無(wú)菌檢查及微生物檢查方法驗(yàn)證課件

4-無(wú)菌及微生物檢查方法驗(yàn)證無(wú)菌檢查及微生物檢查方法驗(yàn)證4-無(wú)菌及微生物檢查方法驗(yàn)證

介紹內(nèi)容

一、微生物的基礎(chǔ)知識(shí)二、無(wú)菌檢查方法三、無(wú)菌檢查及微生物檢查方法驗(yàn)證4-無(wú)菌及微生物檢查方法驗(yàn)證

微生物基礎(chǔ)知識(shí)

微生物（microorganism,microbe）是一些肉眼看不見(jiàn)的微小生物的總稱。微生物（microorganism）包括細(xì)菌、支原體、螺旋體、衣原體、立克次體、病毒及真菌（霉菌、酵母菌和放線菌）等。4-無(wú)菌及微生物檢查方法驗(yàn)證

細(xì)菌（bacterium）屬于原核細(xì)胞型微生物，其特點(diǎn)是具有細(xì)胞壁、原始的核質(zhì)，以二分裂方式繁殖。4-無(wú)菌及微生物檢查方法驗(yàn)證

細(xì)菌的形態(tài)

⒈細(xì)菌體積微小，是無(wú)色半透明的，用肉眼直接觀察難以看到，其結(jié)構(gòu)和形狀須經(jīng)過(guò)顯微鏡放大數(shù)百倍至上千倍才能觀察。⒉一般以微米（μm）作為測(cè)量單位。⒊在細(xì)菌學(xué)中，按其形態(tài)可分為球菌、桿菌、弧菌和螺桿菌。⒋經(jīng)革蘭染色法（Gramstain）可將細(xì)菌分成兩大類：即革蘭陽(yáng)性菌（G+）和革蘭陰性菌（G-）。4-無(wú)菌及微生物檢查方法驗(yàn)證

真菌（fungus；eumycetes）是具有真核和細(xì)胞壁的生物。種類很多，已報(bào)道的種超過(guò)10萬(wàn)個(gè)。大多是由纖細(xì)管狀菌絲構(gòu)成的菌絲體。許多菌絲在一起統(tǒng)稱菌絲體。菌絲體在基質(zhì)上生長(zhǎng)的形態(tài)稱為菌落。4-無(wú)菌及微生物檢查方法驗(yàn)證

真菌的形態(tài)具有多樣性，大小不一，大的用肉眼可以看到，小的用普通光學(xué)顯微鏡放大數(shù)倍乃至千倍方可觀察到。其形態(tài)分單細(xì)胞、多細(xì)胞，單細(xì)胞呈圓形或卵圓形，如酵母菌（yeast）。多細(xì)胞由菌絲和孢子組成，并交織成團(tuán)。4-無(wú)菌及微生物檢查方法驗(yàn)證

藥品污染常見(jiàn)的真菌

毛霉屬、根霉屬、曲霉屬、青霉屬、木霉屬一、毛霉屬（MucorMicheliexFries）

毛霉屬在自然界分布很廣，常用于發(fā)酵工業(yè)。并引起水分高的糧食及食品的霉?fàn)€變質(zhì)。

4-無(wú)菌及微生物檢查方法驗(yàn)證根霉屬（RhizopusEhrenberg）

根霉屬?gòu)V泛應(yīng)用于發(fā)酵工業(yè)，在潮濕的糧食及食品上能迅速蔓延生長(zhǎng)，引起糧食及食品的腐爛。4-無(wú)菌及微生物檢查方法驗(yàn)證

曲霉屬（Aspergillus）

曲霉屬的菌絲無(wú)色、淡色或表面凝聚有色物質(zhì)，為有隔的多細(xì)胞。本屬的常見(jiàn)產(chǎn)毒霉菌有8個(gè)種，具有強(qiáng)烈的致癌性。

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青霉屬菌絲無(wú)色或有色，為有隔的多細(xì)胞。分生孢子梗從菌絲垂直生出，無(wú)足細(xì)胞，頂端不膨大，無(wú)頂囊，產(chǎn)生一輪至數(shù)輪分叉，在最后一級(jí)分枝的小梗上，長(zhǎng)出成串的分生孢子，形似掃帚狀，稱為帚狀枝。本屬的常見(jiàn)產(chǎn)毒霉菌有9個(gè)種，其中展青霉可產(chǎn)生展青霉素，是一種神經(jīng)毒素，并具有致畸、致突變和致癌性；4-無(wú)菌及微生物檢查方法驗(yàn)證

霉菌菌落形態(tài)4-無(wú)菌及微生物檢查方法驗(yàn)證

霉菌在孟加拉紅培養(yǎng)基上的形態(tài)4-無(wú)菌及微生物檢查方法驗(yàn)證

酵母菌顯微鏡下形態(tài)4-無(wú)菌及微生物檢查方法驗(yàn)證

無(wú)菌檢查法

無(wú)菌檢查法系用于檢查藥典要求無(wú)菌的藥品、醫(yī)療器具、原料、輔料、及其他品種是否無(wú)菌的一種方法。若供試品符合無(wú)菌檢查法的規(guī)定，僅表明了供試品在該檢驗(yàn)條件下未發(fā)現(xiàn)微生物污染。

4-無(wú)菌及微生物檢查方法驗(yàn)證

無(wú)菌保障

試驗(yàn)環(huán)境

檢驗(yàn)依據(jù)

4-無(wú)菌及微生物檢查方法驗(yàn)證

隔離系統(tǒng)的應(yīng)用

應(yīng)用隔離系統(tǒng)重要的目的⒈是保護(hù)產(chǎn)品免受外源性污染，包括操作人員、操作環(huán)境及外包裝等的污染，保證無(wú)菌實(shí)驗(yàn)結(jié)果的可靠性，實(shí)現(xiàn)一次檢出的要求。⒉是保護(hù)操作人員免受實(shí)驗(yàn)過(guò)程中的有害物質(zhì)帶來(lái)的污染。隔離系統(tǒng)應(yīng)按相關(guān)的要求進(jìn)行驗(yàn)證，其內(nèi)部環(huán)境的潔凈度須符合無(wú)菌檢查的要求。日常檢驗(yàn)還需對(duì)試驗(yàn)環(huán)境進(jìn)行監(jiān)控。4-無(wú)菌及微生物檢查方法驗(yàn)證

培養(yǎng)基

硫乙醇酸鹽流體培養(yǎng)基

改良馬丁培養(yǎng)基

0.5%葡萄糖肉湯培養(yǎng)基

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制備培養(yǎng)基的要求

⒈培養(yǎng)基的裝量與容器高度的比例應(yīng)符合培養(yǎng)結(jié)束后培養(yǎng)基氧化層（粉紅色）不超過(guò)培養(yǎng)基深度1/2。⒉培養(yǎng)基氧化層顏色不得超過(guò)培養(yǎng)基深度的1/5，否則，須經(jīng)100℃水浴加熱至粉紅色消失（不超過(guò)20分鐘），迅速冷卻，只限加熱一次。⒊配制好的培養(yǎng)基應(yīng)采用驗(yàn)證合格的滅菌程序滅菌。4-無(wú)菌及微生物檢查方法驗(yàn)證

培養(yǎng)基的貯存

制備好的培養(yǎng)基應(yīng)在2-25℃、避光保存；保存在非密容器中，應(yīng)在3周內(nèi)使用；保存在密閉容器中，可在1年內(nèi)使用。4-無(wú)菌及微生物檢查方法驗(yàn)證

培養(yǎng)基的適用性檢查

無(wú)菌性檢查每批培養(yǎng)基隨機(jī)取不少于5支，培養(yǎng)14天應(yīng)無(wú)菌生長(zhǎng)。試驗(yàn)可與無(wú)菌試驗(yàn)同時(shí)進(jìn)行。靈敏度檢查

4-無(wú)菌及微生物檢查方法驗(yàn)證

菌種菌液制備黑曲霉菌液的制備培養(yǎng)基接種參照中國(guó)藥典2010版

4-無(wú)菌及微生物檢查方法驗(yàn)證

結(jié)果判斷空白對(duì)照應(yīng)無(wú)菌生長(zhǎng)，若加菌的培養(yǎng)基管均生長(zhǎng)良好，判該培養(yǎng)基的靈敏度檢查符合規(guī)定。試驗(yàn)同時(shí)應(yīng)做空白對(duì)照

4-無(wú)菌及微生物檢查方法驗(yàn)證

稀釋液、沖洗液

0.1%蛋白胨水溶液

pH7.0氯化鈉-蛋白胨緩沖液根據(jù)供試品的特性，可選用其他經(jīng)驗(yàn)證過(guò)的適宜的溶液作為稀釋液、沖洗液。如需要，可在上述稀釋液或沖洗液的滅菌前或滅菌后加入表面活性劑或中和劑等。4-無(wú)菌及微生物檢查方法驗(yàn)證

陽(yáng)性對(duì)照根據(jù)供試品特性選擇陽(yáng)性對(duì)照菌：無(wú)抑菌作用及抗革蘭陽(yáng)性菌抗革蘭陰性菌抗厭氧菌抗真菌

加菌量

結(jié)果判斷4-無(wú)菌及微生物檢查方法驗(yàn)證

陰性對(duì)照供試品無(wú)菌檢查時(shí)，應(yīng)取相應(yīng)溶劑和稀釋液、沖洗液同法操作，作為陰性對(duì)照。陰性對(duì)照不得有菌生長(zhǎng)。4-無(wú)菌及微生物檢查方法驗(yàn)證

無(wú)菌檢查法

包括薄膜過(guò)濾法和直接接種法。只要供試品性狀允許，應(yīng)采用薄膜過(guò)濾法。4-無(wú)菌及微生物檢查方法驗(yàn)證

薄膜過(guò)濾法

過(guò)濾器應(yīng)優(yōu)先選擇封閉式薄膜過(guò)濾也可使用一般薄膜過(guò)濾器。選擇濾膜材質(zhì)時(shí)應(yīng)考慮供試品及其溶劑的特性。4-無(wú)菌及微生物檢查方法驗(yàn)證⒈可溶于十四烷酸異丙酯的膏劑和黏性油劑供試品。⒉水溶性供試品直接過(guò)濾。⒊可溶性固體制劑供試品。⒋裝有藥物的注射器供試品和具有導(dǎo)管的醫(yī)療器具的供試品。4-無(wú)菌及微生物檢查方法驗(yàn)證

直接接種法

供試品按規(guī)定量分別接入含培養(yǎng)細(xì)菌和真菌培養(yǎng)基的容器中，除另有規(guī)定外，每個(gè)容器中的培養(yǎng)基量應(yīng)符合接種的供試品體積不得大于培養(yǎng)基體積的10%。同時(shí)硫乙醇酸鹽培養(yǎng)基不得少于15ml、改良馬丁培養(yǎng)基不得少于10ml，培養(yǎng)基用量和高度應(yīng)經(jīng)方法驗(yàn)證。4-無(wú)菌及微生物檢查方法驗(yàn)證

培養(yǎng)及觀察

培養(yǎng)14天，如果培養(yǎng)基渾濁或培養(yǎng)14天后從外觀不能判斷是否長(zhǎng)菌，可取該培養(yǎng)液適量轉(zhuǎn)種至同種培養(yǎng)基或斜面上，培養(yǎng)細(xì)菌2天、真菌3天，觀察有無(wú)菌生長(zhǎng)或鏡檢進(jìn)行判斷。陰性對(duì)照不得有菌生長(zhǎng)。4-無(wú)菌及微生物檢查方法驗(yàn)證

結(jié)果判斷

⒈若供試品管均澄清，或雖顯渾濁無(wú)菌生長(zhǎng)，判供試品符合規(guī)定。⒉若供試品中任何1管顯混濁并確證有生長(zhǎng)供試品不符合規(guī)定。⒊除非能充分證明，檢出的微生物非供試品所含。⒋當(dāng)符合下列至少一個(gè)條件時(shí)，方可判復(fù)試。

4-無(wú)菌及微生物檢查方法驗(yàn)證⑴對(duì)無(wú)菌檢查試驗(yàn)所用的設(shè)備及環(huán)境的微生物監(jiān)控結(jié)果不符合無(wú)菌檢查法的要求。⑵回顧無(wú)菌實(shí)驗(yàn)過(guò)程，發(fā)現(xiàn)有可能引起微生物污染的因素；⑶陰性對(duì)照管有菌生長(zhǎng)。⑷供試品管中生長(zhǎng)的微生物經(jīng)鑒定后，確證微生物生長(zhǎng)是因無(wú)菌試驗(yàn)中所使用的物品和（或）無(wú)菌操作技術(shù)不當(dāng)引起的。⑸試驗(yàn)若經(jīng)確認(rèn)無(wú)效，應(yīng)重試。重試時(shí)，重新取同量供試品，依法重試，若無(wú)菌生長(zhǎng)，判供試品符合規(guī)定，若有菌生長(zhǎng)判供試品不符合規(guī)定。4-無(wú)菌及微生物檢查方法驗(yàn)證

方法驗(yàn)證的必要性⒈為保證檢驗(yàn)結(jié)果的可靠性，真實(shí)性，選擇正確的檢驗(yàn)方法是至關(guān)重要的。因此試驗(yàn)前必須對(duì)選擇的方法進(jìn)行驗(yàn)證。⒉證明所采用的方法是適宜的，確認(rèn)所采用的方法適宜于被檢供試品的微生物污染的檢驗(yàn)。

藥品無(wú)菌檢查和微生物檢查方法驗(yàn)證4-無(wú)菌及微生物檢查方法驗(yàn)證

檢驗(yàn)結(jié)果的影響因素⒈供試品的組分⒉環(huán)境影響⒊檢驗(yàn)方法⒋檢驗(yàn)條件4-無(wú)菌及微生物檢查方法驗(yàn)證⒈我國(guó)無(wú)菌和微生物檢驗(yàn)方法驗(yàn)證的概況

⒉國(guó)外無(wú)菌和微生物檢驗(yàn)方法驗(yàn)證的概況

⒊國(guó)外無(wú)菌和微生物檢驗(yàn)方法驗(yàn)證的概況

4-無(wú)菌及微生物檢查方法驗(yàn)證

藥品微生物檢驗(yàn)方法驗(yàn)證的基本要求

驗(yàn)證試驗(yàn)的設(shè)計(jì)需綜合全面考慮，主要有以下幾方面；⑴供試品特性⑵檢驗(yàn)?zāi)康蘑窃囼?yàn)全方面驗(yàn)證

4-無(wú)菌及微生物檢查方法驗(yàn)證

當(dāng)驗(yàn)證試驗(yàn)符合要求時(shí)，就可認(rèn)為在該試驗(yàn)條件下該供試品對(duì)微生物無(wú)抑菌作用或抑菌作用可忽略不計(jì)，供試品檢驗(yàn)結(jié)果可真實(shí)的體現(xiàn)。4-無(wú)菌及微生物檢查方法驗(yàn)證

⑷重新驗(yàn)證

藥品的生產(chǎn)工藝、制劑組分、檢驗(yàn)方法或檢驗(yàn)條件發(fā)生改變時(shí)，應(yīng)重新進(jìn)行驗(yàn)證，以確認(rèn)所發(fā)生的變化不影響該藥品中的微生物檢查。4-無(wú)菌及微生物檢查方法驗(yàn)證

驗(yàn)證試驗(yàn)用菌株的要求

⑴驗(yàn)證試驗(yàn)用菌株應(yīng)有代表性。⑵試驗(yàn)菌株應(yīng)選擇非致病性菌株。⑶試驗(yàn)菌宜選擇比較穩(wěn)定、重現(xiàn)性強(qiáng)的菌株。⑷菌株傳代次數(shù)不得超過(guò)第五代。

4-無(wú)菌及微生物檢查方法驗(yàn)證

試驗(yàn)用菌株的儲(chǔ)藏

菌種保藏的原則根據(jù)微生物菌種的生理、生化特性，在人工創(chuàng)造的條件下盡量降低微生物細(xì)胞的代謝強(qiáng)度，使細(xì)胞基本上處于休眠狀態(tài)，生長(zhǎng)繁殖受到抑制但不至于死亡，以減低菌種的變異率。4-無(wú)菌及微生物檢查方法驗(yàn)證

標(biāo)準(zhǔn)菌株的復(fù)活或培養(yǎng)物的制備應(yīng)按供應(yīng)商提供的說(shuō)明或按驗(yàn)證的方法進(jìn)行。

4-無(wú)菌及微生物檢查方法驗(yàn)證

低溫、干燥、缺氧、缺乏營(yíng)養(yǎng)等環(huán)境條件都可以抑制微生物的代謝和生長(zhǎng)繁殖，因此低溫、干燥和真空是菌種保藏的重要手段。標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備菌株經(jīng)純度和特性確認(rèn)后保存時(shí)，可將培養(yǎng)物等份懸浮于抗冷凍的培養(yǎng)基中，并分裝于小瓶中,建議采用低溫冷凍干燥，液氮儲(chǔ)存，超低溫冷凍(低于-70℃)等方法保存。

4-無(wú)菌及微生物檢查方法驗(yàn)證

冷凍菌株一旦解凍轉(zhuǎn)種制備工作菌株后,不得重新冷凍或再次使用。工作菌株不可代替標(biāo)準(zhǔn)菌株，標(biāo)準(zhǔn)菌株的商業(yè)衍生物僅可用作工作菌株。4-無(wú)菌及微生物檢查方法驗(yàn)證

不同的微生物，應(yīng)根據(jù)其生物特征來(lái)選擇最適宜的保藏方法，菌種的保藏方法一般分四個(gè)階段：4-無(wú)菌及微生物檢查方法驗(yàn)證⑴

挑選特征典型的純菌菌落。⑵確定保藏的合適菌體形態(tài)。⑶選擇最適宜的方法保藏。⑷定期對(duì)保藏的菌種進(jìn)行檢查。4-無(wú)菌及微生物檢查方法驗(yàn)證

菌種的傳代和使用

工作菌種的傳代次數(shù)應(yīng)嚴(yán)格控制，不得超過(guò)5代，（從菌種保藏中心獲得的標(biāo)準(zhǔn)菌株為第0代）防止過(guò)度的傳代造成菌種變異。

1代是指將活的培養(yǎng)物接種到新鮮培養(yǎng)基中，任何亞培養(yǎng)的形式均被認(rèn)為是轉(zhuǎn)種或傳代一次。必要時(shí)，實(shí)驗(yàn)室應(yīng)對(duì)工作菌株的特性和純度進(jìn)行確認(rèn)。4-無(wú)菌及微生物檢查方法驗(yàn)證

菌種的管理

1、使用菌種的單位，應(yīng)具備從事微生物工作的條件和設(shè)備。菌種應(yīng)由專人負(fù)責(zé)管理，管理人員應(yīng)具有微生物專業(yè)知識(shí)和技術(shù)水平，并應(yīng)具有較強(qiáng)的責(zé)任心。4-無(wú)菌及微生物檢查方法驗(yàn)證2、實(shí)驗(yàn)室必須建立菌種保存和使用文件化的程序管理制度；

包括：每支菌種標(biāo)注名稱、標(biāo)準(zhǔn)號(hào)、接種日期、傳代次數(shù)、進(jìn)出、收集、貯藏、保存、確認(rèn)試驗(yàn)以及銷毀的記錄、標(biāo)準(zhǔn)菌種的申購(gòu)記錄、從標(biāo)準(zhǔn)菌株到工作菌株操作記錄，如菌種定期轉(zhuǎn)種傳代，鑒定（純度、特性）、培養(yǎng)基和培養(yǎng)條件、菌種保存的位置和條件及其它需要的程序。4-無(wú)菌及微生物檢查方法驗(yàn)證3、菌種應(yīng)冷藏或冷凍保存，保存菌種的冰箱不得放置食品和易揮發(fā)性藥品，放置菌種應(yīng)有專用的冰箱，應(yīng)上鎖管理。

4、由專人按操作規(guī)程和有關(guān)要求定期進(jìn)行傳代，并定期對(duì)保存的菌種進(jìn)行檢查，一般每年

1～2次，（或定期更換凍干菌種）。

4、發(fā)現(xiàn)菌種的異常情況應(yīng)及時(shí)檢查。一旦發(fā)現(xiàn)菌種污染和變異現(xiàn)象，應(yīng)立即報(bào)告、研究處理。尤其長(zhǎng)期保存時(shí)。并詳細(xì)記錄4-無(wú)菌及微生物檢查方法驗(yàn)證

菌種不得隨意帶出實(shí)驗(yàn)室，外單位索取、購(gòu)買應(yīng)有證明和登記，并包裝嚴(yán)密。菌種處理應(yīng)嚴(yán)格按操作規(guī)程進(jìn)行，滅菌處理應(yīng)有詳細(xì)記錄。4-無(wú)菌及微生物檢查方法驗(yàn)證

菌懸液的制備與保存

參照《中國(guó)藥典》2010版附錄菌懸液的制備與保存。4-無(wú)菌及微生物檢查方法驗(yàn)證

供試品抑菌活性的處理對(duì)含抑菌活性的供試品在進(jìn)行微生物檢查前，應(yīng)對(duì)抑菌活性進(jìn)行處理，驗(yàn)證試驗(yàn)可根據(jù)供試品的物理或化學(xué)特性選擇下述方法來(lái)消除抑菌活性；⒈培養(yǎng)基稀釋法⒉中和法⒊薄膜過(guò)濾法⒋離心沉淀法4-無(wú)菌及微生物檢查方法驗(yàn)證

無(wú)菌檢查法方法驗(yàn)證

目的：以證明所采用的方法適合于該產(chǎn)品的無(wú)菌檢查，保證檢驗(yàn)結(jié)果的可靠性．

何時(shí)驗(yàn)證：當(dāng)建立產(chǎn)品的無(wú)菌檢查法時(shí)，應(yīng)進(jìn)行方法的驗(yàn)證，以證明所采用的方法適合于該產(chǎn)品的無(wú)菌檢查。若該產(chǎn)品的組分或原檢驗(yàn)條件發(fā)生改變時(shí)，檢查方法應(yīng)重新驗(yàn)證。4-無(wú)菌及微生物檢查方法驗(yàn)證

驗(yàn)證方法

驗(yàn)證時(shí)，按“供試品的無(wú)菌檢查”的規(guī)定及下列要求進(jìn)行操作。對(duì)每一試驗(yàn)菌應(yīng)逐一進(jìn)行驗(yàn)證。4-無(wú)菌及微生物檢查方法驗(yàn)證

菌種及菌液制備

參照《中國(guó)藥典》2010版附錄無(wú)菌檢查法方法驗(yàn)證菌懸液的制備與保存。

4-無(wú)菌及微生物檢查方法驗(yàn)證

驗(yàn)證方法薄膜過(guò)濾法⑴過(guò)濾⑵接種培養(yǎng)基⑶對(duì)照試驗(yàn)⑷培養(yǎng)4-無(wú)菌及微生物檢查方法驗(yàn)證

直接接種法、結(jié)果判斷、處理方法參照《中國(guó)藥典》2010版附錄無(wú)菌檢查法方法。

4-無(wú)菌及微生物檢查方法驗(yàn)證

微生物限度檢查方法驗(yàn)證4-無(wú)菌及微生物檢查方法驗(yàn)證

目的：增加試驗(yàn)方法的完整性、保證檢驗(yàn)結(jié)果的可

靠性。

何時(shí)驗(yàn)證：建立供試品的微生物限度檢查法時(shí)；供

試品的組分或原檢驗(yàn)條件發(fā)生改變可能影響

檢驗(yàn)結(jié)果時(shí)。

細(xì)菌、霉菌、酵母菌計(jì)數(shù)方法的驗(yàn)證4-無(wú)菌及微生物檢查方法驗(yàn)證

驗(yàn)證方法菌液制備50～100cfu/ml。驗(yàn)證方法試驗(yàn)組、菌液組、供試品對(duì)照組、稀釋劑對(duì)照組。結(jié)果判斷供試品組、對(duì)照組、稀釋劑對(duì)照組的菌回收率均不低70%。4-無(wú)菌及微生物檢查方法驗(yàn)證

驗(yàn)證方法

⑴按供試液的制備和細(xì)菌、霉菌及酵母菌計(jì)數(shù)所規(guī)定的方法及下列要求進(jìn)行。⑵對(duì)各試驗(yàn)菌的回收率應(yīng)逐一進(jìn)行驗(yàn)證。⑶驗(yàn)證試驗(yàn)至少應(yīng)進(jìn)行3次獨(dú)立的平行試驗(yàn)，并分別計(jì)算各試驗(yàn)菌每次試驗(yàn)的回收率。4-無(wú)菌及微生物檢查方法驗(yàn)證試驗(yàn)菌株大腸埃希菌、金黃色葡萄球菌、白色念珠菌、黑曲霉、枯草桿菌。菌液制備

同計(jì)數(shù)培養(yǎng)基的適用性檢查。4-無(wú)菌及微生物檢查方法驗(yàn)證

（1）試驗(yàn)組

①平皿法

②薄膜過(guò)濾法（2）菌液組

（3）供試品對(duì)照組（4）稀釋劑對(duì)照組4-無(wú)菌及微生物檢查方法驗(yàn)證結(jié)果判斷

在3次獨(dú)立的平行試驗(yàn)中⑴稀釋劑對(duì)照組的菌數(shù)回收率應(yīng)均不低于70%。⑵試驗(yàn)組的菌數(shù)回收率均不低于70%。⑶若試驗(yàn)組的菌數(shù)回收率低于70%，應(yīng)采用其他方法或使用聯(lián)合方法消除供試品的抑菌活性，并重新進(jìn)行方法驗(yàn)證。4-無(wú)菌及微生物檢查方法驗(yàn)證

驗(yàn)證試驗(yàn)存在的問(wèn)題及處理方法

存在問(wèn)題

進(jìn)行驗(yàn)證試驗(yàn)時(shí)，因沒(méi)有適宜的方法消除供試品中的抑菌作用而導(dǎo)致微生物回收的失敗。4-無(wú)菌及微生物檢查方法驗(yàn)證

處理方法

①驗(yàn)證試驗(yàn)中微生物回收的失敗可看成是因供試品的抗菌活性引起的，同時(shí)表明該供試品不能被試驗(yàn)菌污染。但是，供試品也可能僅對(duì)試驗(yàn)用菌株具有抑制作