P21基因多態(tài)性與華北食管癌的相關(guān)性-0

1/1P21基因多態(tài)性與華北食管癌的相關(guān)性P21基因多態(tài)性與華北食管癌的相關(guān)性作者：

馬玉泉，楊曉光，劉暉，李保慶，劉俊峰【摘要】目的：

探討P21基因外顯子的3非翻譯區(qū)第20堿基對(duì)的單核苷酸多態(tài)性對(duì)食管鱗狀細(xì)胞癌發(fā)生及淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的影響.方法：

選擇202例ESCC患者和265例健康對(duì)照個(gè)體，采集靜脈抗凝血5mL，同時(shí)收集病史、個(gè)人及腫瘤家族史.以蛋白酶K消化飽和氯化鈉鹽析法提取外周血白細(xì)胞DNA，分別采用PCR片斷長度分析和PCR限制性片段長度多態(tài)性方法檢測P瘺21外顯子的3UTR第20堿基對(duì)單核苷酸多態(tài)性基因型.結(jié)果：

ESCC患者的P21基因3UTR的多態(tài)性基因鄢型和等位基因型分布與健康對(duì)照組差異無廁統(tǒng)計(jì)學(xué)意義.ESCC吸煙組患者P21框的T/T基因型頻率顯著高于健康吸煙組膃.與C/C基因型相比，攜帶T/T基因姿型可增加吸煙者的ESCC發(fā)病風(fēng)險(xiǎn).而徽在非吸煙的患者和健康個(gè)體中，P21的基因型及等位基因型頻率均差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)筘意義.有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移組的P21的T/T證基因型頻率高于無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移組.與常見奶基因型C/C相比，攜帶T/T基因型可閑增加ESCC患者淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的風(fēng)險(xiǎn)，經(jīng)桉性別、年齡校正的OR值分別為結(jié)論：

P紼213UTR的T/T基因型可能增加吐中國北方吸煙人群ESCC易感性并可能鲅增加ESCC患者淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的風(fēng)險(xiǎn)性.＆【關(guān)鍵詞】食管腫瘤；癌，鱗狀細(xì)胞魍；基因，P21；多態(tài)現(xiàn)象，遺傳；疾病液易感性；淋巴轉(zhuǎn)移【Abstract咄】AIM:Toexplorethe衾influenceofthesing翦lenucleotidepolymo仞rphismvariants(SNP泉s)inthe3untranslatedregion(3UTR)o瘙fP21geneonthedevel鐵opmentandlymphaticmetastasesofesopha茉gealsquamouscellca陘rcinoma(ESCC).METHODS:Thehospitalbasedcasecontrolst蹣udyincluded202ESCCpatientsand265heal欺thycontrols.Genomi囅cDNAwasextractedby厄usingprotEinaseKdi儒gestionfollowedbya丈saltingoutprocedu裝re.TheSNPsofP21wer卅eanalyzedbypolymer奘asechainreaction(P銑CR)fragmentlength銫analysisandPCRrestrictionfragmentle瘋ngthpolymorphismanalysis(PCRRFLP).R遣ESULTS:Theoverallg義enotypeandalleloty軟pedistributionsofP锃213UTRpolymorphismsinESCCpatientswerenotsignificantl擺ydifferentfromthos澀einhealthycontrols咿(P).Stratificatio熱nanalysisrevealedthattheP21geneTTall揍elefrequencyinsmok饕ingpatients(%)wass賁ignificantlyhigher鼾thanthatinhealthys服mokers(%,2=,P=).T后herefore,comparedw睥ithP21C/Cgenotype,髦smokerswiththeT/Tg玫enotypesignificant璐lyhadahigherriskto沁developESCC(sexand蕎ageadjustedA=,95%C娑I=).However,P21allelewasnotsignificantlydifferentinbotｃhnonsmokingESCCgr锃oupandhealthygroup(P).TheESCCcases砉werefurtherstratif煜iedaccordingtothestatusoflymphaticmetastasisatthetimeofdiagnosisandther沉esultsshowedthatth凇ep21T/TallelewasmorecommoninESCCpati漱entswithlymphaticm鉛etastasisthanthose蚤withoutlymphaticme窒tastasis.Comparedw爆ithfamiliarmonadel感phoustheC/Cgenotype,T/Tgenotypesign松ificantlyincreased旋theriskoflymphatic延metastasis(sexanda江geadjustedA=,95%C蟻I=）.CONCLUSION:The醑P21T/Tallelemayinc北reasethesusceptibi卜litytoESCCamongsmo霰kersinNorthChinaandtheriskoflymphat暢icmetastasisinESCC離.【Keywords】esopha茨gealneoplasms;carc卮inoma,squamouscell同;genes,P21;polymo輝rphism,genetic;dis船easesusceptibility茭;lymphaticmetastas戴is0引言P21基因是近年來發(fā)現(xiàn)銀的細(xì)胞周期蛋白依賴性激酶抑制劑家族中漆的重要成員.P21基因的多態(tài)性與一些訊惡性腫瘤的易感性有關(guān)［1］.但P21匍基因的多態(tài)性與食管癌易感性的研究尚少粗見報(bào)道.我們采用病例對(duì)照研究方法，昝以探討P21基因型與食管癌發(fā)病及淋巴皓結(jié)轉(zhuǎn)移的關(guān)系.1對(duì)象和方法對(duì)象X等X/XX選擇河北醫(yī)科大學(xué)第四醫(yī)院行胃榕鏡檢查或住院手術(shù)治療，經(jīng)病理組織學(xué)證僉實(shí)的食管鱗狀細(xì)胞癌患者202例，年齡萌33～75歲，其中185例有相關(guān)淋巴拶結(jié)轉(zhuǎn)移資料記錄的ESCC患者均經(jīng)過外﹁科手術(shù).健康對(duì)照265例，年齡33～鄶69歲，為同期在河北醫(yī)科大學(xué)第四醫(yī)院傀健康查體人員或河北省血站的獻(xiàn)血員，無觖腫瘤及遺傳病史.所有患者及健康對(duì)照均銫來自石家莊市或相鄰市縣，并均為漢族、瓦無血緣關(guān)系.ESCC患者的年齡、性別膛、吸煙狀態(tài)、家族史、病理類型及淋巴結(jié)殞轉(zhuǎn)移情況均來自住院病歷；健康對(duì)照人員憩的以上信息由2名專門人員詢問并記錄.艾曾經(jīng)吸煙或現(xiàn)在吸煙，每日5支以上并持聆續(xù)2a以上者被定義為吸煙個(gè)體.家族中斗1名以上一級(jí)親屬或2名以上二級(jí)親屬患涅者屬食管癌/賁門癌/胃癌者被定義為上隉消化道腫瘤家族史陽性.兩組間性別和年齡構(gòu)成比均差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義.45例健圖康對(duì)照和7例ESCC患者無相關(guān)吸煙資轟料記錄.在有相關(guān)吸煙資料記錄的研究對(duì)歟象中，ESCC組吸煙者比例與健康對(duì)照齜組相比差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義.168例健康對(duì)照個(gè)體無UGIG家族史記錄或記載不齏清.ESCC患者中UGIG家族史陽性皙者比例%，高于對(duì)照組.因此，UGIG閩家族史增加ESCC的發(fā)病風(fēng)險(xiǎn)，經(jīng)年齡過、性別調(diào)整后的OR值為185例ESC剎C患者有臨床資料，病理結(jié)果報(bào)告87人制有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移，98人無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移，沒с有遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移.方法抽取外周靜脈血5m怪L，經(jīng)枸櫞酸鈉抗凝，于4℃冰箱保存，藥并于采血后1wk內(nèi)提取外周血白細(xì)胞D訶NA.P21基因型檢測按PCRRF謠LP方法進(jìn)行.P21SNP擴(kuò)增引物5坨GAATTTGCCGTTGGGT鎪CAAG3和5AGGAGAA郎CACGGGATGAGGAG3.薔3UTR發(fā)生一個(gè)CT的替代，從而產(chǎn)生一個(gè)PstI限制性酶切位點(diǎn)，T等蝴位基因存在該識(shí)別位點(diǎn).PCR反應(yīng)體系攫均為25L，其中模板DNA100n螨g,10PCR緩沖液L，Taq瑙DNA聚合酶U,MgCl2mmol/L,dNTPsmmol/L，上、下玩游引物各mol/L.P21PCR反應(yīng)條件為：

94℃預(yù)變性5min，94℃變性45s，64℃退火45s，72篇℃延伸60s，35個(gè)循環(huán)后，72℃繼ヴ續(xù)延伸5min.取PCR產(chǎn)物8L進(jìn)槔行限制性內(nèi)切酶消化，經(jīng)30g/L瓊脂態(tài)糖凝膠電泳分析基因型.P21基因的P涸CR產(chǎn)物為868bp，經(jīng)限制性內(nèi)切酶諗PstI37℃過夜消化后，T/T純和屯基因型表現(xiàn)為133bp和735bp兩個(gè)DNA片段，而C/C純和基因型表現(xiàn)垃為133，256和479bp三個(gè)DN楹A片段,C/T雜合型表現(xiàn)133,25績6,479和735bp四個(gè)片段.每一膈批PCR反應(yīng)均以蒸餾水替代DNA作為賠陰性對(duì)照.1/10的DNA標(biāo)本進(jìn)行了2次分型以證實(shí)分型方法的可靠性.統(tǒng)浮計(jì)學(xué)處理：

采用SPSS軟件包進(jìn)行，應(yīng)撣用2檢驗(yàn)進(jìn)行基因型頻率的觀察值與預(yù)驛期值的HardyWEInberg平般衡檢驗(yàn).ESCC組與對(duì)照組的基因型辟和等位基因型分布比較均采用2檢驗(yàn).┬以非條件Logistic回歸法計(jì)算經(jīng)ェ性別和年齡校正的比值比及其95%的可詞信區(qū)間.P2結(jié)果基因SNP分布所有垸ESCC組與健康對(duì)照組的DNA標(biāo)本均⑸經(jīng)PCRRFLP方法成功檢測出P2朗1基因的多態(tài)性基因型，經(jīng)重復(fù)檢測標(biāo)本橘的基因型與原始結(jié)果100%吻合.P2挎1基因型分布在ESCC組及對(duì)照組中均夔符合HardyWeinberg平衡莓.ESCC組和對(duì)照組P21等位基因T抹，C的頻率分別為%,%和%,%；T/笈T,C/T,C/C基因型頻率分別為%撖,%,%和%,%,%.P21等位基因錨型及基因型總體分布在ESCC組和健康陳對(duì)照組之間均無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異.P21的T/T基因型頻率在ESCC吸煙組顯著歃高于健康吸煙組的.而在非吸煙的患者和肆健康個(gè)體中，P21的基因型及等位基因確型頻率差異均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義.基因SN煥Ps與淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的關(guān)系有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移組竇的P21的T/T基因型頻率高于無淋巴麻結(jié)轉(zhuǎn)移組.與常見基因型C/C相比，攜禪帶T/T基因型可使ESCC患者淋巴結(jié)摟轉(zhuǎn)移的風(fēng)險(xiǎn)增高3倍，經(jīng)性別、年齡校正蟠的OR值為表1P21基因SNP分布分巍析表2P21基因SNPs與淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移鄞的關(guān)系3討論食管癌是人類常見的惡賄性腫瘤之一，其發(fā)生與性別、年齡、種族撖有關(guān).大多數(shù)食管癌患者年齡在55～5枘9歲之間，35歲以下的青年人很少發(fā)生苒，70歲以后發(fā)病率逐漸降低，男女發(fā)病菅比例約為2:1.降低食管癌發(fā)病率、死嘀亡率最有效的途徑就是預(yù)防，尤其是病因禮預(yù)防.近年研究表明，抑癌基因、代謝酶味基因、DNA修復(fù)基因等基因的多態(tài)性與個(gè)體對(duì)食管癌的易感性有關(guān)［2-6］.懦P21基因是近年來發(fā)現(xiàn)的CDKI家族靳中的重要成員，在許多腫瘤的發(fā)生發(fā)展中扮演著抑癌基因的角色.研究發(fā)現(xiàn),在胃骷癌、結(jié)腸癌、膀胱癌、卵巢癌和膽管癌中P21基因的表達(dá)與腫瘤的預(yù)后明顯相關(guān)讞［7］.P21基因的多態(tài)性決定了個(gè)體琊的差異性,在不同的環(huán)境因素作用下,可以表現(xiàn)出對(duì)疾病的不同易感性.P21匭基因的多態(tài)性與一些惡性腫瘤如肺癌、乳節(jié)腺癌、子宮內(nèi)膜癌、前列腺癌［1］的易感性有關(guān).我們的研究結(jié)果顯示，病例慷總體分析并未發(fā)現(xiàn)P21基因3UTR欺第20堿基對(duì)的多態(tài)性與ESCC的易感觸性相關(guān).然而，根據(jù)吸煙狀況分層分析發(fā)狀現(xiàn)，P21的T/T基因型頻率在ESC￥C吸煙組顯著高于健康吸煙組，與C/Cヘ基因型相比，攜帶T/T基因型可使吸煙灼人群ESCC的發(fā)病風(fēng)險(xiǎn)增加3倍，經(jīng)性挹別和年齡校正的OR值為而在非吸煙的患寸者和健康個(gè)體中，P21的基因型及等位基因型頻率均無顯著性差異.這說明T/T基因型可增加吸煙者患ESCC的風(fēng)險(xiǎn)遴，表明T/T基因型的過量表達(dá)可能與吸沫煙所誘導(dǎo)的代謝改變相互作用，從而影響筑ESCC的易感性.我們發(fā)現(xiàn)，與C/C韓基因型相比，攜帶T/T基因型可使ES黲CC患者淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的危險(xiǎn)性增高3倍.噙這表明攜帶T/T基因型的ESCC患毛者更容易發(fā)生淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移，提示攜帶該基楹因型的ESCC患者在臨床治療時(shí)應(yīng)盡可沭能進(jìn)行淋巴結(jié)清掃，并進(jìn)行相應(yīng)的術(shù)后綜合治療，以減少淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移病灶的殘留.綜上所述，P21基因3UTR的多蟣態(tài)性分析可作為預(yù)測中國北方吸煙人群E嚼SCC易感性的分子指標(biāo)之一，并可能用ズ于ESCC患者淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移風(fēng)險(xiǎn)的預(yù)測.【參考文獻(xiàn)】［1］KibelAS螢,SuarezBK,BelaniJ,etal.CDKN1AandCDKN箢1Bpolymorphismsand一riskofadvancedpros鍘tatecarcinoma［J］.C蝠ancerRes,XX,63(9):猹2033-2036.［2］Miao梭X,YuC,TanW,etal.Af妤unctionalpolymorphisminthematrixmeta鉀lloprotEinase2gen洙epromoter(1306C/T)isassociatedwithr茸iskofdevelopmentbu掏tnotmetastasisofga諏striccardiaadenoca怩rcinoma［J］.CancerR解es,XX,63(14):3987-姆3990.［3］ZhangZW,NｂewcombP,HollowoodA砑,etal.Ageassociatedincreaseofcodon7邏2argininep53frquencyingastriccardiaa祗ndnoncardiaadenoc蕊arcinoma［J］.Cli