人補體3裂解產(chǎn)物(C3SP)ELISA試劑盒使用說明書

第第頁人補體3裂解產(chǎn)物（C3SP）ELISA試劑盒使用說明書人補體3裂解產(chǎn)物（C3SP）ELISA試劑盒試驗原理：C3SP試劑盒是固相夾心法酶聯(lián)免疫吸附試驗（ELISA）.已知C3SP濃度的標準品、未知濃度的樣品加入微孔酶標板內(nèi)進行檢測。先將C3SP和生物素標記的抗體同時溫育。洗滌后，加入親和素標記過的HRP。再經(jīng)過溫育和洗滌，去除未結合的酶結合物，然后加入底物A、B，和酶結合物同時作用。產(chǎn)生顏色。顏色的深淺和樣品中C3SP的濃度呈比例關系。試劑盒內(nèi)容及其配制試劑盒成份（28℃保管）96孔配置48孔配置配制96/48人份酶標板1塊板（96T）半塊板（48T）即用型塑料膜板蓋1塊半塊即用型標準品：80ng/ml1瓶（0.6ml）1瓶（0.3ml）按說明書進行稀稀空白對照1瓶（1.0ml）1瓶（0.5ml）即用型標準品稀釋緩沖液1瓶（5ml）1瓶（2.5ml）即用型生物素標記的抗C3SP抗體1瓶（6ml）1瓶（3.0ml）即用型親和鏈酶素HRP1瓶（10ml）1瓶（5.0ml）即用型洗滌緩沖液1瓶（20ml）1瓶（10ml）按說明書進行稀釋底物A1瓶（6.0ml）1瓶（3.0ml）即用型底物B1瓶（6.0ml）1瓶（3.0ml）即用型停止液1瓶（6.0ml）1瓶（3.0ml）即用型標本稀釋液1瓶（12ml）1瓶（6.0ml）即用型自備料子1．蒸餾水。2．加樣器：5ul、10ul、50ul、100ul、200ul、500ul、1000ul。3．振蕩器及磁力攪拌器等。安全性1．躲避直接接觸停止液和底物A、B。一旦接觸到這些液體，請盡快用水沖洗。2．試驗中不要吃喝、吸煙或使用化妝品。3．不要用嘴吸取試劑盒里的任何成份。操作注意事項1．試劑應按標簽說明書儲存，使用前恢復到室溫。稀稀過后的標準品應丟棄，不行保管。2．試驗中不用的板條應趕忙放回包裝袋中，密封保管，以免變質。3．不用的其它試劑應包裝好或蓋好。不同批號的試劑不要混用。保質前使用。4．使用一次性的吸頭以免交叉污染，吸取停止液和底物A、B液時，躲避使用帶金屬部分的加樣器。5．使用干凈的塑料容器配置洗滌液。使用前充分混勻試劑盒里的各種成份及樣品。6．洗滌酶標板時應充分拍干，不要將吸水紙直接放入酶標反應孔中吸水。7．底物A應揮發(fā)，躲避長時間打開蓋子。底物B對光敏感，躲避長時間暴露于光下。躲避用手接觸，有毒。試驗完成后應趕忙讀取OD值。8．加入試劑的次序應全都，以保證全部反應板孔溫育的時間一樣。9．依照說明書中標明的時間、加液的量及次序進行溫育操作。樣品收集、處理及保管方法1、血清操作過程中躲避任何細胞刺激。使用不含熱原和內(nèi)毒素的試管。收集血液后，1000×g離心10分鐘將血清和紅細胞快速小心地分別。2、血漿EDTA、檸檬酸鹽、肝素血漿可用于檢測。1000×g離心30分鐘去除顆粒。3、細胞上清液1000×g離心10分鐘去除顆粒和聚合物。4、組織勻漿將組織加入適量生理鹽水搗碎。1000×g離心10分鐘，取上清液5、保管假如樣品不趕忙使用，應將其分成小部分70℃保管，躲避反復冷凍。盡可能的不要使用溶血或高血脂血。假如血清中大量顆粒，檢測前先離心或過濾。不要在37℃或更高的溫度加熱解凍。應在室溫下解凍并確保樣品均勻地充分解凍。試劑的準備1．標準品：標準品的系列稀釋應在試驗時準備，不能儲存。稀釋前將標準品振蕩混勻。稀釋比例按下表中進行：80ng/ml（6號標準品）原倍濃度不用稀釋直接加入50ul。40ng/ml（5號標準品）100ul的原倍標準品加入100ul的標準品稀釋液20ng/ml（4號標準品）100ul的5號標準品加入100ul的標準品稀釋液10ng/ml（3號標準品）100ul的4號標準品加入100ul的標準品稀釋液5.0ng/ml（2號標準品）100ul的3號標準品加入100ul的標準品稀釋液2.5ng/ml（1號標準品）100ul的2號標準品加入100ul的標準品稀釋液0ng/ml（空白對照）原始濃度不用稀釋直接加入50ul。2．洗滌緩沖液（50×）的稀釋：蒸餾水50倍稀釋。操作步驟1．使用前，將全部試劑充分混勻。不要使液體產(chǎn)生大量的泡沫，以免加樣時加入大量的氣泡，產(chǎn)生加樣上的誤差。2．依據(jù)待測樣品數(shù)量加上標準品的數(shù)量決議所需的板條數(shù)。每個標準品和空白孔建議做復孔。每個樣品依據(jù)自身的數(shù)量來定，能使用復孔的盡量做復孔。標本用標本稀釋液1：1稀釋后加入50ul于反應孔內(nèi)。3．加入稀釋好后的標準品50ul于反應孔、加入待測樣品50ul于反應孔內(nèi)。趕忙加入50ul的生物素標記的抗體。蓋上膜板，輕輕振蕩混勻，37℃溫育1小時。4．甩去孔內(nèi)液體，每孔加滿洗滌液，振蕩30秒，甩去洗滌液，用吸水紙拍干。重復此操作3次。假如用洗板機洗滌，洗滌次數(shù)加添一次。5．每孔加入80ul的親和鏈酶素HRP，輕輕振蕩混勻，37℃溫育30分鐘。6．甩去孔內(nèi)液體，每孔加滿洗滌液，振蕩30秒，甩去洗滌液，用吸水紙拍干。重復此操作3次。假如用洗板機洗滌，洗滌次數(shù)加添一次。7．每孔加入底物A、B各50ul，輕輕振蕩混勻，37℃溫育10分鐘。躲避光照。8．取出酶標板，快速加入50ul停止液，加入停止液后應趕忙測定結果。9．在450nm波優(yōu)點測定各孔的OD值。建議使用的試驗方案標準品濃度（ng/ml）A8080樣品樣品樣品樣品樣品樣品樣品樣品樣品樣品B4040樣品樣品樣品樣品樣品樣品樣品樣品樣品樣品C2020樣品樣品樣品樣品樣品樣品樣品樣品樣品樣品D1010樣品樣品樣品樣品樣品樣品樣品樣品樣品樣品E5.05.0樣品樣品樣品樣品樣品樣品樣品樣品樣品樣品F2.52.5樣品樣品樣品樣品樣品樣品樣品樣品樣品樣品G00樣品樣品樣品樣品樣品樣品樣品樣品樣品樣品H樣品樣品樣品樣品樣品樣品樣品樣品樣品樣品樣品樣品局限6號標準品以上的結果為非線性的，依據(jù)此標準曲線無法得到精準明確的結果。補體3裂解產(chǎn)物（C3SP）ELISA試劑盒性能1.靈敏度：最小的檢測濃度小于1號標準品。稀釋度的線性。樣品線性回歸與預期濃度相關系數(shù)R值為0.990.2.特異性：不與其它細胞因子反應。3.重復性：板內(nèi)、板間變異系數(shù)均小于10