DB21-T 3994-2024 番茄褐色皺紋果病毒監(jiān)測技術(shù)規(guī)范

ICS65.020.2021IDB21/T3994—2024本文件按照GB/T1.1—2020《標(biāo)準(zhǔn)化工作導(dǎo)則第1部分：標(biāo)準(zhǔn)化文件的結(jié)構(gòu)和起草規(guī)則》的規(guī)定起草。請注意本文件某些內(nèi)容可能涉及專利。本文件的發(fā)布機(jī)構(gòu)不承擔(dān)識(shí)別專利的責(zé)任。本文件由遼寧省農(nóng)業(yè)農(nóng)村廳提出并歸口。本文件起草單位：遼寧省農(nóng)業(yè)發(fā)展服務(wù)中心、沈陽農(nóng)業(yè)大學(xué)植物保護(hù)學(xué)院、葫蘆島市現(xiàn)代農(nóng)業(yè)發(fā)展服務(wù)中心、蓋州市農(nóng)業(yè)技術(shù)推廣中心、盤錦市現(xiàn)代農(nóng)業(yè)發(fā)展中心、喀左縣農(nóng)業(yè)發(fā)展服務(wù)中心。本文件主要起草人：蔡明、江冬、王昭、孟威、宋國柱、吳元華、魯旭鵬、王宇穎、金偉、李萍、徐清云、呂廣輝。本文件發(fā)布實(shí)施后，任何單位和個(gè)人如有問題和意見建議，均可以通過來電和來函等方式進(jìn)行反饋，我們將及時(shí)答復(fù)并認(rèn)真處理，根據(jù)實(shí)際情況依法進(jìn)行評估及復(fù)審。歸口管理部門通訊地址：遼寧省農(nóng)業(yè)農(nóng)村廳（沈陽市和平區(qū)太原北街2號(hào)聯(lián)系電話文件起草單位通訊地址:遼寧省綠色農(nóng)業(yè)技術(shù)中心(沈陽市于洪區(qū)長江北街39號(hào)),聯(lián)系電話1DB21/T3994—2024番茄褐色皺紋果病毒監(jiān)測技術(shù)規(guī)范本文件規(guī)定了番茄褐色皺紋果病毒（Tomatobrownrugosefruitvirus，ToBRFV）的監(jiān)測依據(jù)、監(jiān)測工具、疫情監(jiān)測、診斷與鑒定、監(jiān)測報(bào)告、標(biāo)本保存與處理等技術(shù)內(nèi)容。本文件適用于番茄褐色皺紋果病毒的監(jiān)測。2規(guī)范性引用文件下列文件中的內(nèi)容通過文中的規(guī)范性引用而構(gòu)成本文件必不可少的條款。其中，注日期的引用文件，僅該日期對應(yīng)的版本適用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改單）適用于本文件。SN/T2964植物病毒檢測規(guī)范3術(shù)語和定義本文件沒有需要界定的術(shù)語和定義。4監(jiān)測依據(jù)番茄褐色皺紋果病毒，屬煙草花葉病毒屬，病毒粒子呈桿狀，寬約18nm，長約300nm。病毒通常在種子中存活數(shù)年，種子萌芽時(shí)侵染幼苗嫩葉和頂芽，逐漸擴(kuò)展至莖桿、果實(shí)系統(tǒng)感染植株；也能隨種子和機(jī)械摩擦、嫁接、搭架綁蔓、修枝打杈等農(nóng)事操作在田間快速擴(kuò)散。該病毒可引起番茄植株花葉，花梗、花萼和葉柄出現(xiàn)褐變壞死條斑,果實(shí)出現(xiàn)黃色斑點(diǎn)、變褐、表面皺縮、有斑紋、果實(shí)減少。其發(fā)生規(guī)律、傳播途徑和典型癥狀等是該病毒監(jiān)測的重要依據(jù)。5監(jiān)測工具剪刀、鏟子、手套、取樣袋等。6疫情監(jiān)測6.1監(jiān)測準(zhǔn)備收集當(dāng)?shù)胤?、辣椒等茄科植物的種植情況，番茄褐色皺紋果病毒發(fā)生情況等相關(guān)資料；制定簡便易行的番茄褐色皺紋果病毒監(jiān)測計(jì)劃。6.2監(jiān)測作物監(jiān)測作物包括番茄、辣椒、茄子、煙草等茄科植物。2DB21/T3994—20246.3監(jiān)測區(qū)域6.3.1未發(fā)生區(qū)重點(diǎn)監(jiān)測從疫情發(fā)生區(qū)調(diào)入茄科種苗及產(chǎn)品的地區(qū)，境外茄科引種種植區(qū)，茄科科種苗繁育基地、出口茄科種子生產(chǎn)基地及周邊等疫情發(fā)生高風(fēng)險(xiǎn)區(qū)域。主要監(jiān)測是否傳入番茄褐色皺紋果病毒。6.3.2發(fā)生區(qū)重點(diǎn)監(jiān)測發(fā)生疫情的代表性地塊和邊緣區(qū)。主要監(jiān)測多年種植寄主植物并有番茄褐色皺紋果病毒發(fā)生歷史的地塊和疫苗來源的育苗基地。監(jiān)測番茄褐色皺紋果病毒的發(fā)生動(dòng)態(tài)和擴(kuò)散趨勢。6.4監(jiān)測時(shí)期在茄科作物苗期、開花坐果期和結(jié)果期等番茄褐色皺紋果病毒顯癥期分別進(jìn)行2次～3次調(diào)查，各地可根據(jù)當(dāng)?shù)氐臍夂蚝颓芽频纳诖_定具體的調(diào)查時(shí)間，重點(diǎn)開展結(jié)果期監(jiān)測。6.5監(jiān)測方法6.5.1未發(fā)生區(qū)6.5.1.1訪問調(diào)查向菜農(nóng)、農(nóng)資經(jīng)銷商、農(nóng)技人員等相關(guān)人員詢問有關(guān)茄科作物果實(shí)變褐皺縮和花葉情況，初步了解疫情可能發(fā)生地點(diǎn)、時(shí)間、危害情況。對詢問過程中發(fā)現(xiàn)的番茄褐色皺紋果病毒可疑發(fā)生地區(qū)，進(jìn)行深入重點(diǎn)調(diào)查。6.5.1.2田間踏查對訪問調(diào)查過程中發(fā)現(xiàn)的可疑發(fā)生區(qū)和其他高風(fēng)險(xiǎn)茄科作物種植區(qū)，在生長期進(jìn)行2次～3次踏查，觀察田間有無番茄褐色皺紋果病毒發(fā)病癥狀(見附錄A)。調(diào)查面積應(yīng)占可疑發(fā)生區(qū)和其他高風(fēng)險(xiǎn)茄科作物種植區(qū)種植面積的20%～30%。6.5.1.3定點(diǎn)調(diào)查在訪問調(diào)查和踏查過程中，發(fā)現(xiàn)可疑疫情需進(jìn)行定點(diǎn)調(diào)查。采用5點(diǎn)取樣法，每點(diǎn)隨機(jī)調(diào)查10株，統(tǒng)計(jì)發(fā)病株率與病果率。6.5.2發(fā)生區(qū)6.5.2.1發(fā)生區(qū)范圍監(jiān)測采取訪問調(diào)查和踏查方法（具體方法見6.5.1.1和6.5.1.2監(jiān)測發(fā)生區(qū)的范圍變化。6.5.2.2發(fā)生區(qū)發(fā)生動(dòng)態(tài)監(jiān)測采取定點(diǎn)調(diào)查法（具體方法見6.5.1.3每縣（市、區(qū)）選10個(gè)調(diào)查點(diǎn)，每7d調(diào)查1次，整個(gè)生育期調(diào)查4次。7診斷與鑒定3DB21/T3994—20247.1田間現(xiàn)場診斷主要檢查葉片、花梗、花萼、葉柄和果實(shí)，觀察是否出現(xiàn)病毒危害癥狀。葉片和果實(shí)發(fā)病且符合典型癥狀的可直接判定。7.2室內(nèi)鑒定7.2.1采樣經(jīng)現(xiàn)場診斷，不能確定為番茄褐色皺紋果病毒的，用剪刀剪取具有典型癥狀的葉片、果實(shí)或用鏟子挖取疑似癥狀植株等植物樣本放入采樣袋，袋內(nèi)應(yīng)附有標(biāo)簽，帶回實(shí)驗(yàn)室進(jìn)行檢測。標(biāo)簽應(yīng)記錄好采集時(shí)間、地點(diǎn)、采集人、發(fā)病癥狀及發(fā)病面積等必要信息7.2.2方法采用RT-PCR法。鑒定步驟應(yīng)按照SN/T2964的規(guī)定執(zhí)行。8監(jiān)測報(bào)告詳細(xì)記錄監(jiān)測結(jié)果，記載調(diào)查地點(diǎn)、時(shí)間、寄主植物名稱、發(fā)生面積、危害程度等（見附錄B）。并將原始記錄表連同照片、影像等其它資料整理匯總形成監(jiān)測報(bào)告，由縣級植物檢疫機(jī)構(gòu)按要求逐級報(bào)送。9標(biāo)本保存與處理監(jiān)測過程中使用的有關(guān)材料和用具，在使用完畢后須進(jìn)行消毒和除害處理。經(jīng)檢疫鑒定后的種子樣品應(yīng)保存在4℃冰箱內(nèi)，葉片和果實(shí)樣品應(yīng)保存在-20℃以下或凍干保存3個(gè)月備查，保存期滿后，進(jìn)行滅活處理。4DB21/T3994—2024（資料性）番茄褐色皺紋果病毒典型癥狀A(yù).1番茄染病癥狀染病后，嫩葉和頂芽上出現(xiàn)花葉癥狀，葉脈黃化、葉片變窄，嚴(yán)重時(shí)花梗、花萼和葉柄出現(xiàn)褐變壞死條斑。在番茄生長后期，會(huì)導(dǎo)致果實(shí)顏色變淺，變綠或者出現(xiàn)黃色斑點(diǎn)，嚴(yán)重時(shí)造成番茄果實(shí)變褐，表面皺縮，有斑紋。花和果實(shí)數(shù)量減少（見圖A.1）圖A.1番茄上褐色皺紋果病毒引起的癥狀A(yù).2辣椒染病癥狀染病后，植株發(fā)育遲緩，葉片變形、變黃、有斑點(diǎn)，果實(shí)癥狀為果實(shí)變形、出現(xiàn)黃、棕或綠色條紋圖A.2辣椒上褐色皺紋果病毒引起的癥狀5DB21/T3994—2024附錄B番茄褐色皺紋果病毒調(diào)查監(jiān)測記錄表番茄褐色皺紋果病毒監(jiān)測結(jié)果填入表B.1。表B.1番茄褐色皺紋果病毒調(diào)查監(jiān)測記錄表調(diào)查地點(diǎn)：縣