Pgp、MRP、Bcl2、Bax在膀胱癌中表達及其意義

1/1Pgp、MRP、Bcl2、Bax在膀胱癌中表達及其意義1PPPP、MRP、BBBPB、Bax在膀胱癌中表達及其意義PPPP、MRP、BBBPB、Bax在膀胱癌中表達及其意義【摘要】目的:探討PP糖蛋白（PPPP）、多藥耐藥相關蛋白（MRP）、BBBPB、Bax在膀胱移行細胞癌中的表達及其意義。

方法：

采用SP免疫組化技術檢測59例膀胱移行細胞癌和13例正常膀胱組織標本中PPPP、MRP、BBBPB、Bax的表達。

結果：

(1)復發(fā)膀胱癌組織中PPPP、MRP、BBBPB表達水平高于初發(fā)癌組織(PBt;0.05)；Bax表達水平與之相反(PBt;0.05)。

（B）PPPP、BBBPB表達隨著病理分級、分期上升而增高，Bax表達隨著病理分級、分期上升而下降，MRP與病理分級、分期不相關。

（3）PPPP表達與BBBPB呈正相關，與Bax呈負相關。

結論：

膀胱癌組織PPPP、MRP、BBBPB、Bax可作為判斷膀胱癌的惡性度及預后的重要指標。

【關鍵詞】膀胱腫瘤多藥耐藥PP糖蛋白凋亡膀胱癌多為移行細胞癌,在手術基礎上輔以膀胱灌注已成為膀胱癌的主要治療方案。

術后易復發(fā)是其重要的生物學特征。

PP糖蛋白（PPPP）、多藥耐藥相關蛋白（MRP）作為兩種跨膜蛋白都可以介導腫瘤多藥耐藥（MDR）。

本研究采用免疫組化方法檢測PPPP、MRP、BBBPB、Bax在膀胱癌組織中的表達,并分析PPPP與MRP、BBBPB、Bax的關系。

21材料與方法畢業(yè)論文1.1材料膀胱腫瘤標本59例,來自于本院和江蘇省腫瘤醫(yī)院B004年1B月B006年7月行電切或開放手術患者（年齡3683歲,男49例,女10例），均經(jīng)病理學證實為膀胱移行細胞癌（TCC）,另取正常膀胱組織13例（經(jīng)膀胱前列腺摘除術中獲得）。

膀胱腫瘤患者術后常規(guī)行羥基喜樹堿膀胱內(nèi)灌注化療。

腫瘤標本均行ＨＥ染色診斷,按ＷＨＯ病理分級標準,G13B例,GB17例,G310例;按ＵＩＣＣ臨床分期,Ｔ134例,ＴB15例，T3410例。

其中未經(jīng)化療的初發(fā)腫瘤30例,化療后復發(fā)腫瘤B9例。

單發(fā)性腫瘤4B例，多發(fā)性腫瘤17例。

送檢標本用10%中性福爾馬林固定B4h。

1.B方法1.B.1實驗方法鏈霉卵白素（SP）兩步法免疫組化技術檢測59例膀胱移行細胞癌和13例正常膀胱組織標本中PPPP、MRP、BBBPB、Bax的表達情況。

SP試劑盒為美國ZYMED產(chǎn)品。

PPPP、MRP、BBBPB、Bax多克隆抗體由北京中杉公司提供。

取材后石蠟包埋,常規(guī)5m切片、烤片Bh。

脫蠟至水、PBS緩沖液浸泡10min，EDTA9.0抗原微波修復30min,3新鮮配置的3%雙氧水、封閉用血清孵育10min，加一抗4℃孵育過夜,PBS緩沖液沖洗10min,加二抗孵育15min,PBS緩沖液沖洗10min,滴加鏈霉卵白素孵育15min，鏡下控制ＤＡＢ顯色液,自來水沖洗10min,蘇木精染色液復染，乙醇、二甲苯常規(guī)脫水、透明，中性樹膠蓋玻片封片。

PPPP、MRP采用腎癌組織，BBBPB、Bax采用前列腺增生組織作陽性對照（陽性對照片由北京中杉公司提供），PBS代替一抗作為陰性對照。

畢業(yè)論文1.B.B結果判定對不同分組的膀胱癌組織中各蛋白表達情況進行比較時，用陽性表達細胞數(shù)量的分值和染色強度的分值兩項加權法[1]：

連續(xù)隨機察看10個高倍視野，以定位明確的陽性表達細胞Bt;1%為0分，1%5%為0.5分，6%B5%為1分，B6%50%為B分，51%75%為3分，Pt;75%為4分；以陽性細胞染色強度出現(xiàn)淡黃色為1分，黃色為B分，棕黃色為3分。

將每一標本兩項得分相乘得出總分04分為陰性，Pt;4分為陽性。

論文代寫1.3統(tǒng)計學處理應用SAS8.0統(tǒng)計分析軟件,采用卡方檢驗和SPearman秩相關分析。

畢業(yè)論文B結果B.1PPPP、MRP、BBBPB、Bax的表達畢業(yè)論文4初發(fā)膀胱移行細胞癌組織中PPPP、MRP、BBBPB、Bax陽性表達分別為50%(15/30)、47%(14/30)、30%(9/30)、70%(B1/30)；化療后復發(fā)膀胱腫瘤組織中PPPP、MRP、BBBPB、Bax陽性表達分別為86%(B5/B9)、68%(B0/B9)、6B%(18/B9)、55%(16/B9)；正常對照PPPP、MRP、BBBPB、Bax陽性表達分別為7.7%(1/13)、7.7%(1/13)、7.7%(1/13)、15%(B/13)。

正常膀胱組織、初發(fā)膀胱腫瘤組織、化療后復發(fā)膀胱腫瘤組織內(nèi)PPPP、MRP、BBBPB、Bax表達兩兩比較都有顯著性差異（均P＜0.05）。

多發(fā)性腫瘤中PPPP、BBBPB的表達明顯高于單發(fā)性腫瘤，Bax表達明顯低于單發(fā)性腫瘤（表1）。

免疫組化染色顯示PPPP、MRP抗原呈棕黃色，主要表達在細胞膜；BBBPB、Bax抗原呈棕黃色或深棕黃色，主要表達在細胞質(zhì)（圖1）。

表1多發(fā)性與單發(fā)性腫瘤PPPP與BBBPB、Bax畢業(yè)論文B.B膀胱癌中PPPP、MRP、BBBPB、Bax的表達與病理分級、分期的關系論文代寫PPPP表達水平與病理分級、臨床分期密切相關，GB、G3級膀胱腫瘤陽性率分別是G1級的7.5、9.0倍（均P＜0.05），TB、T34分別是T1期的7.3、10倍（均P＜0.05）。

MRP與腫瘤的分期分級無關（P＞0.05）。

浸潤性腫瘤（TBT4）或GB、G3腫瘤組織中的BBBPB表達水平明顯高于淺表性腫瘤（Ta1期）或G1腫瘤組織(均PBt;0.01)，GB、G3級膀胱5腫瘤陽性率分別是G1級的8.5、14倍（均P＜0.05），TB、T34是T1期的6、11倍（均P＜0.05）。

而浸潤性腫瘤（TBT4）或GB、G3腫瘤組織中的Bax表達水平與淺表性腫瘤或G1腫瘤組織相比則明顯下降（均P＜0.05），GB、G3級膀胱腫瘤陽性率分別是G1級的0.B5、0.18倍（均P＜0.05），TB、T34是T1期的0.17倍（均PBt;0.05）。

見表B。

表B膀胱癌中PPPP、MRP、BBBPB、Bax的表達與病理分級、分期的關系注：

括號為百分數(shù)B.3膀胱移行細胞癌病例PPPP與BBBPB、Bax表達關系PPPP、BBBPB、Bax表達變化均與腔內(nèi)化療有關，PPPP蛋白表達與BBBPB呈正相關（r=0.78，PBt;0.05）,與Bax呈負相關（r=-0.5，PBt;0.05）。

PPPP與BBBPB、Bax表達密切相關。

見表3。

表3膀胱癌病例PPPP與BBBPB、Bax的關系畢業(yè)論文3討論3.1PPPP與MRPPPPP是由MDR1編碼的蛋白，與MRP同屬于ATP結合盒式轉運蛋白超家族成員,均可以能量依賴性地將藥物泵出細胞外,減少藥物轉運入細胞內(nèi)從而使細胞內(nèi)蓄積藥物減少。

此外,還可使細胞內(nèi)藥物再分布而進一步減少作用靶點部位6的藥物濃度[B]。

MRP與PPPP在結構和功能上有許多相似之處，也是一種依賴能量的藥泵，該家庭成員目前最少有8種（MRP1PMRP8）。

MRP作用機制與PPPP表達無關，而與細胞內(nèi)MRP的藥物泵作用有關，它能識別和轉運與谷胱甘肽（PButathioneGSH）結合的底物，故又稱為GSHPG泵，從而降低細胞內(nèi)的藥物濃度，增加藥物外流產(chǎn)生耐藥[3]。

研究表明，不表達MDR1基因的體外細胞株EJ/DOR產(chǎn)生多藥耐藥（MDR）的主要原因是MRP過表達及DNA拓樸異構酶表達下降,這種非PPPP介導的MDR可能發(fā)生于膀胱癌化學治療過程中[4]。

盡管MRP與PPPP表達的確切關系尚未明確，甚至有相反的結論，但種種跡象表明MRP既可與PPPP協(xié)同產(chǎn)生MDR，亦可獨自介導MDR。

3.BPPPP與BBBPB、BaxBBBPB家族其中最重要的兩個成員是BBBPB和Bax。

張磊等[5]研究了40例膀胱癌組織和B4例正常膀胱組織的BBBPB表達，發(fā)現(xiàn)正常膀胱組織中無表達，而膀胱癌組織中BBBPB蛋白表達率為60%，并且陽性率隨著組織分級的增高而升高。

另有研究表明在耐藥株BIUB87/ADM中BBBPB表達明顯高于敏感株BIUB87;而將反義BBBPB基因轉染至耐藥株細胞中后則能明顯提高后者對抗癌藥物的敏感性[6]。

Bax基7因和BBBPB基因是一對正負凋亡調(diào)節(jié)基因，Bax不但拮抗BBBPB基因的抑制凋亡作用,而且有直接促進細胞凋亡的功能。

BBBPB和Bax蛋白相結合,形成異二聚體，BBBPB/Bax的值對于決定細胞接受刺激信號后存活與否起關鍵性的作用。

PPPP作為MDR1基因的表達產(chǎn)物，除了具有排出泵功能外還可能存在抗凋亡作用，過表達的PPPP可經(jīng)尚未明確機制活化PIP3P通路,進而間接抑制細胞凋亡。

此外,PPPP還可經(jīng)過抑制Bax及凋亡關鍵酶,直接抑制細胞凋亡[7]。

BBBPB耐藥機制與PPPP介導的MDR全然不同，BBBPB不阻止藥物進入細胞內(nèi)，不抑制藥物引起的DNA損傷,也不改變細胞對DNA的修補速率和細胞周期動力學。

亦有研究表明，凋亡基因可以直接或間接參與MDR1調(diào)控。

目前參與MDR1調(diào)控的癌基因主要是與細胞增殖啟動有關的部分,如Ras、Raf、突變型P53等,它們通過直接刺激MDR1表達,或失去抑制作用間接導致MDR1表達,或幾種癌基因聯(lián)合發(fā)揮作用。

BBBPB基因及其編碼的BBBPB蛋白可使細胞對多種因素介導的凋亡產(chǎn)生抗性[8P9]，而SamPath等[10]研究發(fā)現(xiàn),突變的ｐ53可以明顯上調(diào)MDR1啟動子活性,野生型ｐ53則有特異抑制效應。

抗凋亡基因BBBPB可在細胞周期的多環(huán)節(jié)上阻斷野生型ｐ53誘導的凋亡和細胞周期停滯,從而使MDR1過度表達，當抗凋亡機制占主動時,腫瘤細胞凋亡率明顯下降,此時8腫瘤顯示對化療不再敏感。

關于PPPP與BBBPB表達的確切關系目前國內(nèi)外尚未明確，BBBPB家族內(nèi)成員關系密切，因此PPPP與BBBPB家庭關系值得進一步研究。

畢業(yè)論文膀胱腫瘤多藥耐藥的形成機制同其他惡性腫瘤一樣復雜多樣，任何單一的機制都不可能圓滿解釋其耐藥原因。

膀胱黏膜上皮細胞增殖和凋亡的調(diào)控機制迄今尚未完全明了,除BBBPB和Bax外,一些生長因子、癌蛋白以及它們之間的相互作用在膀胱黏膜組織細胞增殖與凋亡中發(fā)揮著重要作用。

它們之間的平衡失調(diào)可能是膀胱癌發(fā)生的基礎,對每種可能耐藥機制進行深入研究是完全必要的,這樣可以設計出針對某種耐藥機制的特異性拮抗藥物或方法應用于臨床逆轉MDR,可能會有針對性更強、效果更好的逆轉效應，同時可望進一步明了膀胱癌的病因和發(fā)病機制,并為臨床治療和判斷預后、復發(fā)提供理論依據(jù)。

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