(lán)染色5分鐘，時(shí)間不能長(zhǎng)。九黑色素染色黑色素見(jiàn)于：惡性黑色素瘤，淋巴結(jié)腫瘤，色素性神經(jīng)瘤，皮膚性淋巴結(jié)炎，皮膚異色病，紅斑狼瘡，扁平苔蘚，神經(jīng)性黑色素病變，假性黑變病色素的大腸，闌尾，小腸（一）Masson—Fontana黑色素浸銀染色法結(jié)果：黑色素及嗜銀細(xì)胞顆粒黑色膠原纖維紅色背景淺黃色（二）Lillie亞鐵染色法結(jié)果：黑色素暗綠色背景淺綠肌纖維和背景黃色注意事項(xiàng)：硫酸亞鐵和鐵氰化鉀染色液需臨用時(shí)配制，不能存放，也可使含鐵血黃素呈陽(yáng)性，可用結(jié)合鐵反映法來(lái)鑒別十含鐵血黃素染色Perlsblue(普魯士南)反映顯示三價(jià)鐵結(jié)果：含鐵血黃素藍(lán)色其他組織淺紅色注意事項(xiàng)：①器皿應(yīng)潔凈，操作中避免與鐵接觸，洗滌需用蒸餾水②陳舊標(biāo)本染色效果不好，必要時(shí)可用0.25%高錳酸鉀解決切片20-60分鐘，再用草酸漂白。③組織固定不能使用酸性固定液。十一膽色素染色：三氯醋酸染色方法結(jié)果：膽色素綠色其他復(fù)染的紅色或黃色注意事項(xiàng)：不合用的固定液：Helly，Zenker等含鉻固定液纖維蛋白染色（一）MSB染色法（馬休黃猩紅藍(lán)法）結(jié)果：纖維蛋白紅色陳舊性纖維蛋白紫色細(xì)胞核藍(lán)色紅細(xì)胞黃色注意事項(xiàng)：可以使用Masson三色法進(jìn)行對(duì)照染色亮結(jié)晶猩紅6R染料可用酸性復(fù)紅代替。（二）Gram甲紫染色法結(jié)果：纖維蛋白藍(lán)黑色，背景紅色淀粉樣物質(zhì)染色（一）剛果紅染色法結(jié)果：淀粉樣物質(zhì)：紅色細(xì)胞核藍(lán)色注意事項(xiàng)：蘇木精染色的細(xì)胞核不能深淀粉樣物質(zhì)可以結(jié)合偏光的方法得到良好的效果，其色彩呈綠色雙折光性。無(wú)水乙醇有脫色作用，脫水后即用冷風(fēng)干燥，再透明封固（二）Jurgens甲紫染色法：結(jié)果：淀粉樣物質(zhì)紅色或紫紅色細(xì)胞核藍(lán)色真菌染色（一）Grocott六胺銀染色結(jié)果：菌絲和孢子黑褐色，細(xì)胞核紅色背景淡綠色（二）高碘酸復(fù)紅染色法結(jié)果：真菌紫紅色，紅細(xì)胞淺黃色細(xì)菌染色一Gram堿性復(fù)紅結(jié)晶紫染色法：結(jié)果：G+藍(lán)色G—，細(xì)胞核紅色，注意事項(xiàng)：①苯胺油苯酚復(fù)紅液是一種不穩(wěn)定的混合液，染色液表面易產(chǎn)生氧化結(jié)晶，染色應(yīng)適當(dāng)加熱防止氧化物質(zhì)污染切片。②二甲苯苯胺油分化后，必須用二甲苯洗除③結(jié)晶紫溶于乙醇，草酸銨溶于蒸餾水二Ziehl—Neelsen抗酸桿菌染色法結(jié)果：抗酸桿菌紅色背景灰藍(lán)色注意事項(xiàng)：①苯酚復(fù)紅液，必須加溫37℃-40℃,時(shí)，秩序染色15-20分鐘②亞甲藍(lán)復(fù)染后用95%乙醇快速分化，防止過(guò)度脫色三Warthin—starry胃幽門螺桿菌染色法結(jié)果：胃幽門螺桿菌呈棕黑色或黑色，背景淡黃色注意事項(xiàng)：1%硝酸銀液內(nèi)1h左右（溫箱56℃）四螺旋體染色Giemsa染色法結(jié)果螺旋體及細(xì)菌呈藍(lán)到淡紫色，細(xì)胞質(zhì)呈藍(lán)色，紅細(xì)胞呈橘黃色注意事項(xiàng)：放入Giemsa染色工作液中需要8-18h或更長(zhǎng)五HBsAg染色（一）Shikata地衣紅染色法結(jié)果：HBsAg陽(yáng)性呈棕色注意事項(xiàng)①高錳酸鉀須新配制②地衣紅染色液PH應(yīng)為1.2-1.6（二）醛復(fù)紅改良染色法結(jié)果：HBsAg陽(yáng)性呈紫色，結(jié)締組織呈紅色，紅細(xì)胞及基質(zhì)呈黃色（三）維多利亞藍(lán)染色法結(jié)果：HBsAg陽(yáng)性呈藍(lán)綠色，細(xì)胞核紅色注意事項(xiàng)：①維多利亞藍(lán)染液中需放置12-24h.神經(jīng)組織染色神經(jīng)細(xì)胞尼氏小體染色法（一）焦油紫染色法結(jié)果：尼氏小體紫色膠質(zhì)細(xì)胞淡紫色背景無(wú)色(二)Einarson棓酸青藍(lán)染色法結(jié)果：尼氏小體黑藍(lán)，紫色核藍(lán)色背景淺灰色（三）甲苯胺藍(lán)染色法：結(jié)果：尼氏小體深藍(lán)色核淡藍(lán)色背景無(wú)色神經(jīng)纖維染色方法（一）Hol,mes神經(jīng)纖維染色方法結(jié)果：神經(jīng)纖維黑色背景灰紫色（二）Bielschowsky神經(jīng)纖維染色結(jié)果：神經(jīng)纖維黑色背景紫色（三）VonBraunmubl神經(jīng)纖維，扣結(jié)，老年斑染色方法結(jié)果：神經(jīng)纖維和扣結(jié)黑色老年斑黑色背景淺灰色（四）Eager退變神經(jīng)纖維的染色方法結(jié)果：退變神經(jīng)纖維黑色背景淺棕色神經(jīng)髓鞘染色方法（一）Weigert髓鞘染色方法結(jié)果：髓鞘黑紫色，背景：淡灰色（二）Weil髓鞘染色方法結(jié)果：髓鞘藍(lán)黑色，背景：淡灰色（三）Kultshitzky髓鞘染色方法結(jié)果：結(jié)果：髓鞘藍(lán)黑色，背景：淡黃色（四）Luolfastblue髓鞘染色方法結(jié)果：髓鞘藍(lán)色核仁紫色尼氏小體紫色（五）變色酸2R--亮綠髓鞘染色方法結(jié)果：神經(jīng)髓鞘呈深紅色；軸索和間質(zhì)呈綠色，脫髓鞘纖維不著色。注：變色酸2R染液濃度在0.3﹪～0.6﹪為好，可根據(jù)質(zhì)量不同而增減。染色液置4℃冰箱內(nèi)保存，可反復(fù)使用，用前回溫。（六）Marchi退變髓鞘染色方法結(jié)果：退變髓鞘黑色背景淺棕色（七）鋨酸α—萘胺結(jié)果：變性髓鞘及脂肪：黑色正常髓鞘紅色紅細(xì)胞淡紅色結(jié)締組織藍(lán)色神經(jīng)膠質(zhì)細(xì)胞染色方法（一）Cajal星形細(xì)胞染色方法（冷凍切片）結(jié)果：原漿形及纖維性星形細(xì)胞紫黑色（二）Naounenko和Feigin改良的Cajal染色方法（石蠟切片）結(jié)果：星形細(xì)胞紫黑色背景粉紅色（三）Weil及Davenport小膠質(zhì)細(xì)胞及少膠質(zhì)細(xì)胞染色方法結(jié)果：神經(jīng)膠質(zhì)細(xì)胞及少突膠質(zhì)細(xì)胞黑色背景黃棕色（四）Naoumenko及Feigin小膠質(zhì)細(xì)胞石蠟切片染色方法結(jié)果：小膠質(zhì)細(xì)胞：黑色背景灰色神經(jīng)內(nèi)分泌細(xì)胞染色親銀反映（一）lillie—Masson二胺銀染色方法結(jié)果：親銀細(xì)胞顆粒黑色細(xì)胞核紅色背景淡灰黃色（二）Gomori—Burtner六胺銀法結(jié)果：親銀細(xì)胞黑色背景細(xì)胞淺紅色嗜銀反映：（一）DeGrandi改良硝酸銀反映法結(jié)果：嗜銀細(xì)胞顆粒棕黑色胞核紅色（二）堿性重氮反映：結(jié)果：嗜銀細(xì)胞顆粒橘紅色至紅色細(xì)胞核藍(lán)色胞質(zhì)黃色嗜鉻細(xì)胞染色（一）Giemsa改良染色方法結(jié)果：嗜鉻細(xì)胞紅色至紫紅色皮質(zhì)細(xì)胞藍(lán)色紅細(xì)胞粉紅色（二）Wiesel染色方法結(jié)果：嗜鉻細(xì)胞黃綠色細(xì)胞核紅色其他藍(lán)色肥大細(xì)胞染色一甲苯胺藍(lán)改良染色方法結(jié)果：肥大細(xì)胞：紅紫色細(xì)胞核藍(lán)色二醛復(fù)紅法結(jié)果：肥大細(xì)胞顆粒深紫色紅細(xì)胞橘黃色其他黃色DNA染色（Feulgen法）結(jié)果：DNA紫紅色細(xì)胞質(zhì)及其他成分綠色①②③④⑤⑥染色方法膠原纖維，網(wǎng)狀纖維軟骨，粘液，淀粉樣神經(jīng)膠質(zhì)纖維，肌纖維髓鞘，紅細(xì)胞結(jié)締組織染色Mallory三色藍(lán)淡藍(lán)紅黃Masson三色綠紅黃顯示膠原纖維，網(wǎng)狀纖維，彈性纖維三聯(lián)染色膠原纖維網(wǎng)狀纖維彈性纖維肌肉和紅細(xì)胞紅黑綠黃膠原纖維染色膠原纖維細(xì)胞核和血細(xì)胞肌肉顯示膠原纖維，細(xì)胞，肌肉的染色法紅綠黃天狼星紅苦味酸染色法紅綠黃網(wǎng)狀纖維染色網(wǎng)狀纖維膠原纖維背景Gomori銀染色法黑紅黃James染色法黑紅淡黃彈性纖維染色彈力纖維細(xì)胞核粘液背景維多利亞藍(lán)染色藍(lán)紅Gomori醛復(fù)紅染色深紫紫顯示彈性，膠原纖維的雙重組合染色藍(lán)綠色膠原纖維紅色淡黃色橫紋肌組織染色橫紋肌膠原纖維，網(wǎng)狀纖維心肌（缺血缺氧）Mallory磷鎢酸蘇木精染色法（PTAH）藍(lán)黃色或玫瑰紅色紫藍(lán)色或棕黃色初期心肌病變組織染色缺氧心肌，紅細(xì)胞正常心肌細(xì)胞核其他Nagar—Olsen紅黃或黃棕色藍(lán)Poley缺氧心肌染色法紅紫綠糖類染色糖原及其他PAS反映陽(yáng)性物質(zhì)細(xì)胞核過(guò)碘酸-Schiff(PAS)紅藍(lán)粘液物質(zhì)（粘多糖）染色中性粘液物酸性粘液物混合性粘液物Mowry阿爾辛藍(lán)過(guò)碘酸雪夫（ABPAS）紅藍(lán)紫紅Schiff阿爾辛藍(lán)地衣紅棕藍(lán)黑色素染色黑色素及嗜銀細(xì)胞顆粒膠原纖維背景肌纖維Masson—Fontana浸銀染色黑紅淺黃Lillie亞鐵染色暗綠色淺綠黃含鐵血黃素染色含鐵血黃素其他Perlsblue(普魯士南)藍(lán)淺紅膽色素膽色素其他不合用的固定液：Helly，Zenker等含鉻固定液三氯醋酸染色方法綠紅或黃纖維蛋白染色纖維蛋白陳舊性纖維蛋白細(xì)胞核紅細(xì)胞背景MSB染色法（馬休黃猩紅藍(lán)法）紅紫藍(lán)黃Gram甲紫染色法藍(lán)黑紅淀粉樣物質(zhì)染色淀粉樣物質(zhì)細(xì)胞核剛果紅染色法紅藍(lán)Jurgens甲紫染色法紅或紫紅色藍(lán)真菌染色菌絲和孢子背景細(xì)胞核紅細(xì)胞Grocott六胺銀染色黑褐淡綠紅高碘酸復(fù)紅染色法紫紅淺黃色細(xì)菌染色幽門菌抗酸桿菌G+G—背景Gram堿性復(fù)紅結(jié)晶紫染色法藍(lán)紅Ziehl—Neelsen抗酸桿菌染色法紅灰藍(lán)色Warthin—starry胃幽門螺桿菌染色法棕黑或黑淡黃色染色方法項(xiàng)目螺旋體染色螺旋體細(xì)菌細(xì)胞質(zhì)紅細(xì)胞Giemsa染色法藍(lán)到淡紫色藍(lán)橘黃色HBsAg染色HBsAg顆粒細(xì)胞核紅細(xì)胞結(jié)締組織Shikata地衣紅染色棕色醛復(fù)紅改良染色法紫色黃紅維多利亞藍(lán)染色法藍(lán)綠色紅神經(jīng)細(xì)胞尼氏小體染色法尼氏小體核背景膠質(zhì)細(xì)胞焦油紫染色法紫無(wú)色淡紫Einarson棓酸青藍(lán)黑藍(lán)—紫色藍(lán)淺灰色甲苯胺藍(lán)染色法深藍(lán)色淡藍(lán)無(wú)色神經(jīng)纖維染色方法神經(jīng)纖維背景老年斑扣結(jié)Holmes神經(jīng)纖維黑灰紫Bielschowsky神經(jīng)黑紫VonBraunmubl神經(jīng)纖維，扣結(jié)，老年黑淺灰色黑Eager退變神經(jīng)纖維黑色淺棕色神經(jīng)髓鞘染色方法髓鞘背景核仁尼氏小體Weigert髓鞘染色方黑紫淡灰Weil髓鞘染色方法藍(lán)黑淡灰Kultshitzky髓鞘染藍(lán)黑淡黃Luolfastblue藍(lán)紫紫髓鞘脫髓鞘纖背景軸索間質(zhì)變色酸2R--亮綠髓鞘深紅不著色綠色Marchi退變髓鞘染色方法黑色（退變）淺棕色鋨酸α—萘胺黑色（變性）紅色（正常）紅細(xì)胞（淡紅）結(jié)締組織（藍(lán)色）神經(jīng)膠質(zhì)細(xì)胞染色方法原漿形及纖維性星形細(xì)胞神經(jīng)膠質(zhì)細(xì)胞少突膠質(zhì)背景小膠質(zhì)細(xì)胞Cajal星形細(xì)胞（冷凍）紫黑色改良的Cajal染色紫黑色粉紅Weil及Davenport小膠質(zhì)細(xì)胞及少膠質(zhì)細(xì)胞黑色黃棕Naoumenko及Feigin小膠質(zhì)細(xì)胞灰黑色神經(jīng)內(nèi)分泌細(xì)胞染色親（嗜）細(xì)胞顆粒細(xì)胞核背景胞質(zhì)親銀反映lillie—Masson二胺銀黑紅淡灰黃GomoriBurtner六胺銀法黑淺紅嗜銀反映DeGrandi改良硝酸銀反映棕黑色紅堿性重氮反映橘紅色至紅色藍(lán)色黃色嗜鉻細(xì)胞染色嗜鉻細(xì)胞皮質(zhì)細(xì)胞紅細(xì)胞細(xì)胞核Giemsa改良紅色至紫紅色藍(lán)粉紅Wiesel染色方法黃綠色藍(lán)（其他）紅色肥大細(xì)胞染色肥大細(xì)胞細(xì)胞核紅細(xì)胞其他甲苯胺藍(lán)改良紅紫色藍(lán)色醛復(fù)紅法深紫色橘黃黃DNA染色DNA細(xì)胞質(zhì)Feulgen法紫紅色綠色免疫細(xì)胞化學(xué)技術(shù)標(biāo)記物應(yīng)具有以下的特點(diǎn)：①能與抗體形成比較牢固的共價(jià)鍵結(jié)合②不影響抗體與抗原的結(jié)合③放大的效益高④發(fā)光火顯色反映要在抗原與抗體結(jié)合的原位并且鮮明，有良好的對(duì)比。抱負(fù)的標(biāo)記酶：①酶的活性高并且穩(wěn)定②終產(chǎn)物穩(wěn)定，不擴(kuò)散，有良好的定位③酶與抗體和結(jié)合不影響Ag—Ab的特異性反映④在組織與體液中不存在內(nèi)源性的酶底物效果好又應(yīng)用最多的是辣根過(guò)氧化物酶和堿性磷酸酶異硫氰酸熒光素：為明亮的黃綠色熒光四甲基異硫氰酸羅丹明：為橙紅色熒光免疫組織化學(xué)重要染色方法的原理（一）直接法（又稱一步法）特異性高，敏感性低原理：用已知的特異性抗體與熒光素或酶結(jié)合，直接與待測(cè)組織中的抗原反映。特點(diǎn)：將熒光素或酶標(biāo)記在第一抗體上（二）間接法（又稱夾心法）原理：第一步：以未標(biāo)記的特異性抗體（第一抗體）與組織或細(xì)胞中的抗原反映，洗去未與抗原結(jié)合的第一抗體后，第二步：再以熒光素或酶標(biāo)記的第二抗體與第一抗體結(jié)合，如何進(jìn)行顯色或熒光檢查。特點(diǎn)：將熒光素或酶標(biāo)記在第二抗體上優(yōu)點(diǎn)：①不用標(biāo)記第一抗體②第一抗體的工作稀釋度高③敏感性增強(qiáng)④應(yīng)用范圍更廣⑤特異性低于直接法（三）未標(biāo)記抗體法1酶橋法酶橋法使用的三種抗體中的第1，第3兩種抗體為同種動(dòng)物所產(chǎn)生。在染色的關(guān)鍵是第2抗體（橋抗體）必須以較高的濃度過(guò)量使用優(yōu)點(diǎn)：提高了反映的敏感性，缺陷：背景染色較重。2PAP法將游離酶和抗酶抗體在使用前先制成穩(wěn)定的酶—抗酶抗體復(fù)合物，在稀釋后使用。PAP法的關(guān)鍵在于①PAP復(fù)合物中的抗酶抗體必須與第一抗體為同種動(dòng)物所產(chǎn)生。②第2抗體（橋抗體）必須過(guò)量（四）親和素—生物素方法1親和素—生物素—過(guò)氧化物酶復(fù)合物技術(shù)（ABC）通過(guò)ABC復(fù)合物中親和素橋梁的作用，將ABC復(fù)合物與生物素化的抗體結(jié)合在一起，達(dá)成檢測(cè)抗原的目的。與PAP法比較，ABC法最大的優(yōu)點(diǎn)是敏感性高，是PAP法的20-40倍另一方面是背景清楚。SP法與ABC法比較，特異性更高2酶標(biāo)親和素—生物素技術(shù)（BALAB）制備生物素化抗體和酶標(biāo)親和素，運(yùn)用生物素—親和素的親和作用，將酶標(biāo)親和素連接到抗原抗體復(fù)合物上，以顯示被檢測(cè)的抗原。3橋聯(lián)親和素—生物素技術(shù)（BAB，BRAB）是用生物素分別標(biāo)記抗體和酶，然后以親和素為橋，將兩者連接在一起對(duì)照常用的對(duì)照方法涉及：陽(yáng)性對(duì)照，陰性對(duì)照，阻斷實(shí)驗(yàn)，，空白對(duì)照，替代對(duì)照，自身對(duì)照，吸取實(shí)驗(yàn)陽(yáng)性細(xì)胞的染色特性：陽(yáng)性細(xì)胞染色分布有3種類型：胞質(zhì)，細(xì)胞核，細(xì)胞膜表面陽(yáng)性細(xì)胞可分為灶性和彌漫性染色強(qiáng)度不一可定位于單個(gè)細(xì)胞，且與陰性細(xì)胞互相交雜分布。切片邊沿，刀痕或皺褶區(qū)域，壞死或擠壓的細(xì)胞區(qū)，膠原結(jié)締組織等表現(xiàn)為相同的染色強(qiáng)度，不能判斷為陽(yáng)性免疫熒光細(xì)胞化學(xué)染色方法熒光抗體法：用熒光抗體示蹤或檢查相應(yīng)抗原的方法熒光抗原法：用已知的熒光抗原標(biāo)記物示蹤或檢查相應(yīng)抗體的方法對(duì)照：抗原對(duì)照，抗血清對(duì)照，滅活補(bǔ)體對(duì)照。染色結(jié)果判讀對(duì)照實(shí)驗(yàn)：①吸取實(shí)驗(yàn)：應(yīng)用尚無(wú)文獻(xiàn)報(bào)道的抗血清/自己制備的抗血清進(jìn)行IHC染色時(shí)，需用相應(yīng)的飽和抗原吸取血清后，在孵育標(biāo)本。判斷結(jié)果的可信性（結(jié)果應(yīng)為陰性）②交叉實(shí)驗(yàn)③替代實(shí)驗(yàn)④置換實(shí)驗(yàn)⑤陽(yáng)性對(duì)照動(dòng)物實(shí)驗(yàn)技術(shù)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物的抓取一小鼠用左手拇指和食指抓住兩耳和頸部皮膚，其余三指和手掌心夾住背部皮膚和尾部小鼠的灌胃針長(zhǎng)4-5cm,直徑1mm.插入深度為3-4cm,常用灌胃量0.2-0.8ml皮內(nèi)注射量：最多不得超過(guò)0.05ml.皮下注射部位：背部肌內(nèi)注射：股部腹腔注射：0.1-0.2ml/10g靜脈注射：多用尾靜脈，用溫水浸泡尾部或乙醇擦拭，使血管擴(kuò)張，4號(hào)細(xì)針一次注射量為0.05-0.1ml/10g，盡也許從尾端開(kāi)始向尾根部移動(dòng)注射，腦內(nèi)注射：0.02-0.03ml注射針垂直刺入2-3mm,二大鼠大鼠捉持方法與小鼠相似。大鼠容易被激怒咬人，捉持時(shí)左手應(yīng)戴防護(hù)手套。另一種方法：張開(kāi)左手虎口，迅速將拇指，食指插入大鼠腋下，虎口向前，其余三指及掌心握住大鼠身體中端，并使其保持仰臥位，之后調(diào)整左手拇指位置，緊抵在下頜骨上。大鼠的灌胃針長(zhǎng)6-8cm,直徑1.2mm.插入深度為4-6cm,常用灌胃量1-4ml皮內(nèi)注射量：最多不得超過(guò)0.1ml.皮下注射部位：背部，左側(cè)下腹部肌內(nèi)注射：股部腹腔注射：1-2ml/100g靜脈注射：多用尾靜脈，用溫水浸泡尾部或乙醇擦拭，使血管擴(kuò)張，4號(hào)細(xì)針一次注射量為0.05-0.1ml/10g，盡也許從尾端開(kāi)始向尾根部移動(dòng)注射，腦內(nèi)注射：0.03-0.05ml注射針垂直刺入2-3mm,三家兔一只手抓住兔頸背部皮膚，將兔輕輕提起，另一只手托住臀部，使兔呈蹲坐姿勢(shì)。切不可用手握持雙耳提起兔子家兔的固定：盒式固定：常用于經(jīng)口給藥，兔耳血管注射、采血或觀測(cè)兔耳血管變化等。臺(tái)式固定：常用于頸部，胸部手術(shù)，兔靜脈采血或測(cè)量血壓，呼吸等實(shí)驗(yàn)架式固定：常用作熱原值實(shí)驗(yàn)一次灌胃能耐受的最大容積兔為80-150ml貓為50-150ml皮內(nèi)注射量：最多不得超過(guò)0.1ml.皮下注射部位：背部或耳根部肌內(nèi)注射：兩側(cè)臀部或股部肌肉腹腔注射：5ml,部位：下腹部近腹白線左右兩側(cè)約1cm處。靜脈注射：耳緣靜脈注射腦內(nèi)注射：0.05-0.1ml注射針垂直刺入3mm,兔，貓致死法：空氣栓塞法：靜脈內(nèi)注入20-40ml空氣即可致死。四犬要用特制的鉗式長(zhǎng)柄犬夾夾住頸部，使犬頭向上，頸部拉直，再套上犬鏈。急性實(shí)驗(yàn)用犬，可用犬夾夾住犬頸部后，將它壓倒在地，由助手將其四肢固定好。實(shí)驗(yàn)需要麻醉時(shí)，把麻醉完善后的犬固定在手術(shù)臺(tái)或?qū)嶒?yàn)臺(tái)上，應(yīng)及時(shí)解去嘴上的帶子，以利動(dòng)物呼吸，避免由于鼻腔被粘液阻塞而導(dǎo)致窒息。一次灌胃量不能超過(guò)200ml皮下注射部位：大腿外側(cè)肌內(nèi)注射：兩側(cè)臀部或股部肌肉腹腔注射：5-10ml，部位：臍后腹白線側(cè)1-2cm靜脈注射：前肢，皮下，頭靜脈或后肢小隱靜脈注射大鼠和小鼠的采血方法1尾尖采血2眼眶后靜脈叢采血3摘眼球采血4斷頭采血5頸靜脈和頸動(dòng)脈采血6股靜脈和股動(dòng)脈采血7心臟采血:用左手觸摸左側(cè)第3-5肋間處，選擇心臟沖動(dòng)最明顯處穿刺，一般選擇胸骨左緣外1cm第4肋間用6號(hào)半針頭的注射器，垂直刺入心臟，可隨針接觸心臟的感覺(jué)隨時(shí)調(diào)整刺入方向和深度豚鼠采血方法1心臟采血2耳緣采血3足靜脈采血兔的采血方法1耳（中央）動(dòng)脈采血2耳緣靜脈采血3外頸靜脈采血4頸動(dòng)脈采血5股靜脈采血6心臟采血（不超過(guò)20-25ml）犬的采血方法1前后肢皮下靜脈采血2股動(dòng)脈采血3心臟采血4頸靜脈采血5耳緣靜脈采血羊的采血方法1頸靜脈采血2前后肢皮下靜脈采血一般一次可取50-100ml實(shí)驗(yàn)動(dòng)物用藥量的擬定1藥物劑量按mg/kg或g/kg計(jì)算2用藥量未知時(shí)可先用致死量的1/10—1/5進(jìn)行嘗試。3動(dòng)物的耐受性比人大。假設(shè)人的用藥量為1，小鼠，大鼠尾25—50，兔、豚鼠為15-20，犬、貓為5-104給藥途徑不同，所用劑量也不同5根據(jù)動(dòng)物年齡不同給不同的劑量。實(shí)驗(yàn)動(dòng)物處死措施大鼠和小鼠：1脊椎脫臼法2斷頭法3擊打法4急性大失血法5化學(xué)致死法犬、貓、兔、豚鼠1空氣栓塞法2急性失血法3破壞延髓法4開(kāi)放性氣胸法5化學(xué)藥物致死法實(shí)驗(yàn)動(dòng)物表面麻醉常用：利多卡因?qū)Υ笫筮M(jìn)行吸入麻醉應(yīng)選用：乙醚實(shí)驗(yàn)動(dòng)物的編號(hào)，標(biāo)記和被毛去