《陸生野生脊椎動(dòng)物種質(zhì)資源樣本采集規(guī)范》征求意見(jiàn)稿

ICS?FORMTEXT07.080FORMTEXTC40FORMTEXT?????DBFORMTEXT--DBFORMTEXTXX/FORMTEXTXXXXX—FORMTEXTXXXXFORMTEXT?????FORMTEXT陸生野生脊椎動(dòng)物種質(zhì)資源樣本采集規(guī)范FORMTEXT?StandardforgermplasmresourcessamplecollectionofterrestrialvertebratesFORMDROPDOWNFORMTEXTXXXX-FORMTEXTXX-FORMTEXTXX發(fā)布FORMTEXTXXXX-FORMTEXTXX-FORMTEXTXX實(shí)施FORMTEXT安徽省市場(chǎng)監(jiān)督管理局????????發(fā)布DBXX/XXXXX—XXXX前??言本標(biāo)準(zhǔn)按照GB/T1.1-2020《標(biāo)準(zhǔn)化工作導(dǎo)則第1部分：標(biāo)準(zhǔn)化文件的結(jié)構(gòu)和起草規(guī)則》起草。本標(biāo)準(zhǔn)由安徽省林業(yè)局提出并歸口。本標(biāo)準(zhǔn)起草單位：黃山學(xué)院、安徽省林業(yè)局野生動(dòng)植物保護(hù)處、安徽省野生動(dòng)物疫源疫病監(jiān)測(cè)總站、安徽揚(yáng)子鱷國(guó)家級(jí)自然保護(hù)區(qū)管理局本標(biāo)準(zhǔn)主要起草人：呂順清吳月龍劉嵩于超邴曉慧王德青李偉姜賀周永康陸生野生脊椎動(dòng)物種質(zhì)資源樣本采集規(guī)范范圍本規(guī)范規(guī)定了安徽省陸生野生脊椎動(dòng)物種質(zhì)資源樣本采集規(guī)范，包括采集許可申請(qǐng)、樣本類型、樣本信息數(shù)據(jù)、采集方法、采集程序、臨時(shí)保存方式、運(yùn)輸方式等。本標(biāo)準(zhǔn)適用于安徽省內(nèi)相關(guān)大專院校、研究機(jī)構(gòu)、自然保護(hù)區(qū)管理機(jī)構(gòu)、動(dòng)物園、野生動(dòng)物繁育機(jī)構(gòu)等，其他機(jī)構(gòu)可參照?qǐng)?zhí)行。規(guī)范性引用文件下列文件對(duì)于本文件的應(yīng)用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，僅注日期的版本適用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改單）適用于本文件?！吨腥A人民共和國(guó)野生動(dòng)物保護(hù)法》（2022年12月30日）《中華人民共和國(guó)自然保護(hù)區(qū)條例》（2017年10月7日）《中華人民共和國(guó)生物安全法》（2020年10月17日）《陸生野生動(dòng)物疫源疫病監(jiān)測(cè)防控管理辦法》（國(guó)家林業(yè)局令2013第31號(hào)）LY/T2359-2014陸生野生動(dòng)物疫源疫病監(jiān)測(cè)技術(shù)規(guī)范術(shù)語(yǔ)和定義下列術(shù)語(yǔ)和定義適用于本文件。陸生野生脊椎動(dòng)物terrestrialvertebrate行肺呼吸，主要在陸地生境棲息、捕食或繁育的野生脊椎動(dòng)物。種質(zhì)資源樣本germplasmresourcessample含有物種全部或部分遺傳信息的DNA、細(xì)胞、精液、血液、組織、器官等。能夠中長(zhǎng)期保存，用于動(dòng)物學(xué)研究，或用于在未來(lái)技術(shù)成熟時(shí)恢復(fù)為完整的動(dòng)物個(gè)體。動(dòng)物組織tissue形態(tài)相同或相似、機(jī)能相同或密切相關(guān)的細(xì)胞群及其分泌物構(gòu)成的具有一定形態(tài)、能完成一定機(jī)能的結(jié)構(gòu)。動(dòng)物組織一般分為四類：上皮組織、結(jié)締組織、肌肉組織、神經(jīng)組織。組織樣本（DNA樣本）tissuesampleforDNAextraction保存質(zhì)量能夠滿足全基因組（包括線粒體基因組）提取的動(dòng)物組織。組織樣本（RNA樣本）tissuesampleforRNAextraction保存質(zhì)量能夠滿足RNA提取的動(dòng)物組織。動(dòng)物器官organ由幾種不同類型組織有機(jī)結(jié)合形成的、具有一定形態(tài)特征和生理機(jī)能的結(jié)構(gòu)，如睪丸、卵巢、心臟、肝臟、肺等。目標(biāo)與原則目標(biāo)規(guī)范陸生野生動(dòng)物種質(zhì)資源樣本采集工作，為動(dòng)物學(xué)研究、動(dòng)物保護(hù)提供科學(xué)保障。原則合法性原則野生動(dòng)物為國(guó)家所有。無(wú)論出于何種目的采集野生動(dòng)物或其部分樣本，應(yīng)當(dāng)具備相應(yīng)條件，符合生物安全管理規(guī)范，符合相關(guān)法律要求，并得到主管部門的許可?？茖W(xué)性原則野生動(dòng)物種質(zhì)資源樣本采集是科學(xué)性、專業(yè)性都非常強(qiáng)的工作，必須由專業(yè)人員或經(jīng)過(guò)一定專業(yè)培訓(xùn)的人員，按照一定的科學(xué)規(guī)范操作。全過(guò)程控制原則鑒于大自然中病毒、細(xì)菌等微生物無(wú)處不在，動(dòng)物種質(zhì)資源樣本存在被污染風(fēng)險(xiǎn)，因此必須實(shí)行全過(guò)程控制，從事前準(zhǔn)備、樣本采集、臨時(shí)保存、運(yùn)輸過(guò)程及保藏，每一步驟均須規(guī)范操作，以保證樣本的純潔性。5采集對(duì)象5.1陸生野生脊椎動(dòng)物類別a.哺乳類；b.鳥類；c.爬行類（淡水龜鱉類除外）5.2種質(zhì)資源樣本類別a.遺傳物質(zhì)（DNA）b.生殖細(xì)胞（精液、卵細(xì)胞）；c.組織（皮膚、肌肉、血液等）；d.器官（睪丸、卵巢、心臟等）。6申請(qǐng)?jiān)S可陸生野生脊椎動(dòng)物歸屬各級(jí)政府林業(yè)主管部門管理，采集陸生野生脊椎動(dòng)物樣本（包括野外無(wú)主動(dòng)物尸體）均需獲得主管部門的許可。采集國(guó)家一級(jí)保護(hù)野生動(dòng)物種質(zhì)資源樣本，應(yīng)當(dāng)向國(guó)家林業(yè)主管部門申請(qǐng)?jiān)S可；采集國(guó)家二級(jí)保護(hù)野生動(dòng)物種質(zhì)資源樣本，或到國(guó)家級(jí)自然保護(hù)區(qū)采集，應(yīng)當(dāng)向省級(jí)林業(yè)主管部門申請(qǐng)?jiān)S可；采集有重要生態(tài)、科學(xué)、社會(huì)價(jià)值的陸生野生動(dòng)物和省級(jí)重點(diǎn)保護(hù)野生動(dòng)物種質(zhì)資源樣本，或到省級(jí)、縣級(jí)自然保護(hù)區(qū)采集，應(yīng)當(dāng)向縣級(jí)以上林業(yè)主管部門申請(qǐng)?jiān)S可。7采集前準(zhǔn)備7.1大型儀器設(shè)備包括交通運(yùn)輸工具（車輛）、車載超低溫冰箱（-80℃）、車載普通冰箱（-20℃）、液氮罐等（見(jiàn)附錄1）。7.2小型器具包括解剖刀、手術(shù)剪、鑷子、凍存管、凍存盒、白大褂、口罩、乳膠手套、脫脂棉、紗布等（見(jiàn)附錄2）。小型器具應(yīng)清洗干凈、充分消毒，分門別類、整齊擺放于專用工具箱中備用。7.3化學(xué)試劑RNAlater、RNase抑制劑、無(wú)水乙醇、95%乙醇、去離子水等（見(jiàn)附錄3）?；瘜W(xué)試劑應(yīng)封裝于專用容器中，分門別類擺放于安全度高的車載專用試劑柜或試劑箱中備用。8采集8.1組織樣本采集8.1.1組織樣本（DNA樣本）根據(jù)采集對(duì)象種群數(shù)量情況，同一地區(qū)同一物種挑選1-10個(gè)個(gè)體。注意同物種樣本的采集地應(yīng)保持一定距離（根據(jù)動(dòng)物類群活動(dòng)范圍浮動(dòng)）。應(yīng)在每支凍存管上做好標(biāo)記，可用標(biāo)簽紙標(biāo)記采集編號(hào)（原始編號(hào)）粘貼至凍存管上，或用記號(hào)筆在凍存管上標(biāo)記；優(yōu)先選擇肌肉、內(nèi)臟等角質(zhì)化程度低的部位，每個(gè)個(gè)體采集1份（管）組織材料，每份組織材料約1克（黃豆大?。┲糜趦龃婀軆?nèi)；在每份組織材料的凍存管內(nèi)添加至少5倍體積的無(wú)水乙醇完全浸泡；組織材料在2-8℃或更低溫度條件下（冷藏）暫存；組織材料以-20℃（冷凍）或更低溫度盡快運(yùn)輸至保藏單位，優(yōu)先使用干冰等溫度低的運(yùn)輸條件。8.1.2組織樣本（RNA樣本）同一地區(qū)同一物種挑選1-3個(gè)個(gè)體。同物種樣本的采集地應(yīng)保持一定距離（可根據(jù)動(dòng)物類群活動(dòng)范圍調(diào)整）。解剖取樣要及時(shí)，在動(dòng)物個(gè)體死亡半小時(shí)內(nèi)完成解剖采樣。應(yīng)在每支凍存管上做好標(biāo)記，可用標(biāo)簽紙標(biāo)記采集編號(hào)（原始編號(hào)）粘貼至凍存管上，或用記號(hào)筆在凍存管上標(biāo)記；每個(gè)個(gè)體各器官（心、肝、脾、肺、腎等）采集3份（管）組織材料，每份組織材料約1克（黃豆大小）置于凍存管內(nèi)；在每份組織材料的凍存管內(nèi)添加至少5倍體積的RNAlater保存劑完全浸泡；組織材料在2-8℃條件下冷藏12小時(shí)（過(guò)夜）；組織材料在-20℃或更低溫度條件下（冷凍）暫存；組織材料以-20℃（冷凍）或更低溫度盡快運(yùn)輸至保藏單位，優(yōu)先使用干冰等溫度低的運(yùn)輸條件。8.1.3血液樣本同一地區(qū)同一物種挑選1-10個(gè)個(gè)體。注意同物種樣本的采集地應(yīng)保持一定距離（根據(jù)動(dòng)物類群活動(dòng)范圍浮動(dòng)）。應(yīng)在每支采血管上做好標(biāo)記，可用標(biāo)簽紙標(biāo)記采集編號(hào)（原始編號(hào)）粘貼至凍存管上，或用記號(hào)筆在采血管上標(biāo)記；用抗凝采血管對(duì)哺乳動(dòng)物每個(gè)個(gè)體采集1-5ml血液，對(duì)鳥類動(dòng)物每個(gè)個(gè)體采集0.5-1ml血液，采血量可根據(jù)動(dòng)物個(gè)體大小有所調(diào)整；將采血管上下緩慢顛倒混勻；血液樣本在2-8℃條件下（冷藏）暫存；血液樣本在2-8℃（冷藏）條件下盡快運(yùn)輸至保藏單位；如暫存、運(yùn)輸時(shí)間超過(guò)1周，血液樣本應(yīng)在-20℃（冷凍）條件下暫存，并以-20℃（冷凍）或更低溫度盡快運(yùn)輸至保藏單位，優(yōu)先使用干冰等溫度低的運(yùn)輸條件，避免因反復(fù)凍融造成血液樣本降解。8.1.4細(xì)胞樣本在動(dòng)物個(gè)體死亡半小時(shí)內(nèi)完成解剖采樣。野外采集細(xì)胞樣本工作量較大，需要專人操作。采樣過(guò)程中應(yīng)注意無(wú)菌操作，防止樣本污染。每支凍存管上應(yīng)該做好標(biāo)記，可用標(biāo)簽紙標(biāo)記采集編號(hào)（原始編號(hào)）粘貼至凍存管上，或用記號(hào)筆在凍存管上標(biāo)記；每個(gè)個(gè)體各器官（心、肝、脾、肺、腎等）采集2-3克組織材料，盡量剔除外層膜及結(jié)締組織；組織材料在75%酒精中浸泡5-10秒；組織材料在1XPBS中清洗3次；組織材料裝于含有DMEM的50ml離心管中，在2-8℃條件下（冷藏）運(yùn)回實(shí)驗(yàn)室；在實(shí)驗(yàn)室內(nèi)分離培養(yǎng)細(xì)胞，每份細(xì)胞樣本的細(xì)胞數(shù)量不少于1x106個(gè)；細(xì)胞樣本應(yīng)盡快運(yùn)輸至保藏單位。8.2樣本信息采集8.2.1數(shù)據(jù)文字信息采集分類學(xué)信息中文種名（中文物種名稱，如“揚(yáng)子鱷”）拉丁學(xué)名（根據(jù)物種命名法規(guī)命名的學(xué)名，包括屬名、種本名，如“Alligatorsinensis”）種下名稱（即亞種名，若有則須添加，如“Macacathibetanahuangshanensis”）綱名稱（中文和拉丁文同時(shí)填寫）目名稱（中文和拉丁文同時(shí)填寫）科名稱（中文和拉丁文同時(shí)填寫）采集信息采集號(hào)（自行命名，但需確保編碼原則統(tǒng)一性、編碼唯一性，可使用物種簡(jiǎn)稱字母+數(shù)字）采集地（填寫具體采集地點(diǎn)，至少描述到行政村級(jí)行政單位，如“休寧縣璜尖鄉(xiāng)璜尖村”；若為行車途中采集，須填寫道路名稱和離最近行政村間的距離，如“楊璜線距璜尖村4km處”。地點(diǎn)按照“中國(guó)行政區(qū)劃網(wǎng)”（）劃分標(biāo)準(zhǔn)填寫）經(jīng)度（采集地經(jīng)度，采用“度”格式，至少要到小數(shù)點(diǎn)后4位，例：E118.287859）緯度（采集地緯度，采用“度”格式，至少要到小數(shù)點(diǎn)后4位，例：N29.699644）海拔（采集地海拔，保留小數(shù)點(diǎn)后兩位，如128.49m）采集人（標(biāo)本具體采集人。如無(wú)確切采集人，可填單位或項(xiàng)目考察隊(duì)、采集隊(duì)等等）采集時(shí)間（注意規(guī)定的日期格式“yyyy-mm-dd”，不足位用“0”補(bǔ)齊，之間用“-”連接，如“2022-03-15”）采集方式（直接采集、網(wǎng)捕、燈誘、陷阱等）生境（包括農(nóng)田、森林、濕地、湖泊、河流等，家養(yǎng)動(dòng)物不填）保存單位（標(biāo)本保藏單位全稱）標(biāo)本信息物種鑒定方法（形態(tài)學(xué)/分子生物學(xué)鑒定）鑒定人（標(biāo)本鑒定人）鑒定時(shí)間（注意規(guī)定的日期格式“yyyy-mm-dd”，不足位用“0”補(bǔ)齊，之間用“-”連接，如“2023-03-15”）標(biāo)本號(hào)（優(yōu)先使用標(biāo)本館編號(hào)）標(biāo)本屬性（正模、配模、副模、地模、普通等等）標(biāo)本制作日期（注意規(guī)定的日期格式“yyyy-mm-dd”，不足位用“0”補(bǔ)齊，之間用“-”連接，如“2023-03-15”）保藏方式（標(biāo)本保藏方式，如浸泡、干制、冰凍等等）實(shí)物狀態(tài)（標(biāo)本實(shí)物狀態(tài)，如完整、破損等。非完整標(biāo)本可簡(jiǎn)單描述破損部位，如“尾部缺如”）標(biāo)本保藏單位標(biāo)本保藏位置（根據(jù)具體情況選擇填寫）標(biāo)本聯(lián)系人聯(lián)系郵箱組織樣品信息組織類型（可填血液、心、肝、脾、肺、腎、肌肉等）組織樣品采集號(hào)（根據(jù)具體情況選填）DNA條碼編號(hào)（根據(jù)具體情況選填）共享方式（如完全開(kāi)放共享、協(xié)議共享、暫不共享等）獲取途徑（標(biāo)本獲取途徑，如既有、采集、交換、捐贈(zèng)、罰沒(méi)、購(gòu)買等）聯(lián)系人（包括單位、地址、郵編、電話、電子信箱等）類群特有信息如獸類特有、鳥類特有、爬行類特有，可根據(jù)各類群情況自行增加字段填寫。8.2．2圖像信息采集生境照規(guī)范.1整體要求野生動(dòng)物生境照要求體現(xiàn)采樣地地貌、植被、水源等，家養(yǎng)動(dòng)物生境照要求體現(xiàn)飼養(yǎng)環(huán)境、喂食情況等；每個(gè)采樣地拍攝1-3張生境照；照片精度要求在1000萬(wàn)（2775×3700）像素值以上，以保障照片清晰度，保存格式為“jpg”格式。.1命名規(guī)范生境照以“采樣地（省市縣）”+英文半角“-”+阿拉伯?dāng)?shù)字“序號(hào)”+“.jpg”命名；只有一張照片時(shí)：采樣地-1.jpg，如：安徽省黃山市黃山區(qū)-1.jpg有兩張及以上照片時(shí)：采樣地-1.jpg、采集地-2.jpg，如：安徽省黃山市黃山區(qū)-1.jpg、安徽省黃山市黃山區(qū)-2.jpg；生境照存于一個(gè)文件夾內(nèi)，文件夾按“生境照”格式命名。工作照規(guī)范.1整體要求工作照要求體現(xiàn)工作場(chǎng)景、工作方式等；每個(gè)采樣地拍攝1-3張工作照；照片精度要求在1000萬(wàn)（2775×3700）像素值以上，以保障照片清晰度，保存格式為“jpg”格式。.2命名規(guī)范工作照以“工作內(nèi)容”+英文半角“-”+阿拉伯?dāng)?shù)字“序號(hào)”+“.jpg”命名；只有一張照片時(shí)：工作內(nèi)容-1.jpg，如：采集當(dāng)?shù)丶茵B(yǎng)動(dòng)物-1.jpg有兩張及以上照片時(shí)：工作內(nèi)容-1.jpg、工作內(nèi)容-2.jpg；工作照存于一個(gè)文件夾內(nèi)，文件夾按“工作照”格式命名。標(biāo)本（個(gè)體）照規(guī)范.1整體要求標(biāo)本應(yīng)拍攝成標(biāo)本外觀照，活體動(dòng)物應(yīng)拍攝成個(gè)體照；每個(gè)動(dòng)物個(gè)體拍攝1-3張全身入鏡照片，主要鑒別特征局部特寫照1-2張；像素大小:照片精度要求在1000萬(wàn)（2775×3700）像素值以上，以保障照片清晰度，保存格式為“jpg”格式。.2具體要求先拍攝個(gè)體對(duì)應(yīng)的標(biāo)簽，再拍攝該個(gè)體所有角度照片，這樣便于后期辨識(shí)對(duì)應(yīng)的照片；活體整體照（背面、背側(cè)面和腹面）需在擺拍造景下完成，其余特寫對(duì)背景無(wú)特殊要求（最好選擇深色、純色背景，便于后期圖片處理）；擺拍最好在原產(chǎn)地進(jìn)行，盡可能還原其生境（可選擇林緣開(kāi)闊區(qū)域或較安全、動(dòng)物不易逃脫的地方，需若干人配合)；如拍攝需在室內(nèi)完成，擺拍造景需根據(jù)物種生活習(xí)性完成；鑒別特征細(xì)節(jié)照：光圈要小，景深要淺，形態(tài)細(xì)節(jié)特征須清晰。.3命名規(guī)范標(biāo)本照以“標(biāo)本號(hào)”+英文半角“-”+阿拉伯?dāng)?shù)字“序號(hào)”+“.jpg”命名；只有一張照片時(shí)：標(biāo)本號(hào)-1.jpg，如：660315-1.jpg；有兩張及以上照